作为用于靶向癌症治疗的细胞毒性药物递送系统的抗-RON单克隆抗体的制作方法与工艺

文档序号:13083628阅读:来源:国知局
技术特征:
1.一种结合人RON的分离的单克隆抗体,其包括选自以下的单克隆抗体:Zt/g4-DM1、Zt/c1-DM1、Zt/64、3F12、B9、1G4或Zt/f2。2.权利要求1所述的抗体,其中所述单克隆抗体包括插入到人和人源化框架序列之间的互补决定区(CDR)序列。3.权利要求1所述的抗体,其中所述单克隆抗体包括插入到还包括人种系框架序列的人和人源化框架序列之间的CDR序列。4.权利要求1所述的抗体,其中所述单克隆抗体包括插入到人和人源化框架序列之间的CDR序列,其中所述框架序列在27、30、48、67或78位氨基酸处包括至少一个替换,其中氨基酸编号基于Kabat。5.权利要求1所述的抗体,其中所述单克隆抗体与细胞毒性剂组合,以使所述抗体靶向RON表达蛋白并且所述RON-单克隆抗体和细胞毒性剂被内化到细胞中。6.权利要求1所述的抗体,其中所述单克隆抗体与细胞毒性剂结合,以使所述抗体靶向RON表达蛋白并且所述RON-单克隆抗体和细胞毒性剂被内化到细胞中。7.权利要求1所述的抗体,其中免疫球蛋白重链可变区包括:CDRH1,其包括选自SEQIDNO.:9或15的氨基酸序列;CDRH2,其包括SEQIDNO.:10或16的氨基酸序列;和CDRH3,其包括SEQIDNO.:11或17的氨基酸序列。8.权利要求1所述的抗体,其中免疫球蛋白轻链可变区包括:CDRL1,其包括SEQIDNO.:12或18的氨基酸序列;CDRL2,其包括SEQIDNO.:13或19的氨基酸序列;和CDRL3,其包括SEQIDNO.:14或20的氨基酸序列。9.一种分离的核酸,其包括编码单克隆抗体的免疫球蛋白重链可变区或免疫球蛋白轻链可变区中的至少一个的核苷酸序列,所述单克隆抗体选自Zt/g4-DM1、Zt/c1-DM1、Zt/64、3F12、B9、1G4或Zt/f2。10.一种表达载体,其包括表达至少一种单克隆抗体的核酸,所述单克隆抗体选自Zt/g4-DM1、Zt/c1-DM1、Zt/64、3F12、B9、1G4或Zt/f2。11.一种杂交瘤细胞,其选自Zt/g4-DM1、Zt/c1-DM1、Zt/64、3F12、B9、1G4或Zt/f2杂交瘤细胞,所述杂交瘤细胞表达结合到人RON的抗体。12.一种生产包括免疫球蛋白重链可变区或免疫球蛋白轻链可变区的多肽的方法,所述方法包括:在使宿主细胞表达包括免疫球蛋白重链可变区或免疫球蛋白轻链可变区的多肽的条件下使权利要求11所述的杂交瘤细胞生长;和纯化包括免疫球蛋白重链可变区或免疫球蛋白轻链可变区的多肽。13.一种生产结合人RON的抗体或该抗体的抗原结合片段的方法,所述方法包括:在使宿主细胞表达包括免疫球蛋白重链可变区和免疫球蛋白轻链可变区的多肽条件下使权利要求11所述的宿主细胞生长,从而生产所述抗体或该抗体的抗原结合片段;和纯化所述抗体或该抗体的抗原结合片段。14.一种结合人RON的分离的抗体,其包括与选自以下的单克隆抗体的重链和轻链的序列具有至少95%的同源性的免疫球蛋白重链可变区和免疫球蛋白轻链可变区,所述单克隆抗体选自Zt/g4-DM1、Zt/c1-DM1、Zt/64、3F12、B9、1G4或Zt/f2。15.权利要求14所述的抗体,其中所述免疫球蛋白重链可变区包括选自Zt/g4-DM1、Zt/c1-DM1、Zt/64、3F12、B9、1G4或Zt/f2的单克隆抗体的CDRH1;CDRH2;和CDRH3;和免疫球蛋白轻链可变区包括:选自Zt/g4-DM1、Zt/c1-DM1、Zt/64、3F12、B9、1G4或Zt/f2的单克隆抗体的CDRL1;CDRL2;和CDRL3。16.权利要求14所述的抗体,其中所述CDR序列插入到人和人源化框架序列之间。17.权利要求14所述的抗体,其中所述CDR序列插入到还包括人种系框架序列的人和人源化框架序列之间。18.权利要求14所述的抗体,其中所述CDR序列插入到人和人源化框架序列之间,其中所述框架序列在27、30、48、67或78位氨基酸处包括至少一个替换,其中氨基酸编号基于Kabat。19.一种抑制或减少肿瘤细胞的增殖的方法,其包括将所述细胞暴露到有效量的权利要求1所述的抗体以抑制或减少肿瘤细胞的增殖。