一种从茶多糖中获取均一果胶多糖的方法及获得的均一果胶多糖的制作方法

专利名称：一种从茶多糖中获取均一果胶多糖的方法及获得的均一果胶多糖的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种从茶多糖中获取均一果胶多糖的方法及获得的均一果胶多糖，具体说，是涉及一种从茶叶多糖或茶渣多糖中获取聚半乳糖醛酸类均一果胶多糖的方法及获得的聚半乳糖醛酸类均一果胶多糖。
背景技术：
茶叶为山茶科植物的芽叶。《神农本草》记载“茶苦而寒，阴中之阴，沉也降也，最能降火”。已为民间广泛应用。现代医学证明茶具有清凉，解毒，止渴，利尿，消疲提神，消脂去腻，清心怡神，延年益寿等药理功效。随着医药科技的进步，对茶叶成分，药用价值的深入研究，发现茶叶中约含500多种成分，具有药用价值的有250多种。茶多糖是从茶叶中提取出来的具有多种生物活性且结构复杂的多糖复合物，是茶叶中继茶多酚之后发现的又一重要的生理活性物质。自1986年日本报道了茶叶多糖具有降血糖作用以来，陆续发现茶叶多糖具有降血糖、降血脂、防辐射作用、抗凝血、抗血栓、抗氧化、增强机体免疫功能等多种生物活性，从而使茶多糖的研究开发成为了当前研究的热点。关于茶多糖的研究主要涉及以下内容申请号为201010141786.0的中国专利文献中公开了ー种分离提取天然茶多糖的方法，采用无机沸石分子筛的吸附柱除去茶多酚、咖啡因和部分色素，然后加入蛋白沉淀剂除蛋白，超滤后得茶多糖；申请号为201010141764. 4的中国专利文献中公开了ー种综合分离提取茶多糖、茶氨酸、茶多酚和咖啡因的方法，茶溶液经沸石分子筛后，依次以水、氨水溶液、こ醇溶液洗脱得茶多糖、茶氨酸、茶多酚和咖啡因粗产物；申请号为200910244874. O的中国专利文献中公开了ー种超滤膜分离甜茶多糖的方法，采用超滤法分离茶多糖；申请号为200910068255.0的中国专利文献中公开了ー种从粗老绿茶中提取茶多糖和茶多酚的方法，用醇沉，超滤和CTAB沉淀法制备茶多糖提取物；申请号为200810106962. X的中国专利文献中公开了ー种茶多糖的分离纯化制备方法及降血糖活性，采用微波辅助溶剂萃取、真空酶提、径向高效色谱分离得茶多糖；申请号为200810106964.9的中国专利文献中公开了ー种茶多糖的分离纯化制备方法及结构鉴定，采用微波辅助溶剂萃取、真空酶提、径向高效色谱分离得粗茶多糖并进行了简单的结构分析；申请号为200810106963.4的中国专利文献中公开了ー种茶多糖的分离纯化制备方法及抗肿瘤活性，同样采用微波辅助溶剂萃取、真空酶提、径向高效色谱分离得茶多糖并筛选其抗肿瘤活性；申请号为200710037543. O的中国专利文献中公开了一种高纯度茶多糖的制备エ艺，茶叶用酶溶液或有机溶剂浸泡除去多酚等杂质，再过离子交换树脂脱色脱蛋白；申请号为200510042629. 3的中国专利文献中公开了ー种从茶叶中提取茶多酚副产咖啡碱和茶多糖的方法，采用复合酶解提取和水提茶多酚，咖啡碱和茶多糖；申请号为03114898. O的中国专利文献中公开了ー种从提取过茶多酚的下脚料中提取茶多糖的方法，通过加果胶酶提取茶多糖；申请号为96113134. 9的中国专利文献中公开了ー种在茶叶中提取茶多酚及其副产品的方法；申请号为97109115. 3的中国专利文献中公开了ー种从粗、老茶鲜叶提取多糖、多酚混晶エ艺方法；申请号为01134065. 7的中国专利文献中公开了ー种茶多糖的提取方法；申请号为02110999. O的中国专利文献中公开了一种纯化茶多糖及提成方法，水提后加蛋白消除剂除蛋白等杂质达到纯化目的；申请号为200410015905. 2的中国专利文献中公开了ー种从茶叶中综合提取茶多糖、茶多酚、茶氨酸、咖啡碱的方法，在微波作用下多次重复浸泡提取茶多糖；申请号为200310114694. 3的中国专利文献中公开了ー种茶叶有效成分综合制备エ艺；申请号为200610055145. 7的中国专利文献中公开了从茶叶中提取茶多酚、茶氨酸、茶多糖、茶色素的方法；申请号为200610125174. 6的中国专利文献中公开了ー种茶多糖及其制备方法和用途，水提醇沉后，沉淀水溶并用不同超滤膜超滤，按不同分子量截留分离。综上所研究的内容可见，目前对茶多糖的研究主要是茶多糖的获取和活性研究方面，其中关于茶多糖的获取方法主要有水提醇沉法、酸浸提法、碱浸提法、酶法提取法；但其中酸浸提法和碱浸提法很容易使部分茶多糖水解，从而破坏茶多糖的活性结构，而酶法提取法不仅成本较高而且会降低含糖醛酸部分的茶多糖得率；而且在公开的纯化技术中多数还涉及有毒有害试剂。虽然研究报道茶多糖中含有聚半乳糖醛酸类果胶多糖，但如何从茶多糖中分离纯化得聚半乳糖醛酸类均一果胶多糖，至今未见任何相关技术报道。

发明内容
针对现有技术存在的上述问题和缺陷，本发明的目的是提供一种从茶叶多糖或茶渣多糖中获取聚半乳糖醛酸类均一果胶多糖的方法及获得的聚半乳糖醛酸类均一果胶多糖，为聚半乳糖醛酸类均一果胶多糖的研究和生产提供一条新途径。为实现上述发明目的，本发明采用的技术方案如下
—种从茶多糖中获取均一果胶多糖的方法，包括如下步骤a)将干燥茶叶或提取茶多酚后的干燥茶渣粉碎至40 100目；b)用水于100°C提取二次，第一次加水体积是茶叶或茶渣质量的15倍，第二次加水体积是茶叶或茶渣质量的10倍；合并二次提取液，浓缩，加入こ醇进行醇沉，控制醇沉体系中的こ醇浓度为40vol%或70vol% ;醇沉24小时后，过滤，收集沉淀；对沉淀进行离心和冷冻干燥，得茶叶多糖粗品或茶渣多糖粗品；C)将步骤b)获得的茶叶多糖粗品或茶洛多糖粗品上样于DEAE-Sepharose柱,依次用水、O. lmol/L的氯化钠水溶液、O. 2mol/L的氯化钠水溶液进行洗脱；使用硫酸-苯酚法跟踪洗脱曲线，分别收集利用O. lmol/L的氯化钠水溶液和O. 2mol/L的氯化钠水溶液进行洗脱的有效部位；d)将步骤c)得到的有效部位分别用适量水或O. 2mol/L的氯化钠水溶液进行溶解，离心，取上清液上样于丙烯葡聚糖凝胶色谱柱或葡聚糖凝胶色谱柱，用水或O. 2mol/L的氯化钠水溶液进行洗脱；利用示差折光检测器检测跟踪洗脱曲线，根据洗脱曲线收集洗脱的有效部位；浓缩，冷冻干燥，即得均一果胶多糖均为1，4连接的聚半乳糖醛酸类果胶多糖。由上述方法可获取如下均一果胶多糖中的任意ー种或ニ种以上平均分子量为2. 7X IO5道尔顿，半乳糖糖醛酸含量为90. 7%，甲酷化度为28. 0%，こ酰酯化度为I. 97%。的1，4连接的聚半乳糖醛酸类果胶多糖，记为TPS4-1B ；
平均分子量为3. I X IO4道尔顿，半乳糖糖醛酸含量为100%，甲酯化度为28. 4%，乙酰酯化度为4. 84%。的1，4连接的聚半乳糖醛酸类果胶多糖，记为TPS4-2A ；平均分子量为I. OX IO4道尔顿，半乳糖糖醛酸含量为99. 5%，甲酷化度为35. 0%，こ酰酯化度为O的1，4连接的聚半乳糖醛酸类果胶多糖，记为TPS7-1B ；平均分子量为6. 5X IO4道尔顿，半乳糖糖醛酸含量为87. 6%，甲酷化度为9. 5%，乙酰酯化度为57. 2%。的1，4连接的聚半乳糖醛酸类果胶多糖，记为TPS7-2A ；平均分子量为8. 6X IO5道尔顿，半乳糖糖醛酸含量为99. 0%，甲酷化度为30. 5%，こ酰酯化度为I. 27%。的1，4连接的聚半乳糖醛酸类果胶多糖，记为TPSR4-1B ；平均分子量为3. 7X IO5道尔顿，半乳糖糖醛酸含量为98. 5%，甲酷化度为28. 3%，こ酰酯化度为9. 15%。的1，4连接的聚半乳糖醛酸类果胶多糖，记为TPSR4-2A ；平均分子量为6. 5X IO4道尔顿，半乳糖糖醛酸含量为100%，甲酷化度为33. 3%，乙酰酯化度为O的1，4连接的聚半乳糖醛酸类果胶多糖，记为TPSR7-1B ；平均分子量为2. 8 X IO5道尔顿，半乳糖糖醛酸含量为100%，甲酯化度为26. 1%，乙酰酯化度为7. 97%。的1，4连接的聚半乳糖醛酸类果胶多糖，记为TPSR7-2A。