本发明涉及一种生物碱的衍生物其制备方法及用途，确切讲本发明涉及一种7-乙基-10-氟-喜树碱-20-肉桂酯衍生物，以及这类化合物的制备方法和其在制备抗肿瘤药物中的用途。
背景技术：
喜树碱是从中国特有的珙桐科植物喜树中分离得到的一种具有显著细胞毒活性的喹啉类生物碱(J.Nat.Prod.2004,67,129-135)，以其为先导分子经结构优化获得了如伊立替康、拓扑替康、9-氨基喜树碱、9-硝基喜树碱、DX-8951f、GG211、BNP-1350、ST-1481和CKD-602等已被FDA批准上市或处于临床研究阶段(①Bioorg.Med.Chem.2004,12,1585-1604；② Phytochem.2004,65,2735-2749)。鉴于在药物中引入含氟或者含氟基团有利于提高或改善药物的生物利用度和生物活性，项目组前期在在喜树碱10位引入氟原子，合成了一类新的10-氟喜树碱衍生物(Bioorg.Med.Chem.Lett.2017,27,4694–4697)，获得活性较好的7-乙基-10-氟-喜树碱先导结构。但由于喜树碱类衍生物结构中具有抗肿瘤活性的内酯环(E环)在人体内生理条件下容易水解开环，造成抗肿瘤活性降低。且实验证明，在血浆中内酯环形式与开环形式存在平衡，内酯环形式的浓度和药物疗效存在正比关系。而开环形式是导致不良反应的原因所在，如引起骨髓抑制、呕吐、腹泻和血尿等(①药学学报.2003,38,715–720；②J.Org.Chem., 2000,65,4601-4606)。因此对E环-20位的结构修饰和改造，提高内酯环形式在人血浆中的比例以期提高该类化合物的活性并减小毒性，成为目前研发喜树碱类药物的主要研究课题之一。文献报道表明，肉桂酸结构可以通过细胞毒作用、抑制细胞生长、抗增殖、抗白血病、抗实体瘤和抑制多种酶(转谷氨酰胺酶，氨肽酶N，组蛋白去乙酰基酶等)活性等作用方式 (Current Medicinal Chemistry,2011,18,1672-1703)，达到抗肿瘤的效果，因而肉桂酸结构被广泛应用于抗肿瘤药物的设计中。
鉴于7-乙基-10-氟-喜树碱表现出的良好的抗肿瘤活性，是一类极具开发价值的抗肿瘤药物先导分子，因此，本发明在掌握了喜树碱结构与抗肿瘤活性关系的基础上，考虑将喜树碱 20位羟基与肉桂酸衍生物缩合形成酯类化合物，进一步阻止羟基和邻位酯羰基形成分子内氢键，提高内酯环的稳定性，可望通过这种结构优化方式提高药物抗肿瘤活性。
技术实现要素：
本发明提供一种喜树碱类化合物，同时提供这类化合物的制备方法及用途。
本发明所述的喜树碱类化合物是指具有如下通式(I)所示的化合物：
其中(I)式中R是苯基、3-甲氧苯基、4-甲氧苯基、2,5-二甲氧苯基、3,4-二甲氧苯基、3,4,5- 三甲氧苯基、3,4-二甲基苯基、胡椒基、3，4-乙二氧基苯基、5-(2,3-二氢苯并[B]呋喃)基、 4-乙基苯基、4-氯苯基、2,4-二氯苯基、3，5-二氯苯基、4-氰基苯基、3-三氟甲基苯基、3-三氟甲基苯基、4-三氟甲氧基苯基、3，4-,二氟苯基、3,5-二氟苯基、3,4，5-,三氟苯基、3-氟-4- 甲氧基苯基。
本发明所述的喜树碱类化合物制备方法按如下化学反应式1进行：
