一种交联透明质酸凝胶微粒及其制备方法
【专利摘要】本发明涉及一种交联透明质酸凝胶微粒，本发明制备的交联透明质酸凝胶微粒，是由天然透明质酸通过交联剂交联反应，形成大分子互穿网络结构，再经挤压成膜、膜材干燥透析，单面二次交联，再干燥成膜，复水溶胀，机械剪切造粒，制成的微粒呈卷曲筒状，长轴尺寸在0.2mm～1.0mm，卷曲直径在0.1mm～0.8mm,依靠其结构特性，可以更长效安全的实现软组织填充作用。
【专利说明】一种交联透明质酸凝胶微粒及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于医学整形美容技术，涉及一种凝胶微粒及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 天然透明质酸属于一种生理性物质，多用于填充支撑于细胞与胶原纤维空间，具 有优异的锁水保水功能。
[0003] 随着年龄的增长、外力挤压牵引以及光照辐射等因素的影响，人体皮肤内透明质 酸逐渐流失，进而引起真皮细胞、胶原蛋白和弹性纤维减少及其所在部位三维空间坍塌，导 致皮肤松弛，出现面部皱纹。通过注射透明质酸可有效解决这一问题，但由于透明质酸酶、 自由基降解等原因，外源天然透明质酸在体内维持存在时间短，限制了透明质酸在软组织 填充除皱方面的应用。而经过交联处理后的透明质酸，可以在保留软组织填充除皱功效的 同时，延长透明质酸在体内的保留时间，使其降解周期延长至6个月甚至更久。
[0004] 专利W0199704012公开了一种缩水甘油醚类交联剂制备交联透明质酸凝胶微粒 的工艺过程。该工艺过程所得凝胶产品临床应用多年，具有较好的软组织填充效果，但该 产品尚有不令人满意的地方：第一、凝胶产品微粒尺寸大的弹性模量大，因而体内降解时间 长，但注射时术者舒适度低，而微粒尺寸小的弹性模量小，相对而言体内降解时间短，但注 射时术者舒适度高；第二、该凝胶产品具有致密的凝胶微粒立方结构，不利于残留交联剂的 去除。
[0005] 针对交联透明质酸凝胶微粒成型技术，国内相关工作者大多采用的是以不同的 剪切造粒设备实现对交联透明质酸凝胶的微粒成型工艺。如中国专利200810009194. 6、 201010117490. 5、201110004283. 3等。其凝胶微粒从本身结构上并无太大差别，基本都是大 的凝胶块经过筛网挤压切割成具有一定三维尺寸的块状微粒结构。这样结构的凝胶微粒， 其弹性模量主要依靠凝胶本身内部交联结构以及微粒大小决定，并没有结构性弹性支撑效 果。
[0006] 综上所述，现有技术工艺所得凝胶微粒产品，微粒大小决定了弹性模量大小，影响 了体内降解时间，同时影响了术者使用舒适度，而且致密的结构不利于残留交联剂的去除。
【发明内容】
[0007] 针对现有技术存在的缺陷，为了解决目前交联透明质酸凝胶微粒大小限定凝胶微 粒弹性模量，进而影响体内降解效果的问题，本发明的目的是：提供一种交联透明质酸凝 胶微粒及其制备方法，在不改变微粒大小的情况下提升微粒弹性模量，延长体内降解时间， 提高患者使用舒适度，并最大限度地减少交联剂的残留，降低术者使用风险。为此，本发明 拟实现以下两个目的：第一、制备出尺寸小，弹性模量大，体内降解时间长的凝胶微粒；第 二、提升残留交联剂的清洗去除效果，减低交联剂残留量。
[0008] 本发明是这样实现的：
[0009] 本发明所述的交联透明质酸凝胶微粒，其主要成分是透明质酸。其特征在于，微粒 呈卷曲筒状，长轴尺寸在0. 2mm?1. Omm，卷曲直径在0. 1mm?0. 8mm,依靠其结构特性，可 以更长效安全的实现软组织填充作用。
