专利名称：一种中药小檗胺的糖基化小檗胺新分子的化学修饰方法
技术领域：
本发明是对中药小檗胺的糖基化学修饰的方法及发明糖基化小檗胺新分子的发 明创造，涉及改变天然药物结构和制备新有机分子的领域。
背景技术：
小檗胺系自小檗科植物提出的双苄基异喹啉类生物碱，具有促进白细胞增生、抗 炎、抗结核、抗矽肺、抗肿瘤、降血压、抗心肌缺氧缺血、抗心律失常等作用。小檗胺作用广 泛，该药为天然提取物，不良反应小，长期毒性很低。小檗胺及其衍生物均属钙调素拮抗剂 (Calmodulin antagonist)，对多种实体肿瘤细胞株(如肝癌，宫颈癌，黑色素瘤等)细胞具 有明显的增殖抑制作用，并呈剂量依赖关系。徐荣臻等研究发现小檗胺能降低K562细胞 bcr/abl融合基因表达，诱导K562细胞凋亡，但小檗胺对正常人淋巴细胞没有明显毒性，具 有治疗白血病的潜力。小檗胺糖基化属于利用糖类化学对天然药物进行化学饰的研究领域。糖类是自然 界广泛存在的一大类生物分子，它们参与了很多重要的生理和病理过程，这些过程的分子 基础都是糖类和蛋白质的相互作用。含糖类的分子在许多疾病，如恶性肿瘤、风湿性关节炎 以及消化性溃疡中起重要作用。小檗胺不溶于水，临床用药剂量偏大，为提高其水溶性与生 物相溶性，在小檗胺的酚羟基上糖基化，意义重大。有些糖类不仅本身具有抗肿瘤等多种生 物活性，同时发现其经过修饰后的衍生物也具有独特的作用。糖类及其衍生物抗肿瘤活性 的研究已成为生物化学和医学领域的前沿，对寻找新型糖修饰抗肿瘤药物有重要的意义。小檗胺的酚羟基上糖基化存在困难，关于生物碱小檗胺的酚羟基上糖基化至今未 见报道。首先与脂肪醇不同，酚中的芳环是个吸电子基团，在酸性条件下，与醇相比较，酚是 个较弱的亲核试剂，酚比醇酸性更强，通常PH=6-8，这就意味着在碱性条件下酚更易去质子 化；第二，由于羟基的供电子性质，酚是个两可亲核试剂，可能产生C-糖基化付产物；第三， 是来自于小檗胺上取代基对酚羟基上糖基化的空间位阻作用；第四，由于小檗胺是结构复 杂的生物碱，本身显碱性。
发明内容
本发明针对现有技术中的空白，作出进一步的探索，提供一是关于对中药小檗胺 的糖基化学修饰的方法及发明糖基化小檗胺新分子的专利，涉及改变天然药物结构和制备 新有机分子的领域，具体是在碱性条件下利用保护的糖卤代物和相转移催化剂对小檗胺的 酚羟基进行糖基化。本发明的具体实施方案如下
本发明是一种中药小檗胺的糖基化小檗胺新分子及其化学修饰方法，在碱性条件下利用保护的糖卤代物和相转移催化剂对小檗胺的酚羟基进行糖基化，具体制备步骤如下
1)、医药级小檗胺与碱液反应小檗胺与碱液的重量配比为1 100 50，碱液是由有 机相与水相组成，两溶剂重量配比为1 1 0，碱液浓度在2 0. 01mol/L,激烈搅拌5 1小时，反应温度控制在60 10°C ；
2)、添加相转移催化剂小檗胺与相转移催化剂的摩尔比为1 10 0. 5，在溶剂中激 烈搅拌1小时；
3)、加四酰基糖基卤代物小檗胺与四酰基糖基卤代物的摩尔比为1 5 0.5，激烈 搅拌8 1小时，反应过程通过薄层色谱法进行过程诊断，并停止反应；
4)、产物的后处理利用二氯甲烷对反应化合物进行萃取，萃取液经洗涤、干燥后，去浓 缩，经过硅胶柱色谱分离获得纯化的四酰基糖基化小檗胺，收率98 65% ；
5)、四酰基糖基化小檗胺在0.4M KOH甲醇溶液中碱处理，四酰基糖基化小檗胺占甲醇 溶液重量的10 1%，在室温下搅拌2小时，后处理，浓缩，经过硅胶柱色谱分离获得纯化的 糖基化小檗胺，收率98 85% ；