一种所述的TPS4-1B均一果胶多糖的制备，包括如下步骤11)将干燥茶叶粉碎至40 100目；12)用水于100°C提取二次，第一次加水体积是茶叶质量的15倍，第二次加水体积是茶叶质量的10倍；合并二次提取液，浓缩，加入こ醇进行醇沉，控制醇沉体系中的こ醇浓度为40vol% ;醇沉24小时后，过滤，收集沉淀；对沉淀进行离心和冷冻干燥，得茶叶多糖粗品;13)将步骤12)获得的茶叶多糖粗品上样于DEAE-Sepharose柱，依次用水、O. lmol/L的氯化钠水溶液进行洗脱；使用硫酸-苯酚法跟踪洗脱曲线，收集利用O. lmol/L的氯化钠水溶液进行洗脱的有效部位；14)将步骤13)得到的有效部位用适量O. 2mol/L的氯化钠水溶液进行溶解，离心，取上清液上样于丙烯葡聚糖凝胶色谱柱，用O. 2mol/L的氯化钠水溶液进行洗脱；利用示差折光检测器检测跟踪洗脱曲线，根据洗脱曲线收集洗脱的有效部位；浓缩，冷冻干燥，即得所述的均一果胶多糖。一种所述的TPS4-2A均一果胶多糖的制备，包括如下步骤21)将干燥茶叶粉碎至40 100目；22)用水于100°C提取二次，第一次加水体积是茶叶质量的15倍，第二次加水体积是茶叶质量的10倍；合并二次提取液，浓缩，加入こ醇进行醇沉，控制醇沉体系中的こ醇浓度为40vol% ;醇沉24小时后，过滤，收集沉淀；对沉淀进行离心和冷冻干燥，得茶叶多糖粗品;23)将步骤22)获得的茶叶多糖粗品上样于DEAE-S印harose柱，依次用水、O. lmol/L的氯化钠水溶液和O. 2mol/L的氯化钠水溶液进行洗脱；使用硫酸_苯酚法跟踪洗脱曲线，收集利用O. 2mol/L的氯化钠水溶液进行洗脱的有效部位；
24)将步骤23)得到的有效部位用适量水进行溶解，离心，取上清液上样于葡聚糖凝胶色谱柱，用水进行洗脱；利用示差折光检测器检测跟踪洗脱曲线，根据洗脱曲线收集洗脱的有效部位；浓缩，冷冻干燥，即得所述的均一果胶多糖。
一种所述的TPS7-1B均一果胶多糖的制备，包括如下步骤31)将干燥茶叶粉碎至40 100目；32)用水于100°C提取二次，第一次加水体积是茶叶质量的15倍，第二次加水体积是茶叶质量的10倍；合并二次提取液，浓缩，加入こ醇进行醇沉，控制醇沉体系中的こ醇浓度为70vol% ;醇沉24小时后，过滤，收集沉淀；对沉淀进行离心和冷冻干燥，得茶叶多糖粗品;33)将步骤32)获得的茶叶多糖粗品上样于DEAE-Sepharose柱，依次用水、O. lmol/L的氯化钠水溶液进行洗脱；使用硫酸-苯酚法跟踪洗脱曲线，收集利用O. lmol/L的氯化钠水溶液进行洗脱的有效部位；34)将步骤33)得到的有效部位用适量O. 2mol/L的氯化钠水溶液进行溶解，离心，取上清液上样于丙烯葡聚糖凝胶色谱柱，用O. 2mol/L的氯化钠水溶液进行洗脱；利用示差折光检测器检测跟踪洗脱曲线，根据洗脱曲线收集洗脱的有效部位；浓缩，冷冻干燥，即得所述的均一果胶多糖。一种所述的TPS7-2A均一果胶多糖的制备，包括如下步骤41)将干燥茶叶粉碎至40 100目；42)用水于100°C提取二次，第一次加水体积是茶叶质量的15倍，第二次加水体积是茶叶质量的10倍；合并二次提取液，浓缩，加入こ醇进行醇沉，控制醇沉体系中的こ醇浓度为70vol% ;醇沉24小时后，过滤，收集沉淀；对沉淀进行离心和冷冻干燥，得茶叶多糖粗品;43)将步骤42)获得的茶叶多糖粗品上样于DEAE-Sepharose柱，依次用水、O. lmol/L的氯化钠水溶液和O. 2mol/L的氯化钠水溶液进行洗脱；使用硫酸_苯酚法跟踪洗脱曲线，收集利用O. 2mol/L的氯化钠水溶液进行洗脱的有效部位；44)将步骤43)得到的有效部位用适量水进行溶解，离心，取上清液上样于葡聚糖凝胶色谱柱，用水进行洗脱；利用示差折光检测器检测跟踪洗脱曲线，根据洗脱曲线收集洗脱的有效部位；浓缩，冷冻干燥，即得所述的均一果胶多糖。一种所述的TPSR4-1B均一果胶多糖的制备，包括如下步骤51)将提取茶多酚后的干燥茶渣粉碎至40 100目；52)用水于100°C提取二次，第一次加水体积是茶渣质量的15倍，第二次加水体积是茶渣质量的10倍；合并二次提取液，浓缩，加入こ醇进行醇沉，控制醇沉体系中的こ醇浓度为40vol% ;醇沉24小时后，过滤，收集沉淀；对沉淀进行离心和冷冻干燥，得茶渣多糖粗品;53)将步骤52)获得的茶渣多糖粗品上样于DEAE-S印harose柱，依次用水、O. lmol/L的氯化钠水溶液进行洗脱；使用硫酸-苯酚法跟踪洗脱曲线，收集利用0. lmol/L的氯化钠水溶液进行洗脱的有效部位；54)将步骤53)得到的有效部位用适量水进行溶解，离心，取上清液上样于丙烯葡聚糖凝胶色谱柱，用水进行洗脱；利用示差折光检测器检测跟踪洗脱曲线，根据洗脱曲线收集洗脱的有效部位；浓缩，冷冻干燥，即得所述的均一果胶多糖。一种所述的TPSR4-2A均一果胶多糖的制备，包括如下步骤 61)将提取茶多酚后的干燥茶渣粉碎至40 100目；
62)用水于100°C提取二次，第一次加水体积是茶渣质量的15倍，第二次加水体积是茶渣质量的10倍；合并二次提取液，浓缩，加入こ醇进行醇沉，控制醇沉体系中的こ醇浓度为40vol% ;醇沉24小时后，过滤，收集沉淀；对沉淀进行离心和冷冻干燥，得茶渣多糖粗品;63)将步骤62)获得的茶洛多糖粗品上样于DEAE-Sepharose柱，依次用水、O. lmol/L的氯化钠水溶液和O. 2mol/L的氯化钠水溶液进行洗脱；使用硫酸_苯酚法跟踪洗脱曲线，收集利用O. 2mol/L的氯化钠水溶液进行洗脱的有效部位；64)将步骤63)得到的有效部位用适量水进行溶解，离心，取上清液上样于葡聚糖凝胶色谱柱，用水进行洗脱；利用示差折光检测器检测跟踪洗脱曲线，根据洗脱曲线收集洗脱的有效部位；浓缩，冷冻干燥，即得所述的均一果胶多糖。一种所述的TPSR7-1B均一果胶多糖的制备，包括如下步骤
71)将提取茶多酚后的干燥茶渣粉碎至40 100目；72)用水于100°C提取二次，第一次加水体积是茶渣质量的15倍，第二次加水体积是茶渣质量的10倍；合并二次提取液，浓缩，加入こ醇进行醇沉，控制醇沉体系中的こ醇浓度为70vol% ;醇沉24小时后，过滤，收集沉淀；对沉淀进行离心和冷冻干燥，得茶渣多糖粗品;73)将步骤72)获得的茶渣多糖粗品上样于DEAE-S印harose柱，依次用水、O. lmol/L的氯化钠水溶液进行洗脱；使用硫酸-苯酚法跟踪洗脱曲线，收集利用O. lmol/L的氯化钠水溶液进行洗脱的有效部位；74)将步骤73)得到的有效部位用适量水进行溶解，离心，取上清液上样于丙烯葡聚糖凝胶色谱柱，用水进行洗脱；利用示差折光检测器检测跟踪洗脱曲线，根据洗脱曲线收集洗脱的有效部位；浓缩，冷冻干燥，即得所述的均一果胶多糖。一种所述的TPSR7-2A均一果胶多糖的制备，包括如下步骤81)将提取茶多酚后的干燥茶渣粉碎至40 100目；82)用水于100°C提取二次，第一次加水体积是茶渣质量的15倍，第二次加水体积是茶渣质量的10倍；合并二次提取液，浓缩，加入こ醇进行醇沉，控制醇沉体系中的こ醇浓度为70vol% ;醇沉24小时后，过滤，收集沉淀；对沉淀进行离心和冷冻干燥，得茶渣多糖粗品;83)将步骤82)获得的茶洛多糖粗品上样于DEAE-Sepharose柱，依次用水、O. lmol/L的氯化钠水溶液和0. 2mol/L的氯化钠水溶液进行洗脱；使用硫酸_苯酚法跟踪洗脱曲线，收集利用0. 2mol/L的氯化钠水溶液进行洗脱的有效部位；84)将步骤83)得到的有效部位用适量0. 2mol/L的氯化钠水溶液进行溶解，离心，取上清液上样于葡聚糖凝胶色谱柱，用0. 2mol/L的氯化钠水溶液进行洗脱；利用示差折光检测器检测跟踪洗脱曲线，根据洗脱曲线收集洗脱的有效部位；浓缩，冷冻干燥，即得所述的均一果胶多糖。与现有技术相比，本发明首次从茶多糖中分离纯化获得了均为1，4连接的聚半乳糖醛酸类果胶多糖，而且制备方法简单，得率高，整个制备过程中没有使用酸、碱及其它有毒有害试剂，可充分保证茶多糖活性结构的稳定性，适合规模化生产；尤其是，使用本发明方法可以有效利用提取茶多酚后的茶渣，可节约资源，实现废物再利用，对聚半乳糖醛酸类均一果胶多糖的研究和生产具有重要意义。