20.一种抑制或减少哺乳动物中肿瘤生长的方法,所述方法包括将哺乳动物暴露到有效量的权利要求1所述的抗体以抑制或减少肿瘤的增殖。21.一种治疗人类患者的癌症的方法,所述方法包括给予需要其的人有效量的权利要求1所述的抗体。22.一种进行临床试验以评价候选药物的方法,所述候选药物被认为在治疗与RON过表达、低表达、激酶活性下调、RON转录本降解或RON降解中的至少一种相关的疾病病症中有用,所述方法包括:a)测量来自一组患者的疑似具有与RON有关的疾病的组织的RON;b)将候选药物给予第一亚组的患者,以及将安慰剂给予第二亚组的患者;c)在给予候选药物或安慰剂后重复步骤a);和d)确定与第二亚组的患者中发生的任何减少相比,候选药物是否在统计学上显著地减少具有RON-相关的疾病病症的细胞的数量,其中在统计学上显著的减少表明候选药物在治疗所述疾病状态中有用。23.权利要求22所述的方法,其中所述候选药物是包括选自Zt/g4-DM1、Zt/c1-DM1、Zt/64、3F12、B9、1G4或Zt/f2的重链或轻链中的至少一种的抗体。24.一种结合人RON的分离的抗体,其包括与选自以下的氨基酸序列具有至少95%的同源性的免疫球蛋白重链可变区和免疫球蛋白轻链可变区:重链:SEQIDNO.:2或4;和轻链:SEQIDNO.:6或8。25.权利要求24所述的抗体,其中所述免疫球蛋白重链可变区包括:CDRH1,其包括选自SEQIDNO.:9或15的氨基酸序列;CDRH2,其包括SEQIDNO.:10或16的氨基酸序列;CDRH3,其包括SEQIDNO.:11或17的氨基酸序列;和免疫球蛋白轻链可变区包括:CDRL1,其包括SEQIDNO.:12或18的氨基酸序列;CDRL2,其包括SEQIDNO.:13或19的氨基酸序列;和CDRL3,其包括SEQIDNO.:14或20的氨基酸序列。26.权利要求24所述的抗体,其中所述CDR序列插入到人和人源化框架序列之间。27.权利要求24所述的抗体,其中所述CDR序列插入到还包括人种系框架序列的人和人源化框架序列之间。28.权利要求24所述的抗体,其中所述氨基酸是SEQIDNO:22、24、26、28、30、32、34、36、38和40中的至少一个。29.权利要求24所述的抗体,其中所述抗体使SEQIDNO:22、24、26、28、30中的至少一个与SEQIDNOS:32、34、36、38和40中的至少一个配对。30.权利要求24所述的抗体,其中所述核酸是SEQIDNOS:21、23、25、27、29、21、33、35、37和39中的至少一个。31.权利要求24所述的抗体,其中所述CDR序列插入到人和人源化框架序列之间,其中所述框架序列在27、30、48、67或78位氨基酸处包括至少一个替换,其中所述氨基酸编号基于Kabat。32.一种分离的核酸,其包括编码权利要求24所述的免疫球蛋白重链可变区或权利要求24所述的免疫球蛋白轻链可变区中的至少一个的核苷酸序列。33.一种表达载体,其包括权利要求32所述的核酸。34.一种宿主细胞,其包括权利要求33所述的表达载体。35.一种生产包括免疫球蛋白重链可变区或免疫球蛋白轻链可变区的多肽的方法,所述方法包括:(a)在使宿主细胞表达包括免疫球蛋白重链可变区或免疫球蛋白轻链可变区的多肽的条件下使权利要求34所述的宿主细胞生长;和(b)纯化包括免疫球蛋白重链可变区或免疫球蛋白轻链可变区的多肽。36.一种生产结合人RON的抗体或该抗体的抗原结合片段的方法,所述方法包括:(a)在使宿主细胞表达包括免疫球蛋白重链可变区和免疫球蛋白轻链可变区的多肽的条件下使权利要求34所述的宿主细胞生长,从而生产抗体或该抗体的抗原结合片段;和(b)纯化抗体或该抗体的抗原结合片段。37.一种结合人RON的分离的抗体,其包括与选自以下的序列具有至少98%的同源性的免疫球蛋白重链可变区和免疫球蛋白轻链可变区:重链:SEQIDNO.:2或4;和轻链:SEQIDNO.:6或8。38.