6)、糖基化小檗胺利用核磁共振的氢谱、碳谱和质谱进行结构确定。本发明所述的糖基化小檗胺分子的糖基包括核糖、脱氧核糖、木糖、阿拉伯糖、葡 萄糖、氨基葡萄糖、半乳糖、甘露糖、鼠李糖、岩藻糖，乳糖及合成组合的二糖，多糖，还包括 在以上糖的羟基上酰基化、硫酸化、磷酸化，及羟基上连接其他芳香族环、多种氨基酸。本发明所述的糖基化小檗胺包括氧-糖基化、硫-糖基化、碳-糖基化、氮-糖基 化。本发明所述的糖基化小檗胺包括糖基与小檗胺之间通过醚键、酯基、碱基、烃基连 接而成。本发明所述的保护的糖卤代物的保护基包括酰基，烃基，所述的酰基是指脂肪酰
基或芳香酰基。本发明所述的四酰基糖基卤代物包括四酰基糖基氟代物、四酰基糖基氯代物、四 酰基糖基溴代物、四酰基糖基碘代物；相转移催化剂指季铵盐，季鳞盐，冠醚，季铵碱；有机 相是含氯烃、酮、杂环溶剂或腈类；碱是指金属的氢氧化合物、金属碳酸盐、及银盐。本发明的优点(1)糖基化小檗胺水溶性提高；(2)糖基化时利用的是易得的糖基 供给体，反应活性高；(3)催化剂较普及，不昂贵；(4)反应液的处理要求不高，反应条件温 和；(5)糖基化反应转化率较高。
具体实施例方式实施例1
第一步医药级小檗胺与碱液反应小檗胺与碱液的重量配比为1 100 50，碱液是 由有机相与水相组成，两溶剂重量配比为1 1 0，有机相是含氯烃、酮、杂环溶剂或腈类， 碱是指金属的氢氧化合物、金属碳酸盐、及银盐，碱液浓度在2 0. Olmol/L，激烈搅拌5 1小时，反应温度控制在60 10°C。第二步添加相转移催化剂小檗胺与相转移催化剂的摩尔比为1 10 0.5，相 转移催化剂指季铵盐，季鳞盐，冠醚，季铵碱，在溶剂中激烈搅拌1小时。
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第三步加四酰基糖基卤代物小檗胺与四酰基糖基卤代物的摩尔比为1 5
0.5，四酰基糖基商代物包括四酰基糖基氟代物、四酰基糖基氯代物、四酰基糖基溴代物、四 酰基糖基碘代物，激烈搅拌8 1小时。反应过程通过薄层色谱法进行过程诊断，并停止反应。第四步产物的后处理利用二氯甲烷对反应化合物进行萃取，萃取液经洗涤、干 燥后，去浓缩，经过硅胶柱色谱分离获得纯化的四酰基糖基化小檗胺，收率98 65%。第五步四酰基糖基化小檗胺在0. 4M KOH甲醇溶液中碱处理，四酰基糖基化小檗 胺占甲醇溶液重量的10 1%，在室温下搅拌2小时，后处理，浓缩，经过硅胶柱色谱分离获 得纯化的糖基化小檗胺，收率98 85%。糖基化小檗胺利用核磁共振的氢谱、碳谱和质谱进行结构确定。
实施例2
按照实施例1的制备步骤和方法，反应在回流装置中进行。医药级小檗胺1克，置入0. 8 mol/L氢氧化钠溶液60毫升和60毫升三氯甲烷中，激烈搅拌3小时，反应温度控制在40°C， 添加1. 59克四丁基溴化铵催化剂，在溶剂中激烈搅拌1小时。然后添加1. 35克溴代-四 酰基葡萄糖，在40°C激烈搅拌4小时，薄层色谱法过程诊断，出现新的产物，利用二氯甲烷 对反应化合物进行萃取，萃取液经洗涤、干燥后，去浓缩，经过硅胶柱色谱分离获得纯化的 乙酰葡萄糖小檗胺。收率63%。四乙酰葡萄糖小檗胺在80毫升0. 4M KOH甲醇溶液中碱处 理，在室温下搅拌2小时，后处理，浓缩，经过硅胶柱色谱分离获得纯化的糖基化小檗胺，收 率98%，糖基化小檗胺利用核磁共振的氢谱、碳谱和质谱进行结构确定。
实施例3
按照实施例1的制备步骤和方法，反应在回流装置中进行。医药级小檗胺1克，置入0. 4 mol/L碳酸钾溶液30毫升和30毫升丙酮中，激烈搅拌2小时，反应温度控制在40°C，添加1.12克苄基三乙基氯化铵催化剂，在溶剂中激烈搅拌1小时，然后添加1. 01克溴代-四苯 甲酰基半乳糖，在40°C激烈搅拌6小时，薄层色谱法过程诊断，出现新的产物，利用二氯甲 烷对反应化合物进行萃取，萃取液经洗涤、干燥后，去浓缩，经过硅胶柱色谱分离获得纯化 的四苯甲酰基半乳糖小檗胺，收率73%四苯甲酰基半乳糖小檗胺在90毫升0. 4M KOH甲醇 溶液中碱处理，在室温下搅拌2小时，后处理，浓缩，经过硅胶柱色谱分离获得纯化的糖基 化小檗胺，收率97%，糖基化小檗胺利用核磁共振的氢谱、碳谱和质谱进行结构确定。项目资助浙江省重点科技计划2005C22037 ；国家自然科学基金30870553。