[0010] 本发明制备的交联透明质酸凝胶微粒，是由天然透明质酸通过交联剂交联反应， 形成大分子互穿网络结构，再经挤压成膜、膜材干燥透析，单面二次交联，再干燥成膜，复水 溶胀，机械剪切造粒制成。包括如下步骤：
[0011] 步骤一、交联透明质酸凝胶的制备：
[0012] 1.称量一定质量透明质酸原料；
[0013] 2.将透明质酸原料质量0. 5%?5%的交联剂，添加至pH值为9?13的碱性溶 液中，混合均匀，得到交联剂碱性溶液A ;
[0014] 3.再将透明质酸原料溶解于交联剂溶液A中，均质搅拌后得到浓度为67mg/ml? 125mg/ml的透明质酸碱性凝胶；
[0015] 4.然后置于45°C?65°C水浴温度下，交联反应1. 5小时-4. 5小时，得到交联透 明质酸凝胶。
[0016] 所述碱性溶液，是NaOH或Κ0Η或氨水溶液；
[0017] 所述交联剂，为缩水甘油醚类交联剂，可选1，4-丁二醇二缩水甘油醚、乙二醇二 缩水甘油醚、甘油三环氧丙醚、烯丙基缩水甘油醚、新戊二醇二缩水甘油醚或1，6-己二醇 二缩水甘油醚之其中一种。
[0018] 本步骤将交联剂溶液添加至碱性溶液中分散均匀，使交联剂分子在交联反应开始 前能充分均匀分散于反应体系中，保证了交联剂于透明质酸交联反应的均一性，交联点密 度的一致性，使凝胶整体结构均衡，降解过程同步。
[0019] 步骤二、脱水透明质酸薄膜的制备：
[0020] 1.将步骤一得到的交联透明质酸凝胶，置于机械挤压成型设备中，挤压成厚度为 0. 1mm?0. 3mm交联透明质酸凝胶薄膜；
[0021] 2.将交联透明质酸凝胶薄膜置于溶液B中透析至pH值为中性；
[0022] 3.取出平铺于30°C?60°C条件下脱水干燥，得到厚度为0.02mm?0.06mm的脱水 交联透明质酸薄膜；
[0023] 所述溶液B，是pH值为中性的磷酸盐缓冲溶液。所述pH值为中性的磷酸盐缓冲溶 液，是指〇. 1?〇. 3g/L磷酸氢二钠和0. 01?0. lg/L磷酸二氢钠缓冲溶液或0. 1?0. 3g/ L磷酸氢二钠和0. 01?0. lg/L磷酸二氢钾缓冲溶液。
[0024] 本步骤通过机械挤压成型设备对交联透明质酸凝胶挤压成膜，使交联透明质酸大 分子在空间排列上具有一定的趋向性，提高膜材表面强度；挤压成膜的方式增加了交联透 明质酸凝胶的比表面积，一方面促进了透析平衡进程，加速残留交联剂挥发，降低交联剂残 留，保证凝胶的安全性；另一方面快速调节产品pH值至中性，终止交联反应，避免碱性环境 对透明质酸的降解影响。
[0025] 步骤三、单面二次交联：
[0026] 1.将透明质酸原料质量0. 25%?2. 5%的缩水甘油醚类交联剂，放入pH值为9? 13的碱性溶液中，分散均匀，得到交联剂碱性溶液C ;
[0027] 2.在步骤二获得的脱水交联透明质酸薄膜朝上的一面，均匀喷洒交联剂碱性溶 液C，使该面浸润至薄膜中的透明质酸浓度为134mg/ml?250mg/ml ;
[0028] 3.然后翻转，使交联透明质酸凝胶薄膜的湿润面朝下平铺，置于45°C _65°C条件 下，交联反应1. 5小时?4. 5小时；
[0029] 4.再将交联透明质酸薄膜（说明：交联透明质酸凝胶薄膜与交联透明质酸薄膜， 前者是含有水分的薄膜材料，后者是干燥脱水后的薄膜材料）置于溶液B中透析至pH值为 中性，取出平铺于30°C _60°C条件下脱水干燥，得到厚度为0. 02mm?0. 06mm的单面二次交 联后的交联透明质酸薄膜。