图1-1是实施例I获取均一果胶多糖TPS4-1B的凝胶色谱洗脱曲线；图1-2是实施例I获取的均一果胶多糖TPS4-1B的高效液相凝胶色谱(HPGPC)图；
图1-3是实施例I获取的均一果胶多糖TPS4-1B在こ酰化后的GC图谱(a图)与标准单糖在こ酰化后的GC图谱(b图)对比图；图1-4是实施例I获取的均一果胶多糖TPS4-1B的碳谱图；图1-5是实施例I获取的均一果胶多糖TPS4-1B进行甲基化后的GC-MS分析图谱；图2-1是实施例2获取均一果胶多糖TPS4-2A的第一次凝胶色谱洗脱曲线；图2-2是实施例2获取均一果胶多糖TPS4-2A的第二次凝胶色谱洗脱曲线；图2-3是实施例2获取的均一果胶多糖TPS4-2A的高效液相凝胶色谱(HPGPC)图；图2-4是实施例2获取的均一果胶多糖TPS4-2A在こ酰化后的GC图谱(a图)与标准单糖在こ酰化后的GC图谱(b图)对比图；图2-5是实施例2获取的均一果胶多糖TPS4-2A的碳谱图；图2-6是实施例2获取的均一果胶多糖TPS4-2A进行甲基化后的GC-MS分析图谱；图3-1是实施例3获取均一果胶多糖TPS7-1B的凝胶色谱洗脱曲线；图3-2是实施例3获取的均一果胶多糖TPS7-1B的高效液相凝胶色谱(HPGPC)图；图3-3是实施例3获取的均一果胶多糖TPS7-1B在こ酰化后的GC图谱(a图)与标准单糖在こ酰化后的GC图谱(b图)对比图；图3-4是实施例3获取的均一果胶多糖TPS7-1B的碳谱图；图3-5是实施例3获取的均一果胶多糖TPS7-1B进行甲基化后的GC-MS分析图谱；图4-1是实施例4获取均一果胶多糖TPS7-2A的凝胶色谱洗脱曲线；图4-2是实施例4获取的均一果胶多糖TPS7-2A的高效液相凝胶色谱(HPGPC)图；图4-3是实施例4获取的均一果胶多糖TPS7-2A在こ酰化后的GC图谱(a图)与标准单糖在こ酰化后的GC图谱(b图)对比图；图4-4是实施例4获取的均一果胶多糖TPS7-2A的碳谱图；图4-5是实施例4获取的均一果胶多糖TPS7-2A进行甲基化后的GC-MS分析图谱；图5-1是实施例5获取均一果胶多糖TPSR4-1B的凝胶色谱洗脱曲线；图5-2是实施例5获取的均一果胶多糖TPSR4-1B的高效液相凝胶色谱(HPGPC)图5-3是实施例5获取的均一果胶多糖TPSR4-1B在こ酰化后的GC图谱(a图)与标准单糖在こ酰化后的GC图谱(b图)对比图；图5-4是实施例5获取的均一果胶多糖TPSR4-1B的碳谱图；图5-5是实施例5获取的均一果胶多糖TPSR4-1B进行甲基化后的GC-MS分析图谱；图6-1是实施例6获取均一果胶多糖TPSR4-2A的凝胶色谱洗脱曲线；图6-2是实施例6获取的均一果胶多糖TPSR4-2A的高效液相凝胶色谱(HPGPC)图；图6-3是实施例6获取的均一果胶多糖TPSR4-2A在こ酰化前后的GC图谱对比图；
图6-4是实施例6获取的均一果胶多糖TPSR4-2A的碳谱图；图6-5是实施例6获取的均一果胶多糖TPSR4-2A进行甲基化后的GC-MS分析图谱；图7-1是实施例7获取均一果胶多糖TPSR7-1B的凝胶色谱洗脱曲线；图7-2是实施例7获取的均一果胶多糖TPSR7-1B的高效液相凝胶色谱(HPGPC)图；图7-3是实施例7获取的均一果胶多糖TPSR7-1B在こ酰化后的GC图谱(a图)与标准单糖在こ酰化后的GC图谱(b图)对比图；图7-4是实施例7获取的均一果胶多糖TPSR7-1B的碳谱图；图7-5是实施例7获取的均一果胶多糖TPSR7-1B进行甲基化后的GC-MS分析图谱；图8-1是实施例8获取均一果胶多糖TPSR7-2A的凝胶色谱洗脱曲线；图8-2是实施例8获取的均一果胶多糖TPSR7-2A的高效液相凝胶色谱(HPGPC)图；图8-3是实施例8获取的均一果胶多糖TPSR7-2A在こ酰化后的GC图谱(a图)与标准单糖在こ酰化后的GC图谱(b图)对比图；图8-4是实施例8获取的均一果胶多糖TPSR7-2A的碳谱图；图8-5是实施例8获取的均一果胶多糖TPSR7-2A进行甲基化后的GC-MS分析图
-i'Tfeレ曰。
具体实施例方式下面结合实施例对本发明作进ー步详细、完整地说明。下述实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。实施例I :制备均一果胶多糖TPS4-1B11)将干燥茶叶粉碎至40 100目；12)用水于100°C提取二次，第一次加水体积是茶叶质量的15倍，第二次加水体积是茶叶质量的10倍；合并二次提取液，浓缩，加入こ醇进行醇沉，控制醇沉体系中的こ醇浓度为40vol% ;醇沉24小时后，过滤，收集沉淀；对沉淀进行离心和冷冻干燥，得茶叶多糖粗品;
13)将步骤12)获得的茶叶多糖粗品上样于DEAE-Sepharose柱，依次用水、O. lmol/L的氯化钠水溶液进行洗脱；使用硫酸-苯酚法跟踪洗脱曲线，收集利用O. lmol/L的氯化钠水溶液进行洗脱的有效部位；14)将步骤13)得到的有效部位用适量O. 2mol/L的氯化钠水溶液进行溶解，离心，取上清液上样于丙烯葡聚糖凝胶色谱柱Sephacryl S-300 High Resolution,用O. 2mol/L的氯化钠水溶液进行洗脱；利用Shodex R1-102示差折光检测器检测跟踪洗脱曲线，根据洗脱曲线(见图1-1所示)收集洗脱的有效部位；浓缩，冷冻干燥，即得所述的均一果胶多糖TPS4-1B，总得率0. 74wt%。一、分子量测定采用高效液相凝胶色谱(HPGPC)法色谱柱为KS-805和KS-804串联；流动相为O. 2mol/L的氯化钠水溶液；柱温40°C ;流速0. 8mL/min ;进样体积20 μし取分子量已知的DextranP-系列标准葡聚糖 Ρ_5，Ρ-10，Ρ-20，Ρ-50，Ρ-100，Ρ-200，Ρ-400和Ρ-800各2mg，分别用流动相O. 2mol/L的氯化钠水溶液配制成2mg/mL的溶液；以IOOOOrpm离心IOmin ;取上清液,姆次进样20 μ L ;以分子量的对数值对保留时间做标准曲·线。取待测样品2mg,用流动相O. 2mol/L的氯化钠水溶液配制成2mg/mL的溶液；以IOOOOrpm离心IOmin ;取上清液，进样20 μ L，进行高效液相凝胶色谱测试。根据测定的样品保留时间，可从标准曲线中求得样品的平均分子量。标准曲线的绘制处理及分子量计算由GPC软件自动完成。图1-2为得到的均一果胶多糖TPS4-1B的高效液相凝胶色谱(HPGPC)图，由图1_2可说明所获得的多糖为均一多糖。经测算，所获得的均一果胶多糖TPS4-1B的平均分子量为2. 7X IO5道尔顿。ニ、结构鉴定I)完全酸水解及薄层分析取2mg TPS4-1B样品，置于安剖瓶中，加入2M TFA4mL,封ロ，121°C水解2h，水解完毕，多次加甲醇蒸干除去TFA。然后加O. ImL蒸馏水溶解样品，PEI-纤维素板上与标准单糖对照进行TLC分析，初步测定多糖中单糖残基的种类，并判断是否含糖醛酸及水解反应是否完全。展开剂为こ酸こ酯吡啶水こ酸(5:5:3: l，v/v)。显色剂为苯胺-邻苯ニ甲酸，喷洒后于100°C加热5min显色。TLC分析表明TPS4-1B为酸性多糖。2)还原糖醛酸取IOOmg TPS4-1B样品，溶于20mL蒸馏水中，搅拌至完全溶解；カロ200mg碳ニ亚胺(CMC)，搅拌，用O. lmol/L的盐酸水溶液调体系的pH=4. 75，控制在pH=4. 75下搅拌反应3小时；逐滴加入新配制的2mol/L的NaBH4水溶液200mL，同时滴加3mol/L的盐酸水溶液使体系的PH值保持在中性，滴加过程约需2h ;滴毕后继续搅拌10分钟；将反应液转入透析袋中，进行流水透析48小时；再用蒸馏水透析一天；冷冻干燥；冻干后再按上述方法重复2次。