权利要求
1.一种中药小檗胺的糖基化小檗胺新分子的化学修饰方法，其特征在于，在碱性条件 下利用保护的糖卤代物和相转移催化剂对小檗胺的酚羟基进行糖基化，具体制备步骤如 下1)、医药级小檗胺与碱液反应小檗胺与碱液的重量配比为1 100 50，碱液是由有 机相与水相组成，两溶剂重量配比为1 1 0，碱液浓度在2 0. 01mol/L,激烈搅拌5 1小时，反应温度控制在60 10°C ；2)、添加相转移催化剂小檗胺与相转移催化剂的摩尔比为1 10 0. 5，在溶剂中激 烈搅拌1小时；3)、加糖基卤代物小檗胺与四酰基糖基卤代物的摩尔比为1 5 0.5，激烈搅拌8 1小时，反应过程通过薄层色谱法进行过程诊断，并停止反应；4)、产物的后处理利用二氯甲烷对反应化合物进行萃取，萃取液经洗涤、干燥后，去浓 缩，经过硅胶柱色谱分离获得纯化的四酰基糖基化小檗胺，收率98 65% ；5)、四酰基糖基化小檗胺在0.4M KOH甲醇溶液中碱处理，四酰基糖基化小檗胺占甲醇 溶液重量的10 1%，在室温下搅拌2小时，后处理，浓缩，经过硅胶柱色谱分离获得纯化的 糖基化小檗胺，收率98 85% ；6)、糖基化小檗胺利用核磁共振的氢谱、碳谱和质谱进行结构确定。
2.根据权利要求1所述的中药小檗胺的糖基化小檗胺新分子的化学修饰方法，其特征 在于，所述的糖基化小檗胺分子的糖基包括核糖、脱氧核糖、木糖、阿拉伯糖、葡萄糖、氨基 葡萄糖、半乳糖、甘露糖、鼠李糖、岩藻糖，乳糖及合成组合的二糖，多糖，还包括在以上糖的 羟基上酰基化、硫酸化、磷酸化，及羟基上连接其他芳香族环、多种氨基酸。
3.根据权利要求1所述的中药小檗胺的糖基化小檗胺新分子的化学修饰方法，其特征 在于，所述的糖基化小檗胺包括氧_糖基化、硫_糖基化、碳_糖基化、氮_糖基化。
4.根据权利要求1所述的中药小檗胺的糖基化小檗胺新分子的化学修饰方法，其特征 在于，所述的糖基化小檗胺包括糖基与小檗胺之间通过醚键、酯基、碱基、烃基连接而成。
5.根据权利要求1所述的中药小檗胺的糖基化小檗胺新分子的化学修饰方法，其特征 在于，所述的保护的糖商代物的保护基包括酰基，烃基，所述的酰基是指脂肪酰基或芳香酰 基。
6.根据权利要求1所述的中药小檗胺的糖基化小檗胺新分子的化学修饰方法，其特征 在于，所述的四酰基糖基商代物包括四酰基糖基氟代物、四酰基糖基氯代物、四酰基糖基溴 代物、四酰基糖基碘代物。
7.根据权利要求1所述的中药小檗胺的糖基化小檗胺新分子的化学修饰方法，其特征 在于，所述的相转移催化剂指季铵盐，季鳞盐，冠醚，季铵碱。
8.根据权利要求1所述的中药小檗胺的糖基化小檗胺新分子的化学修饰方法，其特征 在于，所述的有机相是含氯烃、酮、杂环溶剂或腈类。
9.根据权利要求1所述的中药小檗胺的糖基化小檗胺新分子的化学修饰方法，其特征 在于，所述的碱是指金属的氢氧化合物、金属碳酸盐、及银盐。
全文摘要
本发明是一种对中药小檗胺的糖基化学修饰的方法及发明糖基化小檗胺新分子的发明创造，涉及改变天然药物结构和制备新有机分子的领域，具体采用碱性条件下利用保护的糖卤代物和相转移催化剂对小檗胺的酚羟基进行糖基化，糖基化收率98～65%，本发明提供一种糖基化小檗胺水溶性提高，糖基化时利用的是易得的糖基供给体，反应活性高，催化剂较普及，不昂贵，反应液的处理要求不高，反应条件温和，糖基化反应转化率较高的中药小檗胺的糖基化小檗胺新分子的化学修饰方法。
文档编号C08B37/00GK102002074SQ20101054938
公开日2011年4月6日 申请日期2010年11月18日 优先权日2010年11月18日
发明者俞永平, 崔艳丽, 毛建卫, 王培培 申请人:浙江大学