[0030] 本步骤中对交联透明质酸薄膜进行单面二次交联，通过单面浸润交联剂溶液后翻 转交联透明质酸薄膜，避免交联剂因重力作用下向另一面扩散，从而保证了交联透明质酸 薄膜两面交联剂的比例梯度，确保单面交联效果。
[0031] 步骤四、剪切造粒：
[0032] 1.将步骤三中得到的单面二次交联后的交联透明质酸薄膜，按照质量比为 1:30?1:60加入到pH值为中性的磷酸盐生理缓冲液中，吸水溶胀0. 5小时?2小时后，得 到卷曲交联透明质酸凝胶；
[0033] 2.所得卷曲交联透明质酸凝胶，用机械剪切设备剪切造粒，剪切转速为 lOOOOrpm?20000rpm，制得长轴尺寸在0· 2mm?1mm，卷曲直径在0· 1mm?0· 8mm的卷筒状 交联透明质酸凝胶微粒。
[0034] 所述pH值为中性的磷酸盐生理缓冲液可选下述两种组合之一：
[0035] 组合之一 ：6?12g/L的氯化钠，0. 1?0. 3g/L磷酸氢二钠和0. 01?0. lg/L磷酸 二氢钠生理缓冲溶液；
[0036] 组合之二：6?12g/L的氯化钠，0. 1?0. 3g/L磷酸氢二钠和0. 01?0. lg/L磷酸 二氢钾生理缓冲溶液。
[0037] 本步骤利用交联透明质酸薄膜的两面交联度不同，因而吸水率不同的特点使其发 生卷曲，并依靠机械剪切造粒得到具有卷曲筒状结构的凝胶微粒。卷曲筒状结构微粒在长 轴方向具有凝胶微粒的刚性，同时卷曲结构面又赋予凝胶微粒一定的曲面张力，两种力学 作用共同加强了交联透明质酸凝胶的弹性模量。
[0038] 卷曲筒状结构的凝胶微粒一方面通过改变交联透明质酸凝胶两侧的交联点密度， 另一方面可以通过控制交联透明质酸凝胶成膜的厚度，共同实现调节凝胶微粒的卷曲程 度，调节凝胶微粒的弹性模量，进而控制体内降解时间以及注射使用时术者的舒适度。
[0039] 本发明的有益效果如下：
[0040] (1)凝胶挤压成膜处理，促使交联透明质酸大分子在空间排列上具有一定的趋向 性，提高膜材表面强度；
[0041] ⑵膜材干燥、透析处理，增加了交联透明质酸凝胶的比表面积，一方面加快碱性 凝胶在磷酸盐缓冲液中透析平衡进程，另一方面促使凝胶中残留的交联剂可以更快更多的 与空气以及溶液接触，加速残留交联剂挥发，降低交联剂残留，保证凝胶的安全性；
[0042] (3)单面二次交联处理，使得交联透明质酸薄膜两面具有不同的交联键合密度点， 保证了交联透明质酸薄膜两面吸水溶胀比例不同，促使其自发形成卷曲状态；
[0043] (4)机械剪切造粒处理，得到具有一定长轴尺寸的卷曲筒状微粒，这种结构首先在 卷曲筒状微粒长轴方向提供予凝胶微粒刚性，同时卷曲结构面又赋予凝胶微粒一定的曲面 张力，两种力学作用共同加强了交联透明质酸凝胶的弹性模量。
【专利附图】
【附图说明】
[0044] 图1为瑞蓝产品与本发明产品同粒径尺寸下弹性模量对比图。
[0045] 图2为瑞蓝产品与本发明产品大鼠皮下植入52周材料降解效果图。
[0046] 其中，图2-A为瑞蓝产品大鼠皮下植入点外部观察，图2-B为瑞蓝产品大鼠皮下植 入点解剖观察，图2-C为本发明产品大鼠皮下植入点外部观察，图2-D为本发明产品大鼠皮 下植入解剖观察。
[0047] 图3为本发明凝胶微粒制备过程的工艺流程示意图。
【具体实施方式】
[0048] 下面结合附图和实施例，对本发明做进一步说明。
[0049] 本发明各实施例的凝胶微粒制备过程的工艺流程如图3所示。
[0050] 实施例1
[0051] 步骤一、交联透明质酸凝胶的制备：
[0052] 1、称量lg透明质酸原料；
[0053] 2、将透明质酸原料质量3%的交联剂1，4- 丁二醇二缩水甘油醚，添加至pH值为 11的15ml氢氧化钠溶液中，混合均匀，得到溶液A ;