3)对糖醛酸还原后的样品进行完全酸水解，方法參见I);然后进行こ酰化完全酸水解后的样品加甲醇蒸干三次，重复操作以完全除尽TFA ;水解后残余物加入50mg NaBH4和2mL水，室温还原反应过夜；加冰醋酸反应以除去过量的NaBH4,于旋转蒸发仪上浓缩至粘稠液体，加入甲醇-冰醋酸(5 I)3-5mL，蒸干三次，再加甲醇蒸干两次，得到白色粉末，放入烘箱105°C 15min以除去水分，加入3mLこ酸酐，101°C烘箱中こ酰化反应lh，取出，多次加甲苯50°C水浴减压共沸蒸干至粉末状；加适量水溶解，加氯仿萃取三次，合并氯仿层，用水洗三次，分出氯仿层，用无水硫酸钠干燥、浓缩后进行GC-MS分析。图1-3是所获取的均一果胶多糖TPS4-1B在こ酰化后的GC图谱(a图)与标准单糖在こ酰化后的GC图谱(b图)对比图；在13图中，自左至右依次为鼠李糖、岩藻糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖对应的特征峰；将3图与b图比较可知所获取的均一果胶多糖TPS4-1B在こ酰化后的GC图谱中只有半乳糖特征峰，从而可推测TPS4-1B由半乳糖醛酸组成。4)碳谱分析将TPS4-1B样品用重水溶解，浓度为O. lmg/mL,进行13C-NMR分析；图1-4是获取的均一果胶多糖TPS4-1B的碳谱图；由图1_4可见该多糖中不含中性糖(60-62ppm区间未见有CH2信号)，与单糖组成结果吻合；176和172ppm分别为半乳 糖醒酸羧基碳信号和半乳糖醒酸甲酯羧基碳信号，异头碳位于IOO-IOlppm,表明其构型为α构型，79-80ppm为a-D半乳糖醛酸(及甲酯)4位碳信号，69_72ppm为C2，C3和C5信号，54ppm为甲酯碳信号。5)甲基化分析取5mg经糖醛酸还原后的样品，置于25mL圆底烧瓶中，经P2O5干燥过夜，然后加入干燥的DMSO 3mL，再加入氢氧化钠粉末500mg，密闭搅拌I小时；滴加碘甲烷O. 2mL,约15min滴完，滴毕搅拌反应20min ;再滴加碘甲烷O. 5mL,滴毕搅拌反应20min ；继续滴加碘甲烷O. 5mL,滴毕搅拌反应I小时；加水2mL终止反应，加入氯仿3mL萃取，氯仿层用水洗涤3次，蒸干去除氯仿；残余物用2mol/L的三氟こ酸(TFA)水溶液于120°C水解2小时；蒸干，然后加入IOOmg硼氢化钠和2mL水，还原反应过夜，加冰醋酸破坏多余硼氢化钠后加入甲醇/冰醋酸(体积比为5 I)反复多次蒸干后，加入醋酐于100°Cこ酰化I小时；加入2mL水和碳酸氢钠粉末使醋酐分解，然后用氯仿萃取，水洗涤，无水硫酸钠干燥；进行GC-MS分析；图1-5是获取的均一果胶多糖TPS4-1B进行甲基化后的GC-MS分析图谱；其中的a图为均一果胶多糖TPS4-1B进行甲基化后的GC图，b图为GC图中的27. 8Imin峰所对应的质谱图，c图为GC图中的32. 02min峰所对应的质谱图；由图1_5可见TPS4_1B经糖醛酸还原后的样品中仅含端基半乳糖(27. 8min)和1，4连接的半乳糖(32. Omin)，表明TPS4-1B经糖醛酸还原后的样品为直链1，4连接的半乳聚糖，从而进一歩表明TPS4-1B为直链1，4连接的聚半乳糖醛酸。6)高碘酸氧化分析精确称取TPS4-1B样品50mg，加50mL 15 20mmol/LNaI04水溶液，于4-20°C条件下避光放置，间或振摇，于4h，24h，48h…间隔时间取样，稀释250倍后，使用紫外分光光度仪在233nm处测定吸光度A，随着NaIO4消耗，吸光度值逐渐下降直至达到ー个稳定值，将测得样品溶液的吸光度值与原NaIO4溶液的吸光度值比较；分析结果表明样品TPS4-1B中Imol的糖基消耗O. 97mol的NaIO4,表明其连接方式为1，4连接。三、半乳糖糖醛酸含量測定以浓度为O. 5wt%的氢氧化钠水溶液配制浓度为O. 15wt%的间羟联苯试液10mL，待用；准确称取238. 4mg四硼酸纳，用浓度为98%的浓硫酸溶液配制浓度为O. 0125mol/L的四硼酸纳-硫酸试液50mL，待用；准确称取半乳糖醛酸标准品和待测样品各2. 53mg,分别用25mL水配成半乳糖醛酸标准溶液(101. 2μ g/mL)和样品溶液；标准曲线绘制取6个洁净大试管，依次加入O μ L，50 μ L，100 μ L，150 μ L，200 μ L，250 μ L半乳糖醛酸标准溶液，补加水至250 μ L，冰浴冷却，加入1. 5mL四硼酸纳-硫酸试液，摇匀，沸水保温5分钟，取出，冰浴冷却至室温后，以微量加液器加25 μ L间羟联苯试液，摇匀后，在520nm处测定光吸收，以O管做空白对照，绘制标准曲线Y=32. 451Χ-0. 012，R2=0. 999。平行3组分别吸取样品溶液200 μ L，定容到250 μ L，其余操作同标准曲线制备。测定光吸收值，由标准曲线计算含量。
经测算，所获得的均一果胶多糖TPS4-1B中的半乳糖糖醛酸含量为90. 7%。四、进行甲酯化和こ酰酯化分析I)主要仪器GC-MS: Thermo TRACE DSQ,附 FID 检测器；色谱柱及色谱条件DB-624 (30mX0. 32mmX I. 8um，Agilent)，进行甲酯化含量测定的柱温为65°C，进行こ酰化含量測定的柱温为100°C，进样ロ温度为200°C，检测器温度为320°C ;载气为高纯氮气，流速为2. OmL/min，分流比为5 1，进样体积为O. I μ L ;2)样品处理精密称取2. OOmg待测样品至IOmL EP管中，每管加入I. 2mL超纯水，密闭，室温超声lOmin，加入O. 4mL浓度为2mol/L的氢氧化钠水溶液，于25°C放置lh，加入O. 4mL浓度为2mol/L的盐酸水溶液，终止皂化反应，调pH至2. O ;摇匀，分别精确移取400 μ L转入液相小瓶，再各加200 μ L100mg/L异丙醇内标溶液，密闭待测，每个样品平行测量4份；3)标准溶液构建分别配制浓度为20、40、60、80、100mg/L的甲醇标准水溶液和こ酸标准水溶液，并以此浓度梯度构建标准曲线。分别以标准溶液的浓度为横坐标，以标准溶液的峰面积与异丙醇内标溶液的峰面积比为纵坐标，得回归方程甲醇，Y=O. 0089X+0. 0369，R2=O. 9981 ’乙酸，Y=O. 0052X+0. 0574，R2=O. 9935。4)样品测定用所建立的GC-FID定量方法测定样品中的甲酯化和こ酰酯化含量，并计算甲酯化度(DS￥)和こ酰酯化度(DSi):甲酷化度按公式进行，其中W￥%为甲酯化含量，DS￥~W￥%Χ5·5 ;こ酰酯化度按公式进行，其中ら％为甲酯含量，DSWJXM1M ;注由于甲酯化度较大，所以需对多糖链中平均糖基分子量进行修正，M1为修正后的分子量，即M1=IQOW^a-W甲)176)；经测定，所获得的均一果胶多糖TPS4-1B中，甲酯化含量为50. 84mg/g,甲酯化度为28. 0%，こ酰酯化含量为2. 32mg/g,こ酰酯化度为I. 97%0。实施例2 :制备均一果胶多糖TPS4-2A21)将干燥茶叶粉碎至40 100目；22)用水于100°C提取二次，第一次加水体积是茶叶质量的15倍，第二次加水体积是茶叶质量的10倍；合并二次提取液，浓缩，加入こ醇进行醇沉，控制醇沉体系中的こ醇浓度为40vol% ;醇沉？小时后，过滤，收集沉淀；对沉淀进行离心和冷冻干燥，得茶叶多糖粗品;23)将步骤22)获得的茶叶多糖粗品上样于DEAE-Sepharose柱，依次用水、O. lmol/L的氯化钠水溶液和O. 2mol/L的氯化钠水溶液进行洗脱；使用硫酸_苯酚法跟踪洗脱曲线，收集利用O. 2mol/L的氯化钠水溶液进行洗脱的有效部位；24)将步骤23)得到的有效部位用适量水进行溶解，离心，取上清液上样于葡聚糖凝胶色谱柱SuperdeX200，用水进行洗脱；利用Shodex R1-102示差折光检测器检测跟踪洗脱曲线，根据洗脱曲线(见图2-1所示)收集洗脱的有效部位；再对收集的有效部位用水溶液进行洗脱，利用Shodex R1-102示差折光检测器检测跟踪洗脱曲线，根据洗脱曲线(见图
