一种枸杞多糖的提取方法
【专利摘要】本发明属于多糖提取【技术领域】，具体涉及一种枸杞多糖的提取方法。一种枸杞多糖的提取方法，包括下述的步骤：选择晒干的枸杞，粉碎后过40-80目筛，得枸杞粉，在枸杞粉中加水并搅拌均匀，枸杞粉与水的重量比例为1：5-10，在水中浸泡8-16小时，加入活性炭脱色，加入纤维素酶酶解，再加入碱性蛋白酶和无花果蛋白酶，在微波条件下酶解，酶解后浓缩并脱色，离心，取上清液浓缩醇沉，再离心，采用乙醇清洗沉淀，冷冻干燥后并粉碎，得枸杞多糖。采用本发明的方法从枸杞中提取多糖，采用酶作用条件温和，采用各种不同的酶将枸杞中的脂肪、纤维素酶解，将其中的多糖提取出来，提高了枸杞的利用率，采用本发明的方法得到多糖不仅得率高，而且纯度也高。
【专利说明】一种枸杞多糖的提取方法
【技术领域】
[0001]本发明属于多糖提取【技术领域】，具体涉及一种枸杞多糖的提取方法。
[0002]
【背景技术】
枸杞多糖是从枸杞中提取而得的一种水溶性多糖。已明确该多糖系蛋白多糖，由阿拉伯糖、葡萄糖、半乳糖、甘露糖、木糖、鼠李糖6种单糖成分组成。经研究表明，枸杞多糖是枸杞子调节免疫、延缓衰老的主要活性成分，可改善老年人易疲劳、食欲不振和视力模糊等症状，并具有降血脂、抗脂肪肝、抗衰老等作用。
[0003]现有枸杞多糖的提取工艺多为传统的热水浸提法或有机溶剂(乙醚、乙醇、石油醚等)脱脂后热水浸提法，这些常规方法中溶剂用量大、耗时长且提取率低，为提高枸杞子的经济效益，提高枸杞子中有效成发的提取率，寻找快速而有效的枸杞多糖提取方法是枸杞产业化发展的一个重要研究课题。现有枸杞多糖的提取工艺多为传统的热水浸提法或有机溶剂(乙醚、乙醇、石油醚等)脱脂后热水浸提法，这些常规方法中溶剂用量大、耗时长且提取率低，为提高枸杞子的经济效益，提高枸杞子中有效成发的提取率，寻找快速而有效的枸杞多糖提取方法是枸杞产业化发展的一个重要研究课题。
[0004]CN102887960披露了一种提取枸杞多糖的工艺，其特征在于工艺流程为:
枸杞经过除杂、干燥、粉碎后，用功能提取器在石油醚脱脂脱色，滤去石油醚，再经微波提取，溶液过滤，取滤液加入无水乙醇醇沉，溶液在8000r/min转速下离心1min,弃去上层清液得到沉淀，用蒸馏水溶解沉淀，准确吸取该溶液，进行显色，测定其吸光值，根据所得回归线方程计算多糖含量。最佳工艺参数为最终选择料液质量体积比1: 10、提取功率2200W、提取时间25min，在此优化条件下多糖得率为6.11%。
[0005]上述的工艺提取枸杞多糖的得率并不高，因此需针对上述的方法进行改进，设计一种高得率的枸杞多糖的提取方法。
【发明内容】
[0006]为了解决上述的技术问题，本发明提供了一种得率较高的枸杞多糖的提取方法。
[0007]本发明枸杞多糖的提取方法是通过下述的技术方案来实现的:
一种枸杞多糖的提取方法，包括下述的步骤:
选择晒干的枸杞，粉碎后过40-80目筛，得枸杞粉，在枸杞粉中加水并搅拌均匀，枸杞粉与水的重量比例为1:5-10，在水中浸泡8-16小时，在上述的溶液中加入活性炭，所述的活性炭占枸杞粗多糖浓缩液重量的2-6%，搅拌0.2-0.5h，过滤滤出活性炭；加入纤维素酶，纤维素酶的添加量为0.5-0.9%、酶解温度45°C、pH值5，将上述的原料置于微波提取设备中提取，微波的功率为400-600W，频率为800MHZ，酶解0.1-0.5h ；