[0054] 3、再将透明质酸原料溶解于溶液A中，均质搅拌后得到浓度为67mg/ml的透明质 酸氢氧化钠凝胶；
[0055] 4、然后置于65°C水浴温度下，交联反应1. 5小时，得到交联透明质酸凝胶。步骤 二、脱水交联透明质酸薄膜的制备：
[0056] 1、将步骤一得到的交联透明质酸凝胶，置于辊压机中，挤压成厚度为0. 1mm交联 透明质酸凝胶薄膜，
[0057] 2、将交联透明质酸凝胶薄膜置于pH值为中性的0. lg/L磷酸氢二钠和0. 01g/L磷 酸二氢钠缓冲溶液中透析，至pH值为中性平衡；
[0058] 3、取出平铺于50°C条件下脱水干燥，得到厚度为0. 02mm的脱水交联透明质酸薄 膜；
[0059] 步骤三、单面二次交联：
[0060] 1.将透明质酸原料质量1.5%的交联剂1，4-丁二醇二缩水甘油醚，放入pH值为 11的7. 5ml氢氧化钠溶液中，分散均匀，得到溶液C ;
[0061] 2.在步骤二获得的脱水交联透明质酸薄膜朝上的一面，均匀喷洒溶液C，使该面 浸润至薄膜中的透明质酸浓度为134mg/ml ;
[0062] 3.然后翻转，使交联透明质酸凝胶薄膜的湿润面朝下平铺置于65°C条件下，交联 反应1. 5小时；
[0063] 4.再将交联透明质酸凝胶薄膜置于溶液B中透析至pH值为中性平衡；
[0064] 5.取出平铺于50°C条件下脱水干燥，得到厚度为0.02mm的单面二次交联后的交 联透明质酸薄膜。
[0065] 步骤四、剪切造粒：
[0066] 1.将步骤三中得到的单面二次交联后的交联透明质酸薄膜，按照质量比为1:40 加入到pH值为中性的6g/L的氯化钠，0. lg/L磷酸氢二钠和0. Olg/L磷酸二氢钠生理缓冲 溶液；吸水溶胀1小时后，得到卷曲交联透明质酸凝胶；
[0067] 2.所得卷曲交联透明质酸凝胶，用匀浆机剪切造粒，剪切转速为lOOOOrpm，制备 得卷筒状交联透明质酸凝胶微粒.长轴尺寸为1_，卷曲直径为〇. 8_。
[0068] 实施例2
[0069] 步骤一、交联透明质酸凝胶的制备：
[0070] 1、称量lg透明质酸原料；
[0071] 2、将透明质酸原料质量1 %的交联剂乙二醇二缩水甘油醚，添加至pH值为13的 l〇ml氢氧化钾溶液中，混合均匀，得到溶液A ;
[0072] 3、再将透明质酸原料溶解于溶液A中，均质搅拌后得到浓度为100mg/ml的透明质 酸氢氧化钾凝胶；
[0073] 4、然后置于45°C水浴温度下，交联反应3小时，得到交联透明质酸凝胶。
[0074] 步骤二、脱水交联透明质酸薄膜的制备：
[0075] 1、将步骤一得到的交联透明质酸凝胶，置于辊压机中，挤压成厚度为0. 3_交联 透明质酸凝胶薄膜，
[0076] 2、将交联透明质酸凝胶薄膜置于pH值为中性的0. lg/L磷酸氢二钠和0. 03g/L磷 酸二氢钾中透析，至pH值为中性平衡；
[0077] 3、取出平铺于55°C -60°C条件下脱水干燥，得到厚度为0. 04mmm的脱水交联透明 质酸薄膜；
[0078] 步骤三、单面二次交联：
[0079] 1.将透明质酸原料质量0. 25%的交联剂乙二醇二缩水甘油醚，添加至pH值为13 的5ml氢氧化钾溶液中，分散均匀，得到溶液C ;
[0080] 2.在步骤二获得的脱水交联透明质酸薄膜朝上的一面，均匀喷洒溶液C，使该面 浸润至薄膜中的透明质酸浓度为200mg/ml ;
[0081] 3.然后翻转，使交联透明质酸凝胶薄膜的湿润面朝下平铺置于45°C条件下，交联 反应3小时；
