一种从透明质酸钠发酵液中快速制备透明质酸钠的方法
【专利摘要】本发明提供了一种从透明质酸钠发酵液中快速制备透明质酸钠的方法，包括如下步骤：1)将透明质酸钠发酵液升温至100℃-121℃维持10-30分钟，然后迅速板框压滤；2)滤液用2-4倍的纯化水稀释后，加入1％-5％活性炭吸附1-5个小时后，板框压滤；3)滤液用树脂吸附1-2小时，吸附液按比例加入0.4mol/L的氯化钠；4)用2-3倍乙醇沉淀透明质酸钠，洗涤固化干燥后得到粉末状透明质酸钠。采用该方法提取制备的透明质酸钠的优点在于：整个提取过程去除了粗品复溶，大大节省了提取时间，并且得到的透明质酸钠纯度高，蛋白含量低，工艺简单，用时少，利于大规模工业化生产。
【专利说明】一种从透明质酸钠发酵液中快速制备透明质酸钠的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及透明质酸钠的制备方法，尤其涉及从透明质酸钠发酵液中分离提取透明质酸钠的方法。
【背景技术】
[0002]透明质酸(Hyaluronic Acid, HA)是由β _D_葡萄糖醒酸和N-乙酰胺基葡萄糖通过β，1-3和β，1-4糖苷键所构成的重复单元而形成的线性高分子粘多糖，双糖单位数为300-1100，分子量范围 105-107Da。
[0003]自从本世纪30年代Mayer首次从动物眼玻璃体中提取得到HA后，HA的生产和应用研究至今已有70余年的历史。HA有独特的粘弹性和生理功能，是细胞外基质的主要成分，具有保水、润滑、调节渗透压等作用，可以保护正常细胞免受细胞毒性、自由基等的侵袭，并可影响细胞增生、分化等。因此，HA广泛用于骨科、眼科、妇科、手术外科后防粘连、整形美容及保健食品等领域。
[0004]目前大都采用发酵法来生产HA，由于发酵液中含有菌体、蛋白质以及核酸等物质，从发酵液后总提取HA的方法各种各样，但是不外乎是用CPC或者乙醇进行沉淀，这必然设计到粗品复溶过程，而此过程费时费力，增加了生产成本，并不利于大规模生产。
【发明内容】
[0005]本发明旨在克服现有技术中存在乙醇沉淀物或者CPC沉淀物复溶这一费时费力的步骤的不足，提供了一种从发酵液直接获得粉末状透明质酸钠的方法，该方法耗时少，成本低，所得的粉末状HA纯度高、蛋白含量低。
[0006]为了实现本发明目的，本发明的一种从透明质酸钠发酵液中快速制备透明质酸钠的方法，其是将含有透明质酸钠的发酵液升温除菌后过滤除菌体，滤液稀释后加入活性炭进行吸附，然后用树脂脱色除蛋白，然后加入乙醇进行沉淀，脱水固化干燥后得到粉末状透明质酸钠固体。具体的，本发明用一下的技术方法来实现，具体步骤:
[0007]I)将透明质酸钠发酵液快速升温至10(TC _121°C，维持10-30分钟，然后板框压滤；
[0008]2)滤液用2-4倍的纯化水稀释后，加入1% -5%活性炭吸附1_5个小时后，板框压滤；
[0009]3)滤液用树脂吸附1-2小时，吸附液按比例加入0.4mol/L的氯化钠；
[0010]4)用2-3倍乙醇沉淀透明质酸钠，洗涤固化干燥后得到粉末状透明质酸钠。
[0011]采用简单的四步方法，就可以得到粉末状的HA，且HA得率约为90%，避免复杂的设备不利于放大或增加生产成本，无须繁琐的步骤使HA得率降低，并且节省了复溶的时间，大大缩减了从发酵液到粉末状HA的生产时间，从而更加利于工业化放大生产透明质酸。【具体实施方式】
[0012]以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
[0013]实施例1
[0014]I)取 1000ml 发酵液，含 HA4g，分子量为 2.26MDa。
[0015]2)发酵液升温至100°C，维持20分钟，过滤，得滤液。
[0016]3)滤液用纯化水稀释至3000ml,加入活性炭20g/L和娃藻土 2g/L,搅拌吸附4hr,过滤，得滤液。
[0017]4)滤液中加入D113树脂500g，搅拌吸附I小时后，滤掉树脂，得滤液。
[0018]5)滤液加入氯化钠使其终浓度为0.4mol/L,用2_3倍乙醇沉淀HA，然后洗涤固化干燥得粉末状HA。
[0019]整个过程耗时8小时，所得HA干粉为3.Sg,葡萄糖醛酸纯度约43.6%，分子量为1.67MDa,蛋白 /HA (g/g) = 0.08 %。
[0020]实施例2
[0021]I)取 1000ml 发酵液，含 HA4g，分子量为 2.26MDa。
[0022]2)发酵液升温 至121°C，维持10分钟，过滤，得滤液。
[0023]3)滤液用纯化水稀释至4000ml,加入活性炭50g/L和娃藻土 2g/L,搅拌吸附2hr,过滤，得滤液。
[0024]4)滤液中加入D113树脂500g，搅拌吸附2小时后，滤掉树脂，得滤液。
[0025]5)滤液加入氯化钠使其终浓度为0.4mol/L,用2_3倍乙醇沉淀HA，然后洗涤固化干燥得粉末状HA。
[0026]整个过程耗时7小时，所得HA干粉为3.6g，葡萄糖醛酸纯度约44.5%，分子量为1.76MDa,蛋白 /HA (g/g) = 0.06 %。
[0027]实施例3
[0028]I)取 1000ml 发酵液，含 HA4g，分子量为 2.26MDa。
[0029]2)发酵液升温至110°C，维持15分钟，过滤，得滤液。
[0030]3)滤液用纯化水稀释至3000ml,加入活性炭40g/L和娃藻土 2g/L,搅拌吸附5hr,过滤，得滤液。
[0031]4)滤液中加入D113树脂500g，搅拌吸附I小时后，滤掉树脂，得滤液。
[0032]5)滤液加入氯化钠使其终浓度为0.4mol/L,用2_3倍乙醇沉淀HA，然后洗涤固化干燥得粉末状HA。
[0033]整个过程耗时9小时，所得HA干粉为3.7g，葡萄糖醛酸纯度约43.8%，分子量为
1.70MDa,蛋白 /HA (g/g) = 0.09 %。
[0034]虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
【权利要求】
1.一种从透明质酸钠发酵液中快速制备透明质酸钠的方法，其特征在于，它包括如下步骤:1)将透明质酸钠发酵液快速升温至100°C-121°c，维持10-30分钟，然后板框压滤；2)滤液用2-4倍的纯化水稀释后，加入1%-5%活性炭吸附1-5个小时后，板框压滤； 3)滤液用树脂吸附1-2小时，吸附液按比例加入0.4mol/L的氯化钠； 4)用2-3倍乙醇沉淀透明质酸钠，洗涤固化干燥后得到粉末状透明质酸钠。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于:将发酵液快速升温至10(TC_121°C，维持10-30分钟。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于:加入活性活性炭的量为1%_5%，吸附时间为1-5小时。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于:所用树脂为大孔阳离子交换树脂，如D113坐寸ο
【文档编号】C08B37/08GK103936882SQ201310021430
【公开日】2014年7月23日 申请日期:2013年1月21日 优先权日:2013年1月21日
【发明者】肖刚, 薛勇, 侯永泰, 任彩霞, 李映严 申请人:上海昊海生物科技股份有限公司, 上海利康瑞生物工程有限公司