再加入碱性蛋白酶和无花果蛋白酶，碱性蛋白酶的加入量为0.2-0.6%，无花果蛋白酶的加入量为0.2-0.5%，酶解温度50°C、pH值6.8-7.5，将上述的原料置于微波提取设备中提取，微波的功率为400-600W，频率为800MHZ，酶解0.1-0.5h，酶解后在100_105°C下灭酶5-10min,得酶解液； 将上述的酶解液置于真空浓缩器中浓缩，减压低温浓缩至酶解液至原体积的1/3，得枸杞粗多糖浓缩液；
将上述的枸杞粗多糖浓缩离心10-20 min，离心转速为4500 rpm，将上清液与沉淀分别收集；
取上清液过滤去渣，过滤后得到的滤液在60-70°C下浓缩，浓缩至其浓度为60-70%，浓缩液按1:4比例加入95%乙醇沉淀静置10-20小时、离心10-20 min，离心转速为4500rpm，收集沉淀并用乙醇反复清洗2-3次，冷冻干燥至水分含量为4_6%后，再在_1_4°C下进行粉碎，得可溶性多糖；
上述的加酶量均为酶占超微粉碎后的枸杞的重量百分比。
[0008]优选的，枸杞与水的重量比例为1:9 ；
优选的，碱性蛋白酶的用量是0.45% ；
无花果蛋白酶的添加量为0.4%。
[0009]优选的，一种枸杞多糖的提取方法，该方法包括下述的步骤:
选择晒干的枸杞，粉碎后过60目筛，得枸杞粉，在枸杞粉中加水并搅拌均匀，枸杞粉与水的重量比例为1:7.5，在水中浸泡10小时，在上述的溶液中加入活性炭，所述的活性炭占枸杞粗多糖浓缩液重量的4%，搅拌0.3h，过滤滤出活性炭；加入纤维素酶，纤维素酶的添加量为0.75%、酶解温度45°C、pH值5，将上述的原料置于微波提取设备中提取，微波的功率为 400-600W,频率为 800MHZ,酶解 0.1-0.5h ；
再加入碱性蛋白酶和无花果蛋白酶，碱性蛋白酶的加入量为0.45%，无花果蛋白酶的加入量为0.4%，酶解温度45°C、pH值6.0，将上述的原料置于微波提取设备中提取，微波的功率为500W，频率为800MHZ，酶解0.3h，酶解后在100°C下灭酶6min，得酶解液；
将上述的酶解液置于真空浓缩器中浓缩，减压低温浓缩至酶解液至原体积的1/3，得枸杞粗多糖浓缩液；
将上述的枸杞粗多糖浓缩液离心15 min，离心转速为4500 rpm，将上清液与沉淀分别收集；
取上清液过滤去渣，过滤后得到的滤液在65°C下浓缩，浓缩至其浓度为65%，浓缩液按I:4比例加入95%乙醇沉淀静置10-20小时、离心15 min，离心转速为4500 rpm，收集沉淀并用乙醇反复清洗2-3次，冷冻干燥至水分含量为5%后，再在-1-4°C下进行粉碎，得可溶性多糖；
上述的加酶量均为酶占超微粉碎后的枸杞的重量百分比。
[0010]本发明的方法中，冷冻粉碎原理冷冻粉碎是利用物料在低温状态下的“低温脆性”，即物料随着温度的降低，其硬度和脆性增加，而塑性及韧性降低，在一定温度下，用一个很小的力就能将其粉碎。经冷冻粉碎的物料，其粒度可达到“超细微”的程度，因此可以生产“超细微食品”。
[0011]物料的“低温脆性”是与一种称为玻璃化转变的现象密切相关的。所谓玻璃化转变原本是指非晶态聚合物在温度变化时会出现力学性质的变化，形成橡胶态和玻璃态两种物理状态；而且温度变化过程可以产生由橡胶态向玻璃态的转变。在橡胶态时，物料的韧性大，变形能力强；而在玻璃态时，物料硬度和脆性大，变形能力很小。其实玻璃化转变现象并非聚合物所特有，食品和农产品同样会出现玻璃化转变过程。不过，因为食品和农产品的组成结构比较复杂，所以其玻璃化转变要复杂得多，如可能存在多级玻璃化转变过程和反玻璃化转变现象。一般地，我们称物料由橡胶态向玻璃态转变时所要求的温度为玻璃化转变温度。根据前面提到的橡胶态和玻璃态的性质，可以认为物料的玻璃化转变温度对应着物料的“脆化温度”。