2-2所示)收集再次洗脱的有效部位；浓缩，冷冻干燥，即得所述的均一果胶多糖TPS4-2A， 总得率6. 80wt%o图2-3为得到的均一果胶多糖TPS4-2A的高效液相凝胶色谱(HPGPC)图，由图2_3可说明所获得的多糖为均一多糖。參照实施例I中所述的分子量測定方法测算得知所获得的均一果胶多糖TPS4-2A的平均分子量为3. I X IO4道尔顿。參照实施例I中所述的结构鉴定内容对所获得的均一果胶多糖TPS4-2A进行结构鉴定TPS4-2A完全酸水解后，TLC分析表明其为酸性多糖，含糖醛酸；图2-4是获取的均一果胶多糖TPS4-2A在こ酰化后的GC图谱(a图)与标准单糖在こ酰化后的GC图谱(b图)对比图；在13图中，自左至右依次为鼠李糖、岩藻糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖对应的特征峰；将a图与b图比较可知所获取的均一果胶多糖TPS4-2A在こ酰化后的GC图谱中只有半乳糖特征峰，从而可推測TPS4-2A由半乳糖醛酸组成；图2-5是获取的均一果胶多糖TPS4-2A的碳谱图；图2-6是获取的均一果胶多糖TPS4-2A进行甲基化后的GC-MS分析图谱，其中的a图为均一果胶多糖TPS4-2A进行甲基化后的GC图，b图为GC图中的27. 8Imin峰所对应的质谱图，c图为GC图中的32. OOmin峰所对应的质谱图；通过结构分析得知本实施例所获取的多糖也为1，4连接的聚半乳糖醛酸类均一果月父多糖。參照实施例I中所述的半乳糖糖醛酸含量測定方法，测算得知本实施例所获取的均一果胶多糖中的半乳糖糖醛酸含量为100%。參照实施例I中所述的甲酯化和こ酰酯化分析方法，測定得知本实施例所获取的均一果胶多糖中甲酯化含量为51. 57mg/g,甲酷化度为28. 4% ;こ酰酯化含量为I. 61mg/g,こ酰酯化度为4. 84%0。实施例3 :制备均一果胶多糖TPS7-1B31)将干燥茶叶粉碎至40 100目；32)用水于100°C提取二次，第一次加水体积是茶叶质量的15倍，第二次加水体积是茶叶质量的10倍；合并二次提取液，浓缩，加入こ醇进行醇沉，控制醇沉体系中的こ醇浓度为70vol% ;醇沉24小时后，过滤，收集沉淀；对沉淀进行离心和冷冻干燥，得茶叶多糖粗品;33)将步骤32)获得的茶叶多糖粗品上样于DEAE-Sepharose柱，依次用水、O. lmol/L的氯化钠水溶液进行洗脱；使用硫酸-苯酚法跟踪洗脱曲线，收集利用O. lmol/L的氯化钠水溶液进行洗脱的有效部位；
34)将步骤33)得到的有效部位用适量O. 2mol/L的氯化钠水溶液进行溶解，离心，取上清液上样于丙烯葡聚糖凝胶色谱柱Sephacryl S-300 High Resolution,用O. 2mol/L的氯化钠水溶液进行洗脱；利用Shodex R1-102示差折光检测器检测跟踪洗脱曲线(见图
3-1所示)收集洗脱的有效部位；浓缩，冷冻干燥，即得所述的均一果胶多糖TPS7-1B，总得率-A. 45wt%0图3-2为得到的均一果胶多糖TPS7-1B的高效液相凝胶色谱(HPGPC)图，由图3_2可说明所获得的多糖为均一多糖。參照实施例I中所述的分子量測定方法测算得知所获得的均一果胶多糖TPS7-1B的平均分子量为I. OX IO4道尔顿。參照实施例I中所述的结构鉴定内容对所获得的均一果胶多糖TPS7-1B进行结构鉴定TPS7-1B完全酸水解后，TLC分析表明其为酸性多糖，含糖醛酸；图3-3是所获取的均一果胶多糖TPS7-1B在こ酰化后的GC图谱(a图)与标准单糖在こ酰化后的GC图谱(b图)对比图；在13图中，自左至右依次为鼠李糖、岩藻糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖对应的特征峰；将3图与b图比较可知所获取的均一果胶多糖TPS7-1B在こ酰化后的GC图谱中只有半乳糖特征峰，从而可推测TPS7-1B由半乳糖醛酸组成。图3-4是获取的均一果胶多糖TPS7-1B的碳谱图；图3-5是获取的均一果胶多糖TPS7-1B进行甲基化后的GC-MS分析图谱，其中的a图为均一果胶多糖TPS7-1B进行甲基化后的GC图，b图为GC图中的27. 38min峰所对应的质谱图，c图为GC图中的31. 50min峰所对应的质谱图；通过结构分析得知本实施例所获取的多糖也为1，4连接的聚半乳糖醛酸类均一果月父多糖。參照实施例I中所述的半乳糖糖醛酸含量測定方法，测算得知本实施例所获取的均一果胶多糖中的半乳糖糖醛酸含量为99. 5%。參照实施例I中所述的甲酯化和こ酰酯化分析方法，測定得知本实施例所获取的均一果胶多糖中甲酯化含量为63. 61mg/g,甲酷化度为35. 0% ；こ酰酯化含量为Omg/g，乙酰酯化度为O。实施例4 :制备均一果胶多糖TPS7-2A41)将干燥茶叶粉碎至40 100目；42)用水于100°C提取二次，第一次加水体积是茶叶质量的15倍，第二次加水体积是茶叶质量的10倍；合并二次提取液，浓缩，加入こ醇进行醇沉，控制醇沉体系中的こ醇浓度为70vol% ;醇沉24小时后，过滤，收集沉淀；对沉淀进行离心和冷冻干燥，得茶叶多糖粗品;43)将步骤42)获得的茶叶多糖粗品上样于DEAE-Sepharose柱，依次用水、O.lmol/L的氯化钠水溶液和O. 2mol/L的氯化钠水溶液进行洗脱；使用硫酸_苯酚法跟踪洗脱曲线，收集利用O. 2mol/L的氯化钠水溶液进行洗脱的有效部位；44)将步骤43)得到的有效部位用适量水进行溶解，离心，取上清液上样于葡聚糖凝胶色谱柱SuperdeX200，用水进行洗脱；利用Shodex R1-102示差折光检测器检测跟踪洗脱曲线(见图4-1所示)收集洗脱的有效部位；浓缩，冷冻干燥，即得所述的均一果胶多糖TPS7-2A，总得率3. 57wt%0图4-2为得到的均一果胶多糖TPS7-2A的高效液相凝胶色谱(HPGPC)图，由图4_2可说明所获得的多糖为均一多糖。
參照实施例I中所述的分子量測定方法测算得知所获得的均一果胶多糖TPS7-2A的平均分子量为6. 5 X IO4道尔顿。參照实施例I中所述的结构鉴定内容对所获得的均一果胶多糖TPS7-2A进行结构鉴定TPS7-2A完全酸水解后，TLC分析表明其为酸性多糖，含糖醛酸；图4-3是所获取的均一果胶多糖TPS7-2A在こ酰化后的GC图谱(a图)与标准单糖在こ酰化后的GC图谱(b图)对比图；在13图中，自左至右依次为鼠李糖、岩藻糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖对应的特征峰；将3图与b图比较可知所获取的均一果胶多糖TPS7-2A在こ酰化后的GC图谱中只有半乳糖特征峰，从而可推测TPS7-2A由半乳糖醛酸组成。图4-4是获取的均一果胶多糖TPS7-2A的碳谱图；图4-5是获取的均一果胶多糖TPS7-2A进行甲基化后的GC-MS分析图谱，其中的a图为均一果胶多糖TPS7-2A进行甲基化后的GC图，b图为GC图中的26. 53min峰所对应的质谱图，c图为GC图中的31. 64min峰所对应的质谱图；通过结构分析得知本实施例所获取的多糖也为1，4连接的聚半乳糖醛酸类均一果月父多糖。參照实施例I中所述的半乳糖糖醛酸含量測定方法，测算得知本实施例所获取的均一果胶多糖中的半乳糖糖醛酸含量为87. 6%。參照实施例I中所述的甲酯化和こ酰酯化分析方法，測定得知本实施例所获取的均一果胶多糖中甲酯化含量为17. 19mg/g,甲酷化度为9. 5% ;こ酰酯化含量为18. 98mg/g,こ酰酯化度为57. 2%0。实施例5 :制备均一果胶多糖TPSR4-1B51)将提取茶多酚后的干燥茶渣粉碎至40 100目；52)用水于100°C提取二次，第一次加水体积是茶渣质量的15倍，第二次加水体积是茶渣质量的10倍；合并二次提取液，浓缩，加入こ醇进行醇沉，控制醇沉体系中的こ醇浓度为40vol% ;醇沉24小时后，过滤，收集沉淀；对沉淀进行离心和冷冻干燥，得茶渣多糖粗品;53)将步骤52)获得的茶渣多糖粗品上样于DEAE-S印harose柱，依次用水、