[0082] 4.再将交联透明质酸凝胶薄膜置于溶液B中透析至pH值为中性平衡，取出平铺于 55°C条件下脱水干燥，得到厚度为0. 04_的单面二次交联后的交联透明质酸薄膜。
[0083] 步骤四、剪切造粒：
[0084] 1.将步骤三中得到的单面二次交联后的交联透明质酸薄膜，按照质量比为1:60 加入到pH值为中性的12g/L的氯化钠，0. lg/L磷酸氢二钠和0. 03g/L磷酸二氢钾生理缓冲 溶液；吸水溶胀〇. 5小时后，得到卷曲交联透明质酸凝胶；
[0085] 2.所得卷曲交联透明质酸凝胶，用匀浆机剪切造粒，剪切转速为14000rpm，制备 得卷筒状交联透明质酸凝胶微粒，长轴尺寸为〇. 6_，卷曲直径为0. 4_。
[0086] 实施例3
[0087] 步骤一、交联透明质酸凝胶的制备：
[0088] 1、称量lg透明质酸原料；
[0089] 2、将透明质酸原料质量5%的交联剂甘油三环氧丙醚，添加至pH值为9的12ml氢 氧化钾溶液中，混合均匀，得到溶液A ;
[0090] 3、再将透明质酸原料溶解于溶液A中，均质搅拌后得到浓度为83mg/ml的透明质 酸氢氧化钾凝胶；
[0091] 4、然后置于50°C水浴温度下，交联反应2. 5小时，得到交联透明质酸凝胶。步骤 二、脱水交联透明质酸薄膜的制备：
[0092] 1、将步骤一得到的交联透明质酸凝胶，置于辊压机中，挤压成厚度为0. 2_交联 透明质酸凝胶薄膜；
[0093] 2、将交联透明质酸凝胶薄膜置于pH值为中性的0. 3g/L磷酸氢二钠和0. 1磷酸二 氢钾缓冲溶液B中透析至pH值为中性平衡后；
[0094] 3、取出平铺于30°C条件下脱水干燥，得到厚度为0. 04mmm的脱水交联透明质酸薄 膜；
[0095] 步骤三、单面二次交联：
[0096] 1.将透明质酸原料质量2. 5%的交联剂甘油三环氧丙醚，添加至pH值为9的6ml 氢氧化钾溶液中，分散均匀，得到溶液C ;
[0097] 2.在步骤二获得的脱水交联透明质酸薄膜朝上的一面，均匀喷洒溶液C，使该面 浸润至薄膜中的透明质酸浓度为167mg/ml ;
[0098] 3.然后翻转，使交联透明质酸凝胶薄膜的湿润面朝下平铺置于50°C条件下，交联 反应2. 5小时；
[0099] 4.再将交联透明质酸凝胶薄膜置于溶液B中透析至pH值为中性平衡；
[0100] 5.取出平铺于30°C条件下脱水干燥，得到厚度为0.04_的单面二次交联后的交 联透明质酸薄膜。
[0101] 步骤四、剪切造粒：
[0102] 1.将步骤三中得到的单面二次交联后的交联透明质酸薄膜，按照质量比为1:30 加入到pH值为中性的6g/L的氯化钠，0. 3g/L磷酸氢二钠和0. lg/L磷酸二氢钾生理缓冲溶 液；吸水溶胀1. 5小时后，得到卷曲交联透明质酸凝胶；
[0103] 2.所得卷曲交联透明质酸凝胶，用匀浆机剪切造粒，剪切转速为15000rpm，制备 得卷筒状交联透明质酸凝胶微粒，长轴尺寸为〇. 5_，卷曲直径为0. 3_。
[0104] 实施例4
[0105] 步骤一、交联透明质酸凝胶的制备：
[0106] 1、称量lg透明质酸原料；
[0107] 2、将透明质酸原料质量0. 5%的交联剂烯丙基缩水甘油醚，添加至pH值为12的 8ml氢氧化钠溶液中，混合均匀，得到溶液A ;
[0108] 3、再将透明质酸原料溶解于溶液A中，均质搅拌后得到浓度为125mg/ml的透明质 酸氢氧化钠凝胶；
[0109] 4、然后置于55°C水浴温度下，交联反应3. 5小时，得到交联透明质酸凝胶。步骤 二、脱水交联透明质酸薄膜的制备：