以多种取代的苯甲醛为原料，与丙二酸反应，获得多种取代的肉桂酸中间体，再与7-乙基-10- 氟-喜树碱发生酯化反应，最终得到7-乙基-10-氟-20-肉桂酯喜树碱。
本发明的7-乙基-10-氟-喜树碱类衍生物的制备方法是：将10-氟-7-乙基喜树碱(1eq)置于圆底烧瓶中，加入适量的干燥二氯甲烷，将其置于冰浴中，待其冷却至零摄氏度，依次加入肉桂酸(3eq)和DMAP(3eq)，搅拌均匀后，将DIPC(4.5eq)逐滴加入到反应液中，冰浴条件下反应半小时后撤去冰浴，在常温条件下反应12小时，TLC监测反应进程。反应完毕后，加入二氯甲烷淬灭反应，然后减压浓缩得油状固体，以氯仿/甲醇为洗脱剂将其进行柱层析纯化得到纯品。
在前述的制备方法中，其层析用硅胶柱采用200～300目的柱层析用硅胶。
本发明的7-乙基-10-氟-喜树碱类衍生物可以在制备抗肿瘤药物中应用，更为具体的是：可以在制备治疗人结肠癌的药物中应用，或者在制备治疗人前列腺癌的药物中应用；或者在制备治疗人非小细胞肺癌的药物中应用。
本发明以现有喜树碱的构效关系研究为指导，在喜树碱10位引入氟原子，这将有可能通过改变其生物性质方面的参数，从而得到活性更高、毒性更低的喜树碱衍生物。
经体外抗肿瘤活性筛选结果表明，式I的化合物对人结肠癌(HCT116)、人前列腺癌(PC3) 和人非小细胞肺癌(A549)表现出较强的抑制活性，其中化合物2t的活性与目前临床药物拓扑替康相当。因此，本发明制备的喜树碱类化合物可用于制备抗肿瘤的药物，且结构新颖、合成工艺简单、产品纯度高，对肿瘤细胞表现出较强的抑制作用，具有优良的应用前景。
以下通过具体实施方式，对本发明的上述内容做进一步的详细说明。但不应将此理解为对本发明的限制。
具体实施方式
实施例1：目标化合物2a的合成
将10-氟-7-乙基喜树碱(按照文献Bioorg.Med.Chem.Lett.2017,27,4694–4697的方法制备) (1eq)置于圆底烧瓶中，加入适量的干燥二氯甲烷，将其置于冰浴中，待其冷却至零摄氏度，依次加入肉桂酸(3eq)和DMAP(3eq)，搅拌均匀后，将DIPC(4.5eq)逐滴加入到反应液中，冰浴条件下反应半小时后撤去冰浴，在常温条件下反应12小时，TLC监测反应进程。反应完毕后，加入二氯甲烷淬灭反应，然后减压浓缩得油状固体，以氯仿/甲醇为洗脱剂将其进行柱层析纯化得到纯品2a。其反应参见反应式3
反应所得产物检测数据如下：产率:87％；白色固体。1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ:8.20(dd, 1H,J＝9.3，5.6Hz,C9-H),8.05(d,1H,J＝10.4Hz,C12-H),7.85-7.68(m,4H,C11-H,-COCH＝CH-, Ar-H),7.51-7.43(m,3H,Ar-H)，7.01(s,1H,C14-H),6.88(d,1H,J＝16.1Hz,-COCH＝CH-),5.55(s, 2H,C17-H),5.33(s,2H,C5-H),3.19(d,2H,J＝7.7Hz,C7-CH2-CH3),2.24(d,2H,J＝7.6Hz,C19-H), 1.27(t,3H,J＝7.5Hz,C7-CH2-CH3),0.99(t,3H,J＝7.3Hz,C18-H)；MS-ESI m/z:547.2[M+Na]+.