[0012]因此，食品和农产品的冷冻粉碎原理就是:首先使物料低温冷冻到玻璃化转变温度或脆化温度以下，再用粉碎机将其粉碎。在食品和农产品快速降温过程中，会造成内部各部位不均匀的收缩而产生内应力，在此应力的作用下，物料内部薄弱部位产生微裂纹并导致内部组织的结合力降低。在外部较小作用力就使内部裂纹迅速扩大而破碎。
[0013]冷冻粉碎机系统在物料粉碎过程中，其冷源形成一个闭路循环系统，使能源得到充分利用，节省能耗:粉碎用的冷源温度可降至负196度，根据物料的脆化点温度，在粉碎过程中其温度可调控，选择最佳粉碎温度，降低能耗:粉碎细度可达到10-700目，甚至达到微米μ等细度:使用液氮作为研磨介质，实现超低温粉碎，物料的防爆，防氧化等综合效果O
[0014]冷冻粉碎适用于多糖，因为多糖在常温粉碎时容易产生粘结、堵塞和性质变化等问题，并且效果和效率差。
[0015]因此，本发明中采用冷冻粉碎的方法对提取得到的多糖，保持了多糖的质量不受影响。
[0016]本发明的有益效果在于，采用酶作用条件温和，采用各种不同的酶将枸杞中的脂肪、纤维素酶解，同时从枸杞中提取多糖，最大限度的利用枸杞，而且采用本发明的方法得到的多糖，其得率和纯度高。
【具体实施方式】
[0017]下面结合具体实施例对本发明作更进一步的说明，以便本领域的技术人员更了解本发明，但并不因此限制本发明。
[0018]以下的检测方法，如无特殊说明；采用苯酚-硫酸法测多糖的含量。
[0019]实施例1
一种枸杞多糖的提取方法，该方法包括下述的步骤:
选择晒干的枸杞，粉碎后过60目筛，得枸杞粉，在枸杞粉中加水并搅拌均匀，枸杞粉与水的重量比例为1:7.5，在水中浸泡10小时，在上述的溶液中加入活性炭，所述的活性炭占枸杞粗多糖浓缩液重量的2-6%，搅拌0.3h，过滤滤出活性炭；入纤维素酶，纤维素酶的添加量为0.75%、酶解温度45°C、pH值5，将上述的原料置于微波提取设备中提取，微波的功率为500W,频率为800MHZ,酶解0.3h ；
再加入碱性蛋白酶和无花果蛋白酶，碱性蛋白酶的加入量为0.45%，无花果蛋白酶的加入量为0.4%，酶解温度50°C、pH值7.2，将上述的原料置于微波提取设备中提取，微波的功率为500W，频率为800MHZ，酶解0.3h，酶解后在100°C下灭酶6min，得酶解液；
将上述的酶解液置于真空浓缩器中浓缩，减压低温浓缩至酶解液至原体积的1/3，得枸杞粗多糖浓缩液；
在枸杞粗多糖的浓缩液中加入活性炭，活性炭占枸杞粗多糖浓缩液重量的4 %，搅拌
0.3h，过滤滤出活性炭； 离心15 min ,离心转速为4500 rpm,将上清液与沉淀分别收集；
取上清液过滤去渣，过滤后得到的滤液在65°C下浓缩，浓缩至其浓度为65%，浓缩液按I:4比例加入95%乙醇沉淀静置15小时、离心15 min，离心转速为4500 rpm，收集沉淀并用乙醇反复清洗2-3次，冷冻干燥至水分含量为5%后，再在-1-4°C下进行粉碎，得可溶性多糖；
上述的加酶量均为酶占超微粉碎后的枸杞的重量百分比。
[0020]多糖的提取率为:14.52%，纯度为90.23%。
