本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明涉及抗癌活性肽变体。
背景技术：
多肽抗癌药物是近年来抗癌药物研发的热点。现有技术中，专利申请zl200710035478.8从新疆穴居狼蛛粗毒中分离纯化获得的抗癌活性肽，为24肽。这种多肽能诱导细胞凋亡杀灭多种癌细胞，并能抑制癌细胞增殖，但对正常细胞和动物毒性较弱；同时还可抑制低氧诱导因子hifα转录活性，从而抑制肿瘤组织血管再生，有效的抑制实体瘤生长；其抗癌活性具有高效低毒的特点，对于开发治疗肺癌、肝癌、子宫颈癌等实体瘤的药物有着较好的应用前景。
现有技术中，为了提高多肽的活性，针对多肽序列进行特异性的改变，从而寻找活性更高的变体是常规的做法。为了进一步提高该多肽的生物活性，申请人通过大量的实验，针对该申请获得的多肽进行了氨基酸的改变，从而获得了比原始多肽本身具有更高抑制活性的变体。
发明详述
本发明涉及的多肽，序列如下:
nb：rkgwfkamksiakfiakeklkehl；
(nb1)：rkgwfkamkstakfiakeklkehl；
(nb2)：rkgwfkamkstakfiakeklkehls；
(nb3)：srkgwfkamkstakfiakeklkehlss；
(nb4)：srkgwfkamkstakfiakekekehls；
(nb5)：srkgwfkamkstakfiakekskehlss；
(nb6)：srkgsfkamkstakfiakekskehls；
(nb7)：srkgfkamkstakfiakekskehlss；
(nb8)：srkgfkamkstakfiakekskehls；
(nb9)：rkgwakamkstakfiakeklkehl；
(nb10)：rkgwakamksfakfiakeklkehl；
(nb11)：rkgwikamksfakfiakeklkehl；
(nb12)：rkgwikamksfakfiakeklkehls；
(nb13)：rkgwwkamkstakfiakeklkehls；
(nb14)：rkgwwkamkstakfiakeklkehl；
对照1：rkgwfkamkswakfiakeklkehl；
对照2：rkgwskamksiakfiakeklkehl。
本发明的多肽合成后，可以做成游离态形式，也可以做成阳离子盐，如：tfa盐(三氟乙酸盐)，hcl盐(盐酸盐)，醋酸盐形式。
本发明的多肽，可以选择和一种或多种药物载体组合，制成多种药物剂型，用于治疗。这些药物剂型涵盖：注射溶液、片剂、霜剂、胶囊、软膏、洗剂、舌含片等剂型局部或全身给药。剂量优选在10-5～10-2mg/kg体重的范围内，以0.1％-0.5％的较高浓度全身或局部给药。对于具体治疗的最佳剂量的确定是本领域技术人员熟知的。
具体实施方式
实施例1：本发明多肽的人工化学合成
通过常规的合成方法，合成了本发明多肽，经质谱鉴定显示纯度较高，与设定序列的多肽分子结构相同。
实施例2：多肽杀灭癌细胞实验
通过mtt分析法测定了本发明多肽对hela、cne1和jb63种细胞株的毒性。作用浓度为40微摩尔本发明多肽。为了进一步验证，采用溶血实验检测本发明多肽对于正常细胞的毒性，结果显示200微摩尔本发明多肽只能裂解约15％的红细胞，说明本发明多肽对于正常细胞毒性较弱。在整体动物水平，我们也检测了本发明多肽的毒性，以200毫克/kg体重皮下注射小鼠没有出现明显的毒性反应(48小时内)，表明本发明多肽毒性较低，对于癌细胞具有较强的选择性。
采用annexinv-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶双染法检测了本发明多肽杀灭癌细胞的机制，发现本发明多肽可诱导hela细胞凋亡，未经药物处理的hela细胞凋亡较少，说明本发明多肽通过诱导细胞凋亡杀灭癌细胞。
本发明多肽对3中细胞株的杀灭结果
实施例3本发明多肽抑制裸鼠荷瘤生长
上述实验表明本发明多肽具有较强的抑制癌细胞作用，但仍需要确定本发明多肽是否具有在体抗实体瘤的作用，采用裸鼠荷瘤模型开展研究。实验结果示本发明多肽可明显抑制实体瘤生长。在给药前(0天)，对照组(生理盐水)和给药组的实体瘤体积大小相似，而在药物干预的时间内，生理盐水对照组的肿瘤体积快速增大，表明其肿瘤持续生长，而给药组中nb和nb1-14的肿瘤体积没有明显变化，说明肿瘤生长被抑制。在第10天给药完成，对照组(生理盐水)的肿瘤体积是给药组的5倍，而给药为对照1和对照2的肽其肿瘤大小与给药为生理盐水的对照组结果相似，肿瘤大小相当。上述结果表明本发明多肽可有效的抑制肿瘤生长。
序列表
<110>李露青
<120>一种抗癌活性肽变体变体及其应用
<160>17
<210>1
<211>24
<212>prt
<213>人工序列
<400>1
rkgwfkamksiakfiakeklkehl；
<210>2
<211>24
<212>prt
<213>人工序列
<400>2
rkgwfkamkstakfiakeklkehl；
<210>3
<211>25
<212>prt
<213>人工序列
<400>3
rkgwfkamkstakfiakeklkehls
<210>4
<211>27
<212>prt
<213>人工序列
<400>4
srkgwfkamkstakfiakeklkehlss；
<210>5
<211>26
<212>prt
<213>人工序列
<400>5
srkgwfkamkstakfiakekekehls；
<210>6
<211>27
<212>prt
<213>人工序列
<400>6
srkgwfkamkstakfiakekskehlss；
<210>7
<211>26
<212>prt
<213>人工序列
<400>7
srkgsfkamkstakfiakekskehls；
<210>8
<211>27
<212>prt
<213>人工序列
<400>8
srkgfkamkstakfiakekskehlss；
<210>9
<211>26
<212>prt
<213>人工序列
<400>9
srkgfkamkstakfiakekskehls；
<210>10
<211>24
<212>prt
<213>人工序列
<400>10
rkgwakamkstakfiakeklkehl；
<210>11
<211>24
<212>prt
<213>人工序列
<400>11
rkgwakamksfakfiakeklkehl；
<210>12
<211>24
<212>prt
<213>人工序列
<400>12
rkgwikamksfakfiakeklkehl；
<210>13
<211>25
<212>prt
<213>人工序列
<400>13
rkgwikamksfakfiakeklkehls；
<210>14
<211>25
<212>prt
<213>人工序列
<400>14
rkgwwkamkstakfiakeklkehls；
<210>15
<211>24
<212>prt
<213>人工序列
<400>15
rkgwwkamkstakfiakeklkehl；
<210>16
<211>24
<212>prt
<213>人工序列
<400>16
rkgwfkamkswakfiakeklkehl；
<210>17
<211>24
<212>prt
<213>人工序列
<400>17
rkgwskamksiakfiakeklkehl