O.lmol/L的氯化钠水溶液进行洗脱；使用硫酸-苯酚法跟踪洗脱曲线，收集利用O. lmol/L的氯化钠水溶液进行洗脱的有效部位；54)将步骤53)得到的有效部位用适量水进行溶解，离心，取上清液上样于丙烯葡聚糖凝胶色谱柱Sephacryl S-300 High Resolution,用水进行洗脱；利用Shodex R1-102示差折光检测器检测跟踪洗脱曲线，根据洗脱曲线(见图5-1所示)收集洗脱的有效部位；浓缩，冷冻干燥，即得所述的均一果胶多糖TPSR4-1B，总得率2. 37wt%。图5-2为得到的均一果胶多糖TPSR4-1B的高效液相凝胶色谱(HPGPC)图，由图
5-2可说明所获得的多糖为均一多糖。參照实施例I中所述的分子量測定方法测算得知所获得的均一果胶多糖TPSR4-1B的平均分子量为8. 6 X IO5道尔顿。參照实施例I中所述的结构鉴定内容对所获得的均一果胶多糖TPSR4-1B进行结 构鉴定TPSR4-1B完全酸水解后，TLC分析表明其为酸性多糖，含糖醛酸；图5-3是所获取的均一果胶多糖TPSR4-1B在こ酰化后的GC图谱(a图)与标准单糖在こ酰化后的GC图谱(b图)对比图；在b图中，自左至右依次为鼠李糖、岩藻糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖对应的特征峰；将3图与b图比较可知所获取的均一果胶多糖TPSR4-1B在こ酰化后的GC图谱中只有半乳糖特征峰，从而可推测TPSR4-1B由半乳糖醛酸组成。图5-4是获取的均一果胶多糖TPSR4-1B的碳谱图；由图5_4可见该多糖中不含中性糖(60-62ppm区间未见有CH2信号)，与单糖组成结果吻合；170ppm为半乳糖醒酸甲酯羧基碳信号，异头碳位于99-100ppm,表明其构型为α构型，78ppm为a-D半乳糖醒酸(及甲酷)4位碳信号，67-72ppm为C2，C3和C5信号，53ppm为甲酯碳信号。图5-5是获取的均一果胶多糖TPSR4-1B进行甲基化后的GC-MS分析图谱，其中的a图为均一果胶多糖TPSR4-1B进行甲基化后的GC图，b图为GC图中的27. 66min峰所对应的质谱图，c图为GC图中的31. 80min峰所对应的质谱图；由图5_5可见TPSR4_1B经糖醒酸还原后的样品中仅含端基半乳糖(27. 66min)和1,4连接的半乳糖(31.8min),表明TPSR4-1B经糖醛酸还原后的样品为直链1，4连接的半乳聚糖，从而进ー步表明TPSR4-1B为直链1，4连接的聚半乳糖醛酸。经高碘酸氧化分析得知样品TPSR4-1B中Imol的糖基消耗O. 95mol的NaIO4,表明其连接方式为1，4连接。综上结构分析得知本实施例所获取的多糖也为1，4连接的聚半乳糖醛酸类均一果月父多糖。參照实施例I中所述的半乳糖糖醛酸含量測定方法，测算得知本实施例所获取的均一果胶多糖中的半乳糖糖醛酸含量为99. 0%。參照实施例I中所述的甲酯化和こ酰酯化分析方法，測定得知本实施例所获取的均一果胶多糖中甲酯化含量为55. 45mg/g,甲酷化度为30. 5% ；こ酰酯化含量为4. 22mg/g,こ酰酯化度为I. 27%。。实施例6 :制备均一果胶多糖TPSR4-2A61)将提取茶多酚后的干燥茶渣粉碎至40 100目；62)用水于100°C提取二次，第一次加水体积是茶渣质量的15倍，第二次加水体积是茶渣质量的10倍；合并二次提取液，浓缩，加入こ醇进行醇沉，控制醇沉体系中的こ醇浓度为40vol% ;醇沉24小时后，过滤，收集沉淀；对沉淀进行离心和冷冻干燥，得茶渣多糖粗品; 63)将步骤62)获得的茶洛多糖粗品上样于DEAE-Sepharose柱，依次用水、
O.lmol/L的氯化钠水溶液和O. 2mol/L的氯化钠水溶液进行洗脱；使用硫酸_苯酚法跟踪洗脱曲线，收集利用O. 2mol/L的氯化钠水溶液进行洗脱的有效部位；64)将步骤63)得到的有效部位用适量水进行溶解，离心，取上清液上样于葡聚糖凝胶色谱柱SuperdeX200，用水进行洗脱；利用Shodex R1-102示差折光检测器检测跟踪洗脱曲线，根据洗脱曲线(见图6-1所示)收集洗脱的有效部位；浓缩，冷冻干燥，即得所述的均一果胶多糖TPSR4-2A，总得率15. 12wt%。 图6-2为得到的均一果胶多糖TPSR4-2A的高效液相凝胶色谱(HPGPC)图，由图
6-2可说明所获得的多糖为均一多糖。參照实施例I中所述的分子量測定方法测算得知所获得的均一果胶多糖TPSR4-2A的平均分子量为3. 7 X IO5道尔顿。參照实施例I中所述的结构鉴定内容对所获得的均一果胶多糖TPSR4-2A进行结构鉴定TPSR4-2A完全酸水解后，TLC分析表明其为酸性多糖，含糖醛酸；图6-3是所获取的均一果胶多糖TPSR4-2A在こ酰化后的GC图谱(a图)与标准单糖在こ酰化后的GC图谱(b图)对比图；在b图中，自左至右依次为鼠李糖、岩藻糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖对应的特征峰；将3图与b图比较可知所获取的均一果胶多糖TPSR4-2A在こ酰化后的GC图谱中只有半乳糖特征峰，从而可推测TPSR4-2A由半乳糖醛酸组成。图6-4是获取的均一果胶多糖TPSR4-2A的碳谱图；图6-5是获取的均一果胶多糖TPSR4-2A进行甲基化后的GC-MS分析图谱，其中的a图为均一果胶多糖TPSR4-2A进行甲基化后的GC图，b图为GC图中的27. 68min峰所对应的质谱图，c图为GC图中的31. 90min峰所对应的质谱图；经高碘酸氧化分析得知样品TPSR4-2A中Imol的糖基消耗O. 98mol的NaIO4,表明其连接方式为1，4连接。综上结构分析得知本实施例所获取的多糖也为1，4连接的聚半乳糖醛酸类均一果月父多糖。參照实施例I中所述的半乳糖糖醛酸含量測定方法，测算得知本实施例所获取的均一果胶多糖中的半乳糖糖醛酸含量为98. 5%。參照实施例I中所述的甲酯化和こ酰酯化分析方法，測定得知本实施例所获取的均一果胶多糖中甲酯化含量为51. 51mg/g,甲酷化度为28. 3% ;こ酰酯化含量为3. 03mg/g,こ酰酯化度为9. 15%。。实施例7 :制备均一果胶多糖TPSR7-1B71)将提取茶多酚后的干燥茶渣粉碎至40 100目；72)用水于100°C提取二次，第一次加水体积是茶渣质量的15倍，第二次加水体积是茶渣质量的10倍；合并二次提取液，浓缩，加入こ醇进行醇沉，控制醇沉体系中的こ醇浓度为70vol% ;醇沉24小时后，过滤，收集沉淀；对沉淀进行离心和冷冻干燥，得茶渣多糖粗品;
73)将步骤72)获得的茶渣多糖粗品上样于DEAE-S印harose柱，依次用水、
O.lmol/L的氯化钠水溶液进行洗脱；使用硫酸-苯酚法跟踪洗脱曲线，收集利用O. lmol/L的氯化钠水溶液进行洗脱的有效部位；74)将步骤73)得到的有效部位用适量水进行溶解，离心，取上清液上样于丙烯葡聚糖凝胶色谱柱Sephacryl S-300 High Resolution,用水进行洗脱；利用Shodex R1-102示差折光检测器检测跟踪洗脱曲线，根据洗脱曲线(见图7-1所示)收集洗脱的有效部位；浓缩，冷冻干燥，即得所述的均一果胶多糖TPSR7-1B，总得率12. 34wt%。图7-2为得到的均一果胶多糖TPSR7-1B的高效液相凝胶色谱(HPGPC)图，由图