[0021]实施例2
一种枸杞多糖的提取方法，该方法包括下述的步骤:
选择晒干的枸杞，粉碎后过40目筛，得枸杞粉，在枸杞粉中加水并搅拌均匀，枸杞粉与水的重量比例为1:5，在水中浸泡8小时，加入纤维素酶，纤维素酶的添加量为0.5%、酶解温度45°C、pH值5，将上述的原料置于微波提取设备中提取，微波的功率为400W，频率为800MHZ，酶解 0.1h ；
再加入碱性蛋白酶和无花果蛋白酶，碱性蛋白酶的加入量为0.2%，无花果蛋白酶的加入量为0.2%，酶解温度50°C、pH值6.8，将上述的原料置于微波提取设备中提取，微波的功率为400W，频率为800MHZ，酶解0.3h，酶解后在100°C下灭酶5min，得酶解液；
将上述的酶解液置于真空浓缩器中浓缩，减压低温浓缩至酶解液至原体积的1/3，得枸杞粗多糖浓缩液；
在枸杞粗多糖的浓缩液中加入活性炭，活性炭占枸杞粗多糖浓缩液重量的4 %，搅拌0.3h，过滤滤出活性炭；
离心15 min ,离心转速为4500 rpm,将上清液与沉淀分别收集；
取上清液过滤去渣，过滤后得到的滤液在65°C下浓缩，浓缩至其浓度为65%，浓缩液按I:4比例加入95%乙醇沉淀静置10小时、离心15 min，离心转速为4500 rpm，收集沉淀并用乙醇反复清洗2-3次，冷冻干燥至水分含量为5%后，再在-1-4°C下进行粉碎，得可溶性多糖；
上述的加酶量均为酶占超微粉碎后的枸杞的重量百分比。
[0022]多糖的提取率为:14.21%，纯度为90.17%。
[0023]实施例3
一种枸杞多糖的提取方法，该方法包括下述的步骤:
选择晒干的枸杞，粉碎后过80目筛，得枸杞粉，在枸杞粉中加水并搅拌均匀，枸杞粉与水的重量比例为1: 10，在水中浸泡16小时，加入纤维素酶，纤维素酶的添加量为0.9%,酶解温度45°C、pH值5，将上述的原料置于微波提取设备中提取，微波的功率为600W，频率为 800MHZ，酶解 0.5h ；
再加入碱性蛋白酶和无花果蛋白酶，碱性蛋白酶的加入量为0.6%，无花果蛋白酶的加入量为0.5%，酶解温度50°C、pH值7.5，将上述的原料置于微波提取设备中提取，微波的功率为500W，频率为800MHZ，酶解0.3h，酶解后在100°C下灭酶6min，得酶解液；
将上述的酶解液置于真空浓缩器中浓缩，减压低温浓缩至酶解液至原体积的1/3，得枸杞粗多糖浓缩液；
在枸杞粗多糖的浓缩液中加入活性炭，活性炭占枸杞粗多糖浓缩液重量的4 %，搅拌0.3h，过滤滤出活性炭；
离心15 min ,离心转速为4500 rpm,将上清液与沉淀分别收集；
取上清液过滤去渣，过滤后得到的滤液在65°C下浓缩，浓缩至其浓度为65%，浓缩液按I:4比例加入95%乙醇沉淀静置20小时、离心15 min，离心转速为4500 rpm，收集沉淀并用乙醇反复清洗2-3次，冷冻干燥至水分含量为5%左右后，再在-1-4°C下进行粉碎，得可溶性多糖；
上述的加酶量均为酶占超微粉碎后的枸杞的重量百分比。
[0024] 多糖的提取率为:14.37%，纯度为90.66%。
【权利要求】