[0110] 1、将步骤一得到的交联透明质酸凝胶，置于辊压机中，挤压成厚度为〇. 1_交联 透明质酸凝胶薄膜，
[0111] 2、将交联透明质酸凝胶薄膜置于pH值为中性的0.3g/L磷酸氢二钠和0. lg/L磷 酸二氢钠缓冲溶液透析至pH值为中性平衡；
[0112] 3、取出平铺于45°C条件下脱水干燥，得到厚度为0. 03mmm的脱水交联透明质酸薄 膜；
[0113] 步骤三、单面二次交联：
[0114] 1.将透明质酸原料质量0.25%的交联剂烯丙基缩水甘油醚，添加至pH值为12 的4ml氢氧化钠溶液中，分散均匀，得到溶液C ;
[0115] 2.在步骤二获得的脱水交联透明质酸薄膜朝上的一面，均匀喷洒溶液C，使该面 浸润至薄膜中的透明质酸浓度为250mg/ml ;
[0116] 3.然后翻转，使交联透明质酸凝胶薄膜的湿润面朝下平铺置于55°C条件下，交联 反应3. 5小时；
[0117] 4.再将交联透明质酸凝胶薄膜置于溶液B中透析至pH值为中性平衡；
[0118] 5.取出平铺于45°C条件下脱水干燥，得到厚度为0. 03mm的单面二次交联后的交 联透明质酸薄膜。
[0119] 步骤四、剪切造粒：
[0120] 1.将步骤三中得到的单面二次交联后的交联透明质酸薄膜，按照质量比为1:30 加入到pH值为中性的12g/L的氯化钠，0. 3g/L磷酸氢二钠和0. lg/L磷酸二氢钠生理缓冲 溶液；吸水溶胀〇. 5小时后，得到卷曲交联透明质酸凝胶；
[0121] 2.所得卷曲交联透明质酸凝胶，用匀浆机剪切造粒，剪切转速为20000rpm，制备 得卷筒状交联透明质酸凝胶微粒，长轴尺寸为〇. 2_，卷曲直径为0. 1_。
[0122] 实施例5
[0123] 步骤一、交联透明质酸凝胶的制备：
[0124] 1、称量lg透明质酸原料；
[0125] 2、将透明质酸原料质量4%的交联剂新戊二醇二缩水甘油醚，添加至pH值为10 的20ml氢氧化钠溶液中，混合均匀，得到溶液A ;
[0126] 3、再将透明质酸原料溶解于溶液A中，均质搅拌后得到浓度为50mg/ml的透明质 酸氢氧化钠凝胶；
[0127] 4、然后置于60°C水浴温度下，交联反应3小时，得到交联透明质酸凝胶。
[0128] 步骤二、脱水交联透明质酸薄膜的制备：
[0129] 1、将步骤一得到的交联透明质酸凝胶，置于辊压机中，挤压成厚度为0. 3_交联 透明质酸凝胶薄膜，
[0130] 2、将交联透明质酸凝胶薄膜置于pH值为中性的0. 3g/L磷酸氢二钠和0. 02g/L磷 酸二氢钠缓冲溶液中透析至pH值为中性平衡；
[0131] 3、取出平铺于60°C条件下脱水干燥，得到厚度为0. 05_的脱水交联透明质酸薄 膜；
[0132] 步骤三、单面二次交联：
[0133] 1.将透明质酸原料质量2%的交联剂新戊二醇二缩水甘油醚，添加至pH值为10 的l〇ml氢氧化钠溶液中，分散均匀，得到溶液C ;
[0134] 2.在步骤二获得的脱水交联透明质酸薄膜朝上的一面，均匀喷洒溶液C，使该面 浸润至薄膜中的透明质酸浓度为l〇〇mg/ml ;
[0135] 3.然后翻转，使交联透明质酸凝胶薄膜的湿润面朝下平铺置于60°C条件下，交联 反应3小时；
[0136] 4.再将交联透明质酸凝胶薄膜置于溶液B中透析至pH值为中性平衡；
[0137] 5.取出平铺于60°C条件下脱水干燥，得到厚度为0. 05_的单面二次交联后的交 联透明质酸薄膜。
[0138] 步骤四、剪切造粒：
[0139] 1.将步骤三中得到的单面二次交联后的交联透明质酸薄膜，按照质量比为1:60 加入到pH值为中性的10g/L的氯化钠，0. 3g/L磷酸氢二钠和0. 02g/L磷酸二氢钠生理缓冲 溶液；吸水溶胀2小时后，得到卷曲交联透明质酸凝胶；
