本发明涉及水蛭素的提取，具体涉及一种水蛭素的提取方法。
背景技术：
水蛭是一种具有多种要用功能的水生动物，水蛭素(hirudin)是水蛭（leech）及其唾液腺中已提取出多种活性成分中活性最显著并且研究得最多的一种成分，它是由65—66个氨基酸组成的小分子蛋白质（多肽）。水蛭素对凝血酶有极强的抑制作用，是迄今为止所发现最强的凝血酶天然特异抑制剂。中国对医蛭的利用更早，古籍上记载有把饥饿的蚂蟥装入竹筒，扣在洗净的皮肤上，令其吸血，治赤白丹肿。不过更重要的是把蚂蟥入药，水蛭首载于中国《神农本草经》，后在《本草纲目》和《中国动物药》等专著中均有收载，其中《本草纲目》对水蛭的药理疗效，使用方法，做了较全面记载。具明朝李时珍《本草纲目》的汇总，主要用来治疗跌打损伤，漏血不止以及产后血晕等症。现在药典上记载水蛭的功能是破血通经，消积散症，消肿解毒等。蚂蟥以干燥的全体入药，体内含有水蛭素和蛋白质，有抗凝固、破瘀血的功效，主治血痊病、血管病、瘀血不通、无名肿毒、淋巴结核等症。近年来，医务工作者试验用活水蛭与纯蜂蜜加工制成外用药水和注射液，治疗角膜斑翳，老年白内障的触发期和膨胀期，能使混浊体逐渐透明。蛭素还能缓解动脉的痉挛，降低血压的黏着力，所以能显著减轻高血压的症状，也有人以水蛭配其它活血、解毒药，用于治疗肿瘤。目前心脑血管疾病已成为国内外常见病、多发病，因此水蛭的需求量逐年增加。
技术实现要素：
本发明的目的是提供一种水蛭素的提取方法。
本发明的目的是通过下列的技术方案实现的：
一种水蛭素的提取方法，包括如下步骤：
a)取经过预处理的水蛭，加水匀浆，调节ph值，反复冻融；
b)经1-3次离心、过滤、调节ph值，得清液；
c)冷冻融化后再过滤，得水蛭素。
优选的，匀浆后调ph值至3.0～5.0，冻融次数为1～9次；离心条件为3000～4000转/分，离心时间为15～30分钟，离心过滤后，调ph值为6.0～7.5。
优选步骤为：
a)取新鲜水蛭，加0.5～2.5倍水蛭重量的注射用水，匀浆，调节ph值3.0～5.0，反复冻融1～9次；
b)最后一次融化后的匀浆液离心，离心条件为3000～4000转/分，离心时间为15～30分钟，过滤，上清液调节ph值6.0～7.5，加热冷却后离心，离心条件为3000～4000转/分，离心时间为15～30分钟，过滤，得清液；
c)冷冻后融化，过滤，清液用超滤膜超滤1～2次，超滤液为水蛭素。
更优步骤为：
a)取新鲜水蛭，加1～2倍水蛭重量注射用水，匀浆，调节ph值3.8～4.2，-15℃以下冷冻，在10～40℃下融化，重复冻融2～4次；
b)最后一次融化后的匀浆液离心，离心条件为3500～4000转/分，离心时间为15～20分钟，过滤，上清液调节ph值6.5～7.0，加热65℃～80℃，加热时间为15～20分钟，冷却后离心，离心条件为3500～4000转/分，离心时间为15～20分钟，过滤，得清液；
c)-15℃以下冷冻，冻实后在10～40℃下融化，过滤，清液用截留分子量10000以下的超滤膜超滤1～2次，得超滤液，即为水蛭素。
本发明申请人经过多次研究，找到了一种水蛭素提取方法，不采用任何有机溶剂，采用离心、超滤等方法纯化，得到纯度较高的水蛭素。
具体实施方式
下面通过实施例进一步说明本发明。应该理解的是，本发明的实施例是用于说明本发明而不是对本发明的限制。根据本发明的实质对本发明进行的简单改进都属于本发明要求保护的范围。
实施例1
一种水蛭素的提取方法，包括如下步骤：
a)取新鲜水蛭，加0.5倍水蛭重量注射用水，匀浆，调节ph值3.0，-15℃以下冷冻，在10～40℃下融化，重复冻融1次；
b)最后一次融化后的匀浆液离心，离心条件为3000转/分，离心时间为15分钟，过滤，上清液调节ph值6.0，加热65℃，加热时间为15分钟，冷却后离心，离心条件为3000转/分，离心时间为15分钟，过滤，得清液；
c)-15℃以下冷冻，在10～40℃下融化，过滤，清液用截留分子量10000以下的超滤膜超滤1次，得超滤液，即为水蛭素。
实施例2
一种水蛭素的提取方法，包括如下步骤：
a)取新鲜水蛭，加2.5倍水蛭重量注射用水，匀浆，调节ph值5.0，-15℃以下冷冻，在10～40℃下融化，重复冻融9次；
b)最后一次融化后的匀浆液离心，离心条件为4000转/分，离心时间为30分钟，过滤，上清液调节ph值7.5，加热80℃，加热时间为30分钟，冷却后离心，离心条件为4000转/分，离心时间为30分钟，过滤，得清液；
c)-15℃以下冷冻，在10～40℃下融化，过滤，清液用截留分子量10000以下的超滤膜超滤2次，得超滤液，即为水蛭素。
实施例3
一种水蛭素的提取方法，包括如下步骤：
a)取新鲜水蛭，加1倍水蛭重量注射用水，匀浆，调节ph值3.8，-15℃以下冷冻，在10～40℃下融化，重复冻融2次；
b)最后一次融化后的匀浆液离心，离心条件为3500转/分，离心时间为15分钟，过滤，上清液调节ph值6.5，加热65℃，加热时间为15分钟，冷却后离心，离心条件为3500转/分，离心时间为15分钟，过滤，得清液；
c)-15℃以下冷冻，在10～40℃下融化，过滤，清液用截留分子量10000以下的超滤膜超滤1次，得超滤液，即为水蛭素。
实施例4
一种水蛭素的提取方法，包括如下步骤：
a)取新鲜水蛭，加2倍水蛭重量注射用水，匀浆，调节ph值4.2，-15℃以下冷冻，在10～40℃下融化，重复冻融4次；
b)最后一次融化后的匀浆液离心，离心条件为4000转/分，离心时间为20分钟，过滤，上清液调节ph值7.0，加热80℃，加热时间为20分钟，冷却后离心，离心条件为4000转/分，离心时间为20分钟，过滤，得清液；
c)-15℃以下冷冻，在10～40℃下融化，过滤，清液用截留分子量10000以下的超滤膜超滤2次，得超滤液，即为水蛭素。
虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。