权利要求37所述的抗体,其中所述免疫球蛋白重链可变区包括:CDRH1,其包括选自SEQIDNO.:9或15的氨基酸序列;CDRH2,其包括SEQIDNO.:10或16的氨基酸序列;CDRH3,其包括SEQIDNO.:11或17的氨基酸序列;和免疫球蛋白轻链可变区包括:CDRL1,其包括SEQIDNO.:12或18的氨基酸序列;CDRL2,其包括SEQIDNO.:13或19的氨基酸序列;和CDRL3,其包括SEQIDNO.:14或20的氨基酸序列。39.权利要求37所述的抗体,其中所述CDR序列插入到人和人源化框架序列之间。40.权利要求37所述的抗体,其中所述CDR序列插入到还包括人种系框架序列的人和人源化框架序列之间。41.权利要求37所述的抗体,其中所述CDR序列插入到人和人源化框架序列之间,其中所述框架序列在27、30、48、67或78位氨基酸处包括至少一个替换,其中所述氨基酸编号基于Kabat。42.一种抑制或减少肿瘤细胞的增殖的方法,其包括将细胞暴露到有效量的权利要求32所述的抗体以抑制或减少肿瘤细胞的增殖。43.一种抑制或降低哺乳动物中肿瘤生长的方法,所述方法包括将哺乳动物暴露到有效量的权利要求32所述的抗体以抑制或减少肿瘤的增殖。44.一种治疗人类患者的癌症的方法,所述方法包括给予需要其的哺乳动物有效量的权利要求32所述的抗体。45.一种评价候选药物的方法,所述候选药物被认为在治疗与RON过表达、低表达、激酶活性下调、RON转录本降解或RON降解中的至少一种相关的疾病病症中有用,所述方法包括:a)测量来自一组患者的疑似具有与RON有关的疾病的组织的RON;b)将候选药物给予第一亚组的患者,以及将安慰剂给予第二亚组的患者;c)在给予候选药物或安慰剂后重复步骤a);和d)确定与第二亚组的患者中发生的任何减少相比,候选药物是否在统计学上显著地减少具有RON-相关的疾病病症的细胞的数量,其中在统计学上显著的降低表明候选药物在治疗所述疾病状态中有用。46.权利要求45所述的方法,其中所述候选药物为权利要求32所述的抗体。47.权利要求45所述的方法,其中所述候选药物是包括免疫球蛋白重链可变区或免疫球蛋白轻链可变区或两者的抗体,所述免疫球蛋白重链可变区包括:CDRH1,其包括选自SEQIDNO.:9或15的氨基酸序列;CDRH2,其包括SEQIDNO.:10或16的氨基酸序列;CDRH3,其包括SEQIDNO.:11或17的氨基酸序列;所述免疫球蛋白轻链可变区包括:CDRL1,其包括SEQIDNO.:12或18的氨基酸序列;CDRL2,其包括SEQIDNO.:13或19的氨基酸序列;和CDRL3,其包括SEQIDNO.:14或20的氨基酸序列。48.一种抑制或减少肿瘤细胞的增殖的方法,其包括将癌细胞暴露到有效量的权利要求1所述的抗体和协同量的化疗剂以抑制或减少肿瘤细胞的增殖。49.权利要求48所述的方法,其中所述化疗剂是以下至少一种:抗代谢物、核苷类似物或铂基抗肿瘤药。50.权利要求48所述的方法,其中所述化疗剂选自以下至少一种:5-氟尿嘧啶、吉西他滨或奥沙利铂。51.权利要求48所述的方法,其中所述化疗剂以与抗-RON抗体协同的量提供。52.一种组合物,其包含结合人RON的分离的单克隆抗体,包含选自Zt/g4-DM1、Zt/c1-DM1、Zt/64、3F12、B9、1G4或Zt/f2的单克隆抗体,和化疗剂。53.权利要求52所述的组合物,其中所述化疗剂是以下至少一种:抗代谢物、核苷类似物或铂基抗肿瘤药。54.权利要求52所述的组合物,其中所述化疗剂选自以下至少一种:5-氟尿嘧啶、吉西他滨或奥沙利铂。55.权利要求52所述的组合物,其中所述化疗剂以与抗-RON抗体协同的量提供。56.一种分离的核酸,其与包括选自以下至少一种的序列的核酸具有至少95%的序列一致性:SEQIDNO:22、24、26、28、30、32、34、36、38和40。57.一种宿主细胞,所述宿主细胞包含分离的核酸,所述分离的核酸与包括选自以下至少一种的序列的核酸具有至少95%的序列一致性:SEQIDNO:22、24、26、28、30、32、34、36、38和40。58.一种表达载体,所述表达载体包含分离的核酸,所述分离的核酸与包括选自以下至少一种的序列的核酸具有至少95%的序列一致性:SEQIDNO:22、24、26、28、30、32、34、36、38和40。
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