7-2可说明所获得的多糖为均一多糖。 參照实施例I中所述的分子量測定方法测算得知所获得的均一果胶多糖TPSR7-1B的平均分子量为6. 5 X IO4道尔顿。參照实施例I中所述的结构鉴定内容对所获得的均一果胶多糖TPSR7-1B进行结构鉴定TPSR7-1B完全酸水解后，TLC分析表明其为酸性多糖，含糖醛酸；图7-3是所获取的均一果胶多糖TPSR7-1B在こ酰化后的GC图谱(a图)与标准单糖在こ酰化后的GC图谱(b图)对比图；在b图中，自左至右依次为鼠李糖、岩藻糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖对应的特征峰；将3图与b图比较可知所获取的均一果胶多糖TPSR7-1B在こ酰化后的GC图谱中只有半乳糖特征峰，从而可推测TPSR7-1B由半乳糖醛酸组成。图7-4是获取的均一果胶多糖TPSR7-1B的碳谱图；图7-5是获取的均一果胶多糖TPSR7-1B进行甲基化后的GC-MS分析图谱，其中的a图为均一果胶多糖TPSR7-1B进行甲基化后的GC图，b图为GC图中的27. 80min峰所对应的质谱图，c图为GC图中的32. Olmin峰所对应的质谱图；经高碘酸氧化分析得知样品TPSR7-1B中Imol的糖基消耗I. 03mol的NaIO4,表明其连接方式为1，4连接。综上结构分析得知本实施例所获取的多糖也为1，4连接的聚半乳糖醛酸类均一果月父多糖。參照实施例I中所述的半乳糖糖醛酸含量測定方法，测算得知本实施例所获取的均一果胶多糖中的半乳糖糖醛酸含量为100. 0%。參照实施例I中所述的甲酯化和こ酰酯化分析方法，測定得知本实施例所获取的均一果胶多糖中甲酯化含量为60. 56mg/g,甲酷化度为33. 3% ;こ酰酯化含量为0mg/g，乙酰酯化度为O。实施例8 :制备均一果胶多糖TPSR7-2A81)将提取茶多酚后的干燥茶渣粉碎至40 100目；82)用水于100°C提取二次，第一次加水体积是茶渣质量的15倍，第二次加水体积是茶渣质量的10倍；合并二次提取液，浓缩，加入こ醇进行醇沉，控制醇沉体系中的こ醇浓度为70vol% ;醇沉24小时后，过滤，收集沉淀；对沉淀进行离心和冷冻干燥，得茶渣多糖粗品;83)将步骤82)获得的茶渣多糖粗品上样于DEAE-S印harose柱，依次用水、O.lmol/L的氯化钠水溶液和O. 2mol/L的氯化钠水溶液进行洗脱；使用硫酸_苯酚法跟踪洗脱曲线，收集利用O. 2mol/L的氯化钠水溶液进行洗脱的有效部位；84)将步骤83)得到的有效部位用适量O. 2mol/L的氯化钠水溶液进行溶解，离心，取上清液上样于葡聚糖凝胶色谱柱Superdex200,用O. 2mol/L的氯化钠水溶液进行洗脱；利用Shodex R1-102示差折光检测器检测跟踪洗脱曲线，根据洗脱曲线(见图8_1所示)收集洗脱的有效部位；浓缩，冷冻干燥，即得所述的均一果胶多糖TPSR7-2A，总得率15.89wt%0图8-2为得到的均一果胶多糖TPSR7-2A的高效液相凝胶色谱(HPGPC)图，由图8-2可说明所获得的多糖为均一多糖。參照实施例I中所述的分子量測定方法测算得知所获得的均一果胶多糖 TPSR7-2A的平均分子量为2. 8 X IO5道尔顿。參照实施例I中所述的结构鉴定内容对所获得的均一果胶多糖TPSR7-2A进行结构鉴定TPSR7-2A完全酸水解后，TLC分析表明其为酸性多糖，含糖醛酸；图8-3是所获取的均一果胶多糖TPSR7-2A在こ酰化后的GC图谱(a图)与标准单糖在こ酰化后的GC图谱(b图)对比图；在b图中，自左至右依次为鼠李糖、岩藻糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖对应的特征峰；将3图与b图比较可知所获取的均一果胶多糖TPSR7-2A在こ酰化后的GC图谱中只有半乳糖特征峰，从而可推测TPSR7-2A由半乳糖醛酸组成。图8-4是获取的均一果胶多糖TPSR7-2A的碳谱图；图8-5是获取的均一果胶多糖TPSR7-2A进行甲基化后的GC-MS分析图谱，其中的a图为均一果胶多糖TPSR7-2A进行甲基化后的GC图，b图为GC图中的27. 8Imin峰所对应的质谱图，c图为GC图中的32. OOmin峰所对应的质谱图；经高碘酸氧化分析得知样品TPSR7-2A中Imol的糖基消耗O. 99mol的NaIO4,表明其连接方式为1，4连接。综上结构分析得知本实施例所获取的多糖也为1，4连接的聚半乳糖醛酸类均一果月父多糖。參照实施例I中所述的半乳糖糖醛酸含量測定方法，测算得知本实施例所获取的均一果胶多糖中的半乳糖糖醛酸含量为100. 0%。參照实施例I中所述的甲酯化和こ酰酯化分析方法，測定得知本实施例所获取的均一果胶多糖中甲酯化含量为47. 40mg/g,甲酷化度为26. 1% ;こ酰酯化含量为2. 70mg/g,こ酰酯化度为7. 97%0。最后有必要在此说明的是以上实施例只用于对本发明的技术方案作进ー步详细地说明，不能理解为对本发明保护范围的限制，本领域的技术人员根据本发明的上述内容作出的一些非本质的改进和调整均属于本发明的保护范围。
权利要求
1.一种从茶多糖中获取均一果胶多糖的方法，其特征在于，包括如下步骤 a)将干燥茶叶或提取茶多酚后的干燥茶渣粉碎至40 100目； b)用水于100°C提取二次，第一次加水体积是茶叶或茶渣质量的15倍，第二次加水体积是茶叶或茶渣质量的10倍；合并二次提取液，浓缩，加入乙醇进行醇沉，控制醇沉体系中的乙醇浓度为40vol%或70vol% ;醇沉24小时后，过滤，收集沉淀；对沉淀进行离心和冷冻干燥，得茶叶多糖粗品或茶渣多糖粗品； c)将步骤b)获得的茶叶多糖粗品或茶洛多糖粗品上样于DEAE-Sepharose柱,依次用水、0. lmol/L的氯化钠水溶液、0. 2mol/L的氯化钠水溶液进行洗脱；使用硫酸-苯酚法跟踪洗脱曲线，分别收集利用0. lmol/L的氯化钠水溶液和0. 2mol/L的氯化钠水溶液进行洗脱的有效部位； d)将步骤c)得到的有效部位分别用适量水或0.2mol/L的氯化钠水溶液进行溶解，离心，取上清液上样于丙烯葡聚糖凝胶色谱柱或葡聚糖凝胶色谱柱，用水或0. 2mol/L的氯化钠水溶液进行洗脱；利用示差折光检测器检测跟踪洗脱曲线，根据洗脱曲线收集洗脱的有效部位；浓缩，冷冻干燥，即得均一果胶多糖均为1，4连接的聚半乳糖醛酸类果胶多糖。
2.由权利要求I所述方法获得的均一果胶多糖，包括如下果胶多糖中的任意一种或二种以上 平均分子量为2. 7X IO5道尔顿，半乳糖糖醛酸含量为90. 7%，甲酯化度为28. 0%，乙酰酯化度为I. 97%。的1，4连接的聚半乳糖醛酸类果胶多糖，记为TPS4-1B ； 平均分子量为3. I X IO4道尔顿，半乳糖糖醛酸含量为100%，甲酯化度为28. 4%，乙酰酯化度为4. 84%。的1，4连接的聚半乳糖醛酸类果胶多糖，记为TPS4-2A ； 平均分子量为I. OX IO4道尔顿，半乳糖糖醛酸含量为99. 5%，甲酯化度为35. 0%，乙酰酯化度为0的1，4连接的聚半乳糖醛酸类果胶多糖，记为TPS7-1B ； 平均分子量为6. 5 X IO4道尔顿，半乳糖糖醛酸含量为87. 6%，甲酯化度为9. 5%，乙酰酯化度为57. 2%。的1，4连接的聚半乳糖醛酸类果胶多糖，记为TPS7-2A ； 平均分子量为8. 6 X IO5道尔顿，半乳糖糖醛酸含量为99. 0%，甲酯化度为30. 5%，乙酰酯化度为I. 27%。的1，4连接的聚半乳糖醛酸类果胶多糖，记为TPSR4-1B ； 平均分子量为3. 7X IO5道尔顿，半乳糖糖醛酸含量为98. 5%，甲酯化度为28. 3%，乙酰酯化度为9. 15%。的1，4连接的聚半乳糖醛酸类果胶多糖，记为TPSR4-2A ； 平均分子量为6. 5 X IO4道尔顿，半乳糖糖醛酸含量为100%，甲酯化度为33. 3%，乙酰酯化度为0的1，4连接的聚半乳糖醛酸类果胶多糖，记为TPSR7-1B ； 平均分子量为2. 8 X IO5道尔顿，半乳糖糖醛酸含量为100%，甲酯化度为26. 1%，乙酰酯化度为7. 97%。的1，4连接的聚半乳糖醛酸类果胶多糖，记为TPSR7-2A。
3.—种权利要求2所述的TPS4-1B均一果胶多糖的制备，其特征在于，包括如下步骤 11)将干燥茶叶粉碎至40 100目； 12)用水于100°C提取二次，第一次加水体积是茶叶质量的15倍，第二次加水体积是茶叶质量的10倍；合并二次提取液，浓缩，加入乙醇进行醇沉，控制醇沉体系中的乙醇浓度为40vol% ;醇沉24小时后，过滤，收集沉淀；对沉淀进行离心和冷冻干燥，得茶叶多糖粗品； 13)将步骤12)获得的茶叶多糖粗品上样于DEAE-Sepharose柱,依次用水、0.lmol/L的氯化钠水溶液进行洗脱；使用硫酸-苯酚法跟踪洗脱曲线，收集利用0. lmol/L的氯化钠水溶液进行洗脱的有效部位； 14)将步骤13)得到的有效部位用适量0. 2mol/L的氯化钠水溶液进行溶解，离心，取上清液上样于丙烯葡聚糖凝胶色谱柱，用0. 2mol/L的氯化钠水溶液进行洗脱；利用示差折光检测器检测跟踪洗脱曲线，根据洗脱曲线收集洗脱的有效部位；浓缩，冷冻干燥，即得所述的均一果胶多糖。