1.一种枸杞多糖的提取方法，包括下述的步骤: 选择晒干的枸杞，粉碎后过40-80目筛，得枸杞粉，在枸杞粉中加水并搅拌均匀，枸杞粉与水的重量比例为1:5-10，在水中浸泡8-16小时，在上述的溶液中加入活性炭，所述的活性炭占枸杞粗多糖浓缩液重量的2-6%，搅拌0.2-0.5h，过滤滤出活性炭； 加入纤维素酶，纤维素酶的添加量为0.5-0.9%、酶解温度45°C、pH值5，将上述的原料置于微波提取设备中提取，微波的功率为400-600W，频率为800MHZ，酶解0.1-0.5h ； 再加入碱性蛋白酶和无花果蛋白酶，碱性蛋白酶的加入量为0.2-0.6%，无花果蛋白酶的加入量为0.2-0.5%，酶解温度50°C、pH值6.8-7.5，将上述的原料置于微波提取设备中提取，微波的功率为400-600W，频率为800MHZ，酶解0.1-0.5h，酶解后在100_105°C下灭酶5-10min,得酶解液； 将上述的酶解液置于真空浓缩器中浓缩，减压低温浓缩至酶解液至原体积的1/3，得枸杞粗多糖浓缩液； 将上述的枸杞粗多糖浓缩液离心10-20 min，离心转速为4500 rpm，将上清液与沉淀分别收集； 取上清液过滤去渣，过滤后得到的滤液在60-70°C下浓缩，浓缩至其浓度为60-70%，浓缩液按1:4比例加入95%乙醇沉淀静置10-20小时、离心10-20 min，离心转速为4500rpm，收集沉淀并用乙醇反复清洗2-3次，冷冻干燥至水分含量为4_6%后，再在_1_4°C下进行粉碎，得可溶性多糖； 上述的加酶量均为酶占超微粉碎后的枸杞的重量百分比。
2.如权利要求1所述一种枸杞多糖的提取方法，其特征在于，所述的枸杞与水的重量比例为1:9。
3.如权利要求1所述的一种枸杞多糖的提取方法，其特征在于，所述的碱性蛋白酶的用量是0.45%。
4.如权利要求1所述的一种枸杞多糖的提取方法，其特征在于，所述的无花果蛋白酶的添加量为0.4%。
5.如权利要求1-4中任一项所述的一种枸杞多糖的提取方法,其特征在于,所述的方法包括下述的步骤: 选择晒干的枸杞，粉碎后过60目筛，得枸杞粉，在枸杞粉中加水并搅拌均匀，枸杞粉与水的重量比例为1:7.5，在水中浸泡10小时，在上述的溶液中加入活性炭，所述的活性炭占枸杞粗多糖浓缩液重量的4%，搅拌0.3h，过滤滤出活性炭； 加入纤维素酶，纤维素酶的添加量为0.75%、酶解温度45°C、pH值5，将上述的原料置于微波提取设备中提取，微波的功率为500W，频率为800MHZ，酶解0.3h ； 再加入碱性蛋白酶和无花果蛋白酶，碱性蛋白酶的加入量为0.45%，无花果蛋白酶的加入量为0.4%，酶解温度50°C、pH值7.2，将上述的原料置于微波提取设备中提取，微波的功率为500W，频率为800MHZ，酶解0.3h，酶解后在100°C下灭酶6min，得酶解液； 将上述的酶解液置于真空浓缩器中浓缩，减压低温浓缩至酶解液至原体积的1/3，得枸杞粗多糖浓缩液； 将上述的枸杞粗多糖浓缩液离心15 min，离心转速为4500 rpm，将上清液与沉淀分别收集； 取上清液过滤去渣，过滤后得到的滤液在65°C下浓缩，浓缩至其浓度为65%，浓缩液按I:4比例加入95%乙醇沉淀静置10-20小时、离心15 min，离心转速为4500 rpm，收集沉淀并用乙醇反复清洗2-3次，冷冻干燥至水分含量为5%后，再在-1-4°C下进行粉碎，得可溶性多糖； 上述的加酶量均为酶占超微粉碎后的枸杞的重量百分比。
【文档编号】C08B37/00GK104311690SQ201410628540
【公开日】2015年1月28日 申请日期:2014年11月11日 优先权日:2014年11月11日
【发明者】迟宗磊, 藏伟功, 丁振洋 申请人:济南凯因生物科技有限公司