实施例2：目标化合物2b的合成
与实施例1同，仅以3-甲氧基苯甲醛代替苯甲醛。反应所得产物检测数据如下：产率:88％；淡黄色固体。1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ:8.21(dd,1H,J＝9.3，5.6Hz,C9-H),8.05(d,1H, J＝10.5Hz,C12-H),7.82-7.65(m,2H,C11-H,-COCH＝CH-),7.41(s,1H,Ar-H),7.36(d,2H, J＝6.7Hz,Ar-H),7.07-6.96(m,2H,C14-H,Ar-H),6.91(d,1H,J＝16.1Hz,-COCH＝CH-),5.54(s, 2H,C17-H),5.34(s,2H,C5-H),3.82(s,3H,Ar-OCH3),3.19(d,2H,J＝7.7Hz,C7-CH2-CH3),2.24 (d,2H,J＝7.6Hz,C19-H),1.27(t,3H,J＝7.5Hz,C7-CH2-CH3),1.00(t,3H,J＝7.3Hz,C18-H)； MS-ESI m/z:577.2[M+Na]+..
实施例3：目标化合物2c的合成
与实施例1同，仅以4-甲氧基苯甲醛代替苯甲醛。反应所得产物检测数据如下：产率:89％；白色固体。1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ:8.21(dd,1H,J＝9.3，5.6Hz,C9-H),8.05(d,1H, J＝10.4Hz,C12-H),7.83-7.69(m,4H,C11-H,-COCH＝CH-,Ar-H),7.01(d,3H,J＝8.9Hz,C14-H, Ar-H),6.71(d,1H,J＝16.0Hz,-COCH＝CH-),5.54(s,2H,C17-H),5.33(s,2H,C5-H),3.81(s,3H, Ar-OCH3),3.19(d,2H,J＝7.7Hz,C7-CH2-CH3),2.22(d,2H,J＝7.7Hz,C19-H),1.27(t,3H, J＝7.5Hz,C7-CH2-CH3),0.99(t,3H,J＝7.4Hz,C18-H)；MS-ESI m/z:577.2[M+Na]+.
实施例4：目标化合物2d的合成
与实施例1同，仅以2，5-二甲氧基苯甲醛代替苯甲醛。反应所得产物检测数据如下：产率:86％；淡黄色固体。1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ:8.21(dd,1H,J＝9.4，5.8Hz,C9-H),8.05(d,1H, J＝10.2Hz,C12-H),7.94(d,1H,J＝16.1Hz,-COCH＝CH-),7.74(m,1H,C11-H),7.40(s,1H,Ar-H), 7.05-6.89(m,4H,C14-H,-COCH＝CH-,Ar-H),5.52(s,2H,C17-H),5.33(s,2H,C5-H),3.81(s, 3H,-ArOCH3),3.78(s,3H,-ArOCH3),3.19(d,2H,J＝7.6Hz,C7-CH2-CH3),2.24(d,2H,J＝7.8Hz, C19-H),1.28(t,3H,J＝7.5Hz,C7-CH2-CH3),0.99(t,3H,J＝7.9Hz,C18-H)；MS-ESI m/z:607.2 [M+Na]+.
实施例5：目标化合物2e的合成
与实施例1同，仅以3，4-二甲氧基苯甲醛代替苯甲醛。反应所得产物检测数据如下：产率:84％；淡黄色固体。1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ:8.22(dd,1H,J＝9.3，5.6Hz,C9-H),8.08(d,1H, J＝10.2Hz,C12-H),7.77-7.64(m,2H,-COCH＝CH-,C11-H),7.46(s,1H,Ar-H),7.30(d,1H, J＝8.8Hz,Ar-H),7.01(m,2H,C14-H,Ar-H),6.78(d,1H,J＝15.9Hz,-COCH＝CH-),5.54(s,2H, C17-H),5.33(s,2H,C5-H),3.83(d,6H,J＝11.4Hz-ArOCH3),3.19(d,2H,J＝7.6Hz,C7-CH2-CH3), 2.23(d,2H,J＝7.8Hz,C19-H),1.28(t,3H,J＝7.5Hz,C7-CH2-CH3),0.99(t,3H,J＝7.4Hz,C18-H)； MS-ESI m/z:607.2[M+Na]+.