[0140] 2.所得卷曲交联透明质酸凝胶，用匀浆机剪切造粒，剪切转速为16000rpm，制备 得卷筒状交联透明质酸凝胶微粒，长轴尺寸为〇. 6_，卷曲直径为0. 3_。
[0141] 实施例6
[0142] 步骤一、交联透明质酸凝胶的制备：
[0143] 1、称量lg透明质酸原料；
[0144] 2、将透明质酸原料质量5%的交联剂1，6-己二醇二缩水甘油醚，添加至pH值为 10的l〇ml氨水溶液中，混合均匀，得到溶液A ;
[0145] 3、再将透明质酸原料溶解于溶液A中，均质搅拌后得到浓度为100mg/ml的透明质 酸氨水凝胶；
[0146] 4、然后置于50°C水浴温度下，交联反应4. 5小时，得到交联透明质酸凝胶。步骤 二、脱水交联透明质酸薄膜的制备：
[0147] 1、将步骤一得到的交联透明质酸凝胶，置于辊压机中，挤压成厚度为0. 3mm交联 透明质酸凝胶薄膜，
[0148] 2、将交联透明质酸凝胶薄膜置于pH值为中性的0. 2g/L磷酸氢二钠和0. 05g/L磷 酸二氢钠缓冲溶液中透析至pH值为中性平衡；
[0149] 3、取出平铺于50°C条件下脱水干燥，得到厚度为0. 06mm的脱水交联透明质酸薄 膜；
[0150] 步骤三、单面二次交联：
[0151] 1.将透明质酸原料质量2. 5%的交联剂1，6_己二醇二缩水甘油醚，添加至pH值 为10的5ml氨水溶液中，分散均匀，得到溶液C ;
[0152] 2.在步骤二获得的脱水交联透明质酸薄膜朝上的一面，均匀喷洒溶液C，使该面 浸润至薄膜中的透明质酸浓度为200mg/ml ;
[0153] 3.然后翻转，使交联透明质酸凝胶薄膜的湿润面朝下平铺置于50°C条件下，交联 反应4. 5小时；
[0154] 4.再将交联透明质酸凝胶薄膜置于溶液B中透析至pH值为中性平衡，取出平铺于 50°C条件下脱水干燥，得到厚度为0. 06mm的单面二次交联后的交联透明质酸薄膜。
[0155] 步骤四、剪切造粒：
[0156] 1.将步骤三中得到的单面二次交联后的交联透明质酸薄膜，按照质量比为1:50 加入到pH值为中性的10g/L的氯化钠，0. 2g/L磷酸氢二钠和0. 05g/L磷酸二氢钠生理缓冲 溶液；吸水溶胀1小时后，得到卷曲交联透明质酸凝胶；
[0157] 2.所得卷曲交联透明质酸凝胶，用匀浆机剪切造粒，剪切转速为20000rpm，制备 得卷筒状交联透明质酸凝胶微粒，长轴尺寸为0. 2_，卷曲直径为0. 1_。
[0158] 以下是现有产品与本发明产品的对比试验：
[0159] 选取瑞蓝粒径中位数为400um产品，与本发明制备粒径中位数为400um的产品，做 弹性模量检测与体内降解实验。弹性模量检测结果瑞蓝产品G' (0. 1Hz)为530?570Pa， 本发明产品G' (0. 1Hz)为710?750Pa，如图1所示；体内降解实验瑞蓝产品大鼠皮下植入 52周材料降解率为90?100%，本发明产品大鼠皮下植入52周材料降解率为70?80%。 降解效果如图2所示，图中：2-A、2-B为瑞蓝产品，2-C、2-D为本发明产品。
[0160] 与现有产品相比，本发明制备的卷曲筒状凝胶微粒，其长轴方向提供凝胶微粒一 定的刚性，以及卷曲结构面所固有的曲面张力，共同加强了交联透明质酸凝胶的弹性模量。 并且依靠调节两面交联点密度的差异以及成膜的厚度就可以调节卷曲程度，影响微粒弹性 模量，进而扩展凝胶微粒在不同部位填充的适用范围，延长凝胶体内保留时间。同时，成膜 干燥透析工艺，能更有效的去除残留交联剂，提升了交联透明质酸凝胶微粒在体内填充的 安全性。