4.一种权利要求2所述的TPS4-2A均一果胶多糖的制备，其特征在于，包括如下步骤 21)将干燥茶叶粉碎至40 100目； 22)用水于100°C提取二次，第一次加水体积是茶叶质量的15倍，第二次加水体积是茶叶质量的10倍；合并二次提取液，浓缩，加入乙醇进行醇沉，控制醇沉体系中的乙醇浓度为40vol% ;醇沉24小时后，过滤，收集沉淀；对沉淀进行离心和冷冻干燥，得茶叶多糖粗品； 23)将步骤22)获得的茶叶多糖粗品上样于DEAE-Sepharose柱，依次用水、0.lmol/L的氯化钠水溶液和0. 2mol/L的氯化钠水溶液进行洗脱；使用硫酸-苯酚法跟踪洗脱曲线，收集利用0. 2mol/L的氯化钠水溶液进行洗脱的有效部位； 24)将步骤23)得到的有效部位用适量水进行溶解，离心，取上清液上样于葡聚糖凝胶色谱柱，用水进行洗脱；利用示差折光检测器检测跟踪洗脱曲线，根据洗脱曲线收集洗脱的有效部位；浓缩，冷冻干燥，即得所述的均一果胶多糖。
5.一种权利要求2所述的TPS7-1B均一果胶多糖的制备，其特征在于，包括如下步骤 31)将干燥茶叶粉碎至40 100目； 32)用水于100°C提取二次，第一次加水体积是茶叶质量的15倍，第二次加水体积是茶叶质量的10倍；合并二次提取液，浓缩，加入乙醇进行醇沉，控制醇沉体系中的乙醇浓度为70vol% ;醇沉24小时后，过滤，收集沉淀；对沉淀进行离心和冷冻干燥，得茶叶多糖粗品； 33)将步骤32)获得的茶叶多糖粗品上样于DEAE-Sepharose柱，依次用水、0.lmol/L的氯化钠水溶液进行洗脱；使用硫酸-苯酚法跟踪洗脱曲线，收集利用0. lmol/L的氯化钠水溶液进行洗脱的有效部位； 34)将步骤33)得到的有效部位用适量0.2mol/L的氯化钠水溶液进行溶解，离心，取上清液上样于丙烯葡聚糖凝胶色谱柱，用0. 2mol/L的氯化钠水溶液进行洗脱；利用示差折光检测器检测跟踪洗脱曲线，根据洗脱曲线收集洗脱的有效部位；浓缩，冷冻干燥，即得所述的均一果胶多糖。
6.一种权利要求2所述的TPS7-2A均一果胶多糖的制备，其特征在于，包括如下步骤 41)将干燥茶叶粉碎至40 100目； 42)用水于100°C提取二次，第一次加水体积是茶叶质量的15倍，第二次加水体积是茶叶质量的10倍；合并二次提取液，浓缩，加入乙醇进行醇沉，控制醇沉体系中的乙醇浓度为70vol% ;醇沉24小时后，过滤，收集沉淀；对沉淀进行离心和冷冻干燥，得茶叶多糖粗品； 43)将步骤42)获得的茶叶多糖粗品上样于DEAE-Sepharose柱,依次用水、0.lmol/L的氯化钠水溶液和0. 2mol/L的氯化钠水溶液进行洗脱；使用硫酸-苯酚法跟踪洗脱曲线，收集利用0. 2mol/L的氯化钠水溶液进行洗脱的有效部位； 44)将步骤43)得到的有效部位用适量水进行溶解，离心，取上清液上样于葡聚糖凝胶色谱柱，用水进行洗脱；利用示差折光检测器检测跟踪洗脱曲线，根据洗脱曲线收集洗脱的有效部位；浓缩，冷冻干燥，即得所述的均一果胶多糖。
7.—种权利要求2所述的TPSR4-1B均一果胶多糖的制备，其特征在于，包括如下步骤 .51)将提取茶多酚后的干燥茶渣粉碎至40 100目； .52)用水于100°C提取二次，第一次加水体积是茶渣质量的15倍，第二次加水体积是茶渣质量的10倍；合并二次提取液，浓缩，加入乙醇进行醇沉，控制醇沉体系中的乙醇浓度为.40vol% ;醇沉24小时后，过滤，收集沉淀；对沉淀进行离心和冷冻干燥，得茶渣多糖粗品； .53)将步骤52)获得的茶渣多糖粗品上样于DEAE-Sepharose柱，依次用水、0.lmol/L的氯化钠水溶液进行洗脱；使用硫酸-苯酚法跟踪洗脱曲线，收集利用0. lmol/L的氯化钠水溶液进行洗脱的有效部位； .54)将步骤53)得到的有效部位用适量水进行溶解，离心，取上清液上样于丙烯葡聚糖凝胶色谱柱，用水进行洗脱；利用示差折光检测器检测跟踪洗脱曲线，根据洗脱曲线收集洗脱的有效部位；浓缩，冷冻干燥，即得所述的均一果胶多糖。
8.—种权利要求2所述的TPSR4-2A均一果胶多糖的制备，其特征在于，包括如下步骤 .61)将提取茶多酚后的干燥茶渣粉碎至40 100目； .62)用水于100°C提取二次，第一次加水体积是茶渣质量的15倍，第二次加水体积是茶渣质量的10倍；合并二次提取液，浓缩，加入乙醇进行醇沉，控制醇沉体系中的乙醇浓度为.40vol% ;醇沉24小时后，过滤，收集沉淀；对沉淀进行离心和冷冻干燥，得茶渣多糖粗品； .63)将步骤62)获得的茶渣多糖粗品上样于DEAE-Sepharose柱，依次用水、0.lmol/L的氯化钠水溶液和0. 2mol/L的氯化钠水溶液进行洗脱；使用硫酸-苯酚法跟踪洗脱曲线，收集利用0. 2mol/L的氯化钠水溶液进行洗脱的有效部位； .64)将步骤63)得到的有效部位用适量水进行溶解，离心，取上清液上样于葡聚糖凝胶色谱柱，用水进行洗脱；利用示差折光检测器检测跟踪洗脱曲线，根据洗脱曲线收集洗脱的有效部位；浓缩，冷冻干燥，即得所述的均一果胶多糖。
9.一种权利要求2所述的TPSR7-1B均一果胶多糖的制备，其特征在于，包括如下步骤 .71)将提取茶多酚后的干燥茶渣粉碎至40 100目； .72)用水于100°C提取二次，第一次加水体积是茶渣质量的15倍，第二次加水体积是茶渣质量的10倍；合并二次提取液，浓缩，加入乙醇进行醇沉，控制醇沉体系中的乙醇浓度为.70vol% ;醇沉24小时后，过滤，收集沉淀；对沉淀进行离心和冷冻干燥，得茶渣多糖粗品； .73)将步骤72)获得的茶渣多糖粗品上样于DEAE-S印harose柱，依次用水、0.lmol/L的氯化钠水溶液进行洗脱；使用硫酸-苯酚法跟踪洗脱曲线，收集利用0. lmol/L的氯化钠水溶液进行洗脱的有效部位； .74)将步骤73)得到的有效部位用适量水进行溶解，离心，取上清液上样于丙烯葡聚糖凝胶色谱柱，用水进行洗脱；利用示差折光检测器检测跟踪洗脱曲线，根据洗脱曲线收集洗脱的有效部位；浓缩，冷冻干燥，即得所述的均一果胶多糖。
10.一种权利要求2所述的TPSR7-2A均一果胶多糖的制备，其特征在于，包括如下步骤 .81)将提取茶多酚后的干燥茶渣粉碎至40 100目；82)用水于100°C提取二次，第一次加水体积是茶渣质量的15倍，第二次加水体积是茶渣质量的10倍；合并二次提取液，浓缩，加入乙醇进行醇沉，控制醇沉体系中的乙醇浓度为70vol% ;醇沉24小时后，过滤，收集沉淀；对沉淀进行离心和冷冻干燥，得茶渣多糖粗品； 83)将步骤82)获得的茶渣多糖粗品上样于DEAE-Sepharose柱，依次用水、0.lmol/L的氯化钠水溶液和0. 2mol/L的氯化钠水溶液进行洗脱；使用硫酸-苯酚法跟踪洗脱曲线，收集利用0. 2mol/L的氯化钠水溶液进行洗脱的有效部位； 84)将 步骤83)得到的有效部位用适量0.2mol/L的氯化钠水溶液进行溶解，离心，取上清液上样于葡聚糖凝胶色谱柱，用0. 2mol/L的氯化钠水溶液进行洗脱；利用示差折光检测器检测跟踪洗脱曲线，根据洗脱曲线收集洗脱的有效部位；浓缩，冷冻干燥，即得所述的均一果胶多糖。
全文摘要
本发明公开了一种从茶多糖中获取均一果胶多糖的方法及获得的均一果胶多糖。具体说，是涉及一种从茶叶多糖或茶渣多糖中获取聚半乳糖醛酸类均一果胶多糖的方法及获得的聚半乳糖醛酸类均一果胶多糖。本发明首次从茶多糖中分离纯化获得了均为1,4连接的聚半乳糖醛酸类果胶多糖，而且制备方法简单，得率高，整个制备过程中没有使用酸、碱及其它有毒有害试剂，可充分保证茶多糖活性结构的稳定性，适合规模化生产；尤其是，使用本发明方法可以有效利用提取茶多酚后的茶渣，可节约资源，实现废物再利用，对聚半乳糖醛酸类均一果胶多糖的研究和生产具有重要意义。
文档编号C08B37/06GK102675483SQ20121017214
公开日2012年9月19日 申请日期2012年5月30日 优先权日2012年5月30日
发明者施松善, 王峥涛, 王辉俊, 王顺春, 胡之璧, 鲍斌 申请人:上海中医药大学