一种制备capsi‑amide的发酵方法与流程

本发明属于蔬菜加工领域，涉及一种制备capsi-amide的发酵方法。

背景技术：

capsi-amide是辣椒碱的类似物，化学名为n-甲基14碳乙酰胺，具有良好的镇痛效果。研究表明：capsi-amide腹腔注射表现出剂量依赖性的缓解辣椒碱引起的疼痛感，capsi-amide的镇痛效果优于非甾体抗炎药、“消炎痛”、“双氯芬酸钠”。现有的研究还表明，capsi-amide可在辣椒品种c.annuuml.var.fasciculatumirish、var.grossumsendt、var.longumsendt及var.minimumroxb中检测到。

虽capsi-amide具有良好的镇痛效果，但产量低限制了其应用，市场急需能提高提取产量的方法。经过检索，目前尚无生物发酵生产capsi-amide的报道。

技术实现要素：

鉴于现有技术的缺陷，本发明以市售二荆条干红辣椒为原料，研究微生物发酵辣椒生成capsi-amide的方法。结果表明，枯草芽孢杆菌发酵可有效生成capsi

-amide，发酵10天的辣椒中capsi-amide含量达5.2ug/ml。

发明人人经过不懈努力，获得了如下的技术方案：一种制备capsi-amide的发酵方法，包括如下步骤：

（1）辣椒切成直径2-3cm辣椒片，然后按照与辣椒的质量比20:36-40:3.2-

4:1-1.2加入水、食盐、蔗糖，充分混合，制备混合原料；

（2）加入过夜培养的枯草芽孢杆菌菌液，混合均匀，28-30℃密闭发酵9-10天；枯草芽孢杆菌的加入量为：每100g混合原料加入8-10ml。

（3）发酵结束的辣椒混合液中加入70%甲醇并混匀，使料液体积比为1:4.5-5.5，48-52℃水浴提取2-2.5h，8层纱布过滤，收集滤液；将滤渣收集用70%甲醇（滤渣与甲醇体积比1:1-1.5）提取1h，过滤且合并滤液，最后用旋转蒸发仪进行浓缩7-9倍。

（4）高效液相分离：柱温25℃，流速0.3ml/min，流动相依次为：70%超纯水、30%乙腈(含有0.1%甲酸)、30min；25%超纯水、75%乙腈(含有0.1%甲酸)、10min；70%超纯水、30%乙腈(含有0.1%甲酸)、5min；

（5）收集35.8min洗脱峰，即为capsi-amide。

优选地，如上所述的一种制备capsi-amide的发酵方法，其步骤（1）中所用辣椒为二荆条干红辣椒。

与现有技术相比，本发明的优点为：本发明以市售二荆条干红辣椒为原料，用枯草芽孢杆菌发酵辣椒生成了capsi-amide，结果表明：发酵10天的辣椒中capsi-amide含量达5.2ug/ml。

附图说明

图1为液相分离发酵辣椒中capsi-amide。

图2为capsi-amide二级质谱图。

具体实施方式

为能清楚说明本发明方案的技术特点，下面结合具体实施例，对本发明进行阐述。但是本发明的保护范围并不限于这些实施例。凡是不背离本发明构思的改变或等同替代均包括在本发明的保护范围之内。

实施例1

（1）100克辣椒（二荆条干红辣椒）切成直径约2厘米辣椒片，然后加入水200ml、20g盐、6g糖，充分混合。

（2）加入30ml过夜培养的枯草芽孢杆菌，混合均匀，28℃密闭发酵10天。枯草芽孢杆菌的加入量为

（3）称取100g步骤（2）的发酵辣椒，加入500ml的70%甲醇，混匀，50℃水浴提取2h；8层纱布过滤，收集滤液，将滤渣收集再用100ml70%甲醇提取1h，过滤合并滤液，再用旋转蒸发仪进行浓缩，浓缩至10ml。

（4）高效液相分离：柱温25℃，流速0.3ml/min，流动相依次为：70%超纯水、30%乙腈(含有0.1%甲酸)、30min；25%超纯水、75%乙腈(含有0.1%甲酸)、10min；70%超纯水、30%乙腈(含有0.1%甲酸)、5min。

（5）收集35.8min洗脱峰，即制得capsi-amide，具体结果见图1、图2。

由图1、2可知，枯草芽孢杆菌发酵可有效生成capsi-amide，发酵10天的辣椒中capsi-amide含量达5.2ug/ml。

对比实施例1

具体操作除步骤（2）中添加30ml乳酸菌培养液，其它与实施例1相同。

对比实施例2

具体操作除步骤（2）中30ml酿酒酵母菌培养液，其它与实施例1相同。

对比实施例3

具体操作除步骤（2）中30ml米曲霉培养液，其它与实施例1相同。

对比实施例4（不发酵）

去除实施例1中步骤（2），其它与实施例1相同。

我们对实施例1及对比实施例1-4所发酵制得的辣椒，进行了capsi-amide比较，具体结果见表1。

表1各实施例中capsi-amide比较(三次重复试验统计)

^a：液相法测定

^b：lc-ms/ms法测定

-：低于检测限。

技术特征：

技术总结
本发明公开了一种制备capsi‑amide的发酵方法，属于蔬菜加工领域。本发明以市售常见的干红辣椒为原料，使用枯草芽孢杆菌菌液进行发酵，结果表明，枯草芽孢杆菌发酵辣椒可有效生成Capsi‑amide，发酵10天的辣椒中Capsi‑amide含量达5.2ug/mL。本方法简单、易操作，可获取高含量的Capsi‑amide。

技术研发人员：胡勇;汪超;高冰;徐宁;李冬生;周梦舟;吴茜;柳志杰;祁勇刚;石勇;徐梅;龚元元
受保护的技术使用者：湖北工业大学
技术研发日：2017.08.08
技术公布日：2017.11.24