【权利要求】
1. 一种交联透明质酸凝胶微粒，其特征在于：凝胶微粒呈卷曲筒状，长轴尺寸为 0. 2mm?1. 0mm,卷曲直径为0· 1mm?0· 8_。
2. -种交联透明质酸凝胶微粒的制备方法，其特征在于，由如下方法、步骤制备而成： 步骤一、交联透明质酸凝胶的制备： 称量一定质量透明质酸原料； 将透明质酸原料质量〇. 5%?5 %的交联剂，添加至pH值为9?13的碱性溶液中，混 合均匀，得到交联剂碱性溶液A ; 再将透明质酸原料溶解于交联剂溶液A中，均质搅拌后得到浓度为67mg/ml?125mg/ ml的透明质酸碱性凝胶； 然后置于45°C?65°C水浴温度下，交联反应1. 5小时-4. 5小时，得到交联透明质酸 凝胶； 所述碱性溶液，是NaOH或Κ0Η或氨水溶液； 所述交联剂，为缩水甘油醚类交联剂，为：1，4-丁二醇二缩水甘油醚、乙二醇二缩水甘 油醚、甘油三环氧丙醚、烯丙基缩水甘油醚、新戊二醇二缩水甘油醚或1，6-己二醇二缩水 甘油醚之其中一种； 步骤二、制备脱水透明质酸薄膜： 将步骤一得到的交联透明质酸凝胶置于机械挤压成型设备中，挤压成厚度为0. 1mm? 0. 3mm交联透明质酸凝胶薄膜； 将凝胶薄膜置于溶液B中透析至pH值为中性后平衡；取出平铺于30°C?60°C条件下 脱水干燥，得到厚度为〇. 〇2mm?0. 06mm的脱水交联透明质酸薄膜； 所述溶液B是pH值为中性的磷酸盐缓冲溶液，该磷酸盐缓冲溶液，是指0. 1?0.3g/L 磷酸氢二钠和〇. 01?〇. lg/L磷酸二氢钠缓冲溶液或0. 1?0. 3g/L磷酸氢二钠和0. 01? 〇. lg/L磷酸二氢钾缓冲溶液； 步骤三、单面二次交联： 将透明质酸原料质量〇. 25 %?2. 5 %的缩水甘油醚类交联剂，放入pH值为9?13的 碱性溶液中，分散均匀，得到交联剂碱性溶液C ; 在步骤二获得的脱水交联透明质酸薄膜朝上的一面，均匀喷洒交联剂碱性溶液C，使该 面浸润至薄膜中的透明质酸浓度为134mg/ml?250mg/ml ; 然后翻转，使交联透明质酸薄膜的湿润面朝下平铺，置于45°C _65°C条件下，交联反应 1. 5小时?4. 5小时； 再将交联透明质酸薄膜置于溶液B中透析，至pH值为中性平衡； 取出平铺于30°C -60°C条件下脱水干燥，得到厚度为0. 02mm?0. 06mm的单面二次交 联后的交联透明质酸薄膜； 步骤四、剪切造粒： 将步骤三中得到的单面二次交联后的交联透明质酸薄膜，按照质量比为1:30?1:60 加入到pH值为中性的磷酸盐生理缓冲液中，吸水溶胀0. 5小时?2小时后，得到卷曲交联 透明质酸凝胶； 所得卷曲交联透明质酸凝胶用机械剪切设备剪切造粒，剪切转速为1 〇 〇 〇 〇rpm? 20000rpm，制备得长轴尺寸在0. 2mm?1mm，卷曲直径在0. 1mm?0. 8mm的卷筒状交联透明 质酸凝胶微粒； 所述pH值为中性的磷酸盐生理缓冲液，为下述两种组合之一， 组合之一 ：6?12g/L的氯化钠，0. 1?0. 3g/L磷酸氢二钠和0. 01?0. lg/L磷酸二氢 钠生理缓冲溶液； 组合之二：6?12g/L的氯化钠，0. 1?0. 3g/L磷酸氢二钠和0. 01?0. lg/L磷酸二氢 钾生理缓冲溶液。
【文档编号】C08L5/08GK104194008SQ201410389983
【公开日】2014年12月10日 申请日期:2014年8月8日 优先权日:2014年8月8日
【发明者】宋坤, 刘博文, 刘影, 张海龙, 卫方琦 申请人:陕西佰傲再生医学有限公司