实施例6：目标化合物2f的合成
与实施例1同，仅以3，4，5-三甲氧基苯甲醛代替苯甲醛。反应所得产物检测数据如下：产率:86％；白色固体。1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ:8.21(dd,1H,J＝9.3,5.7Hz,C9-H),8.06(d, 1H,J＝10.5Hz,C12-H),7.73(m,2H,-COCH＝CH-,C11-H),7.16(s,1H,Ar-H),6.99(s,1H,Ar-H), 6.91-6.87(m,2H,C14-H,-COCH＝CH-),5.55(s,2H,C17-H),5.35(s,2H,C5-H),3.84(s,6H, -ArOCH3),3.71(s,3H,-ArOCH3),3.20(d,2H,J＝7.7Hz,C7-CH2-CH3),2.24(d,2H,J＝8.1Hz, C19-H),1.28(t,3H,J＝7.5Hz,C7-CH2-CH3),0.99(t,3H,J＝7.4Hz,C18-H)；MS-ESI m/z:637.2 [M+Na]+.
实施例7：目标化合物2g的合成
与实施例1同，仅以3，4-二甲基苯甲醛代替苯甲醛。反应所得产物检测数据如下：产率:82％；白色固体。1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ:8.21(dd,1H,J＝9.3,5.7Hz,C9-H),8.05(d,1H, J＝10.6Hz,C12-H),7.70(m,2H,-COCH＝CH-,C11-H),7.60(s,1H,Ar-H),7.51(d,1H,J＝7.8Hz, Ar-H),7.22(d,1H,J＝7.8Hz,Ar-H),7.01(s,1H,C14-H),6.79(d,1H,J＝16.0Hz,-COCH＝CH-), 5.54(s,2H,C17-H),5.34(s,2H,C5-H),4.61(t,3H,J＝8.7Hz,Ar-CH3),3.20(m,5H,C7-CH2-CH3, Ar-CH3),2.23(d,2H,J＝6.5Hz,C19-H),1.27(t,3H,J＝7.5Hz,C7-CH2-CH3),0.99(t,3H,J＝7.4Hz, C18-H)；MS-ESI m/z:575.2[M+Na]+.
实施例8：目标化合物2h的合成
与实施例2同，仅以胡椒醛代替苯甲醛。反应所得产物检测数据如下：产率:85％；白色固体。1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ:8.22(dd,1H,J＝9.3,5.7Hz,C9-H),8.05(d,1H,J＝10.5Hz, C12-H),7.84-7.64(m,2H,C11-H，-COCH＝CH-),7.52(s,1H,Ar-H),7.27(d,1H,J＝7.8Hz,Ar-H), 6.99(m,2H,C14-H,Ar-H),6.73(d,1H,J＝15.9Hz,-COCH＝CH-),6.11(s,2H,Ar-O-CH2-O-), 5.54(s,2H,C17-H),5.33(s,2H,C5-H),3.19(d,2H,J＝7.8Hz,C7-CH2-CH3),2.22(d,2H,J＝7.6Hz, C19-H),1.27(t,3H,J＝7.5Hz,C7-CH2-CH3),0.98(t,3H,J＝7.3Hz,C18-H)；MS-ESI m/z:591.2 [M+Na]+.
实施例9：目标化合物2i的合成
与实施例1同，仅以1,4-苯并二恶烷-6-甲醛代替苯甲醛。反应所得产物检测数据如下：产率: 83％；白色固体。1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ:8.22(dd,1H,J＝9.4,5.7Hz,C9-H),8.06(d,1H, J＝10.4Hz,C12-H),7.73(m,1H,C11-H),7.66(d,1H,J＝16.0Hz,-COCH＝CH-),7.38(d,1H, J＝2.0Hz,Ar-H),7.29(d,1H,J＝8.4Hz,Ar-H),6.99(s,1H,C14-H),6.92(d,1H,J＝8.4Hz,Ar-H), 6.71(d,1H,J＝16.0Hz,-COCH＝CH-),5.54(s,2H,C17-H),5.34(s,2H,C5-H),6.11(d,4H, J＝5.0Hz,Ar-O-CH2-CH2-O-),3.19(d,2H,J＝7.9Hz,C7-CH2-CH3),2.23(d,2H,J＝8.0Hz,C19-H), 1.26(t,3H,J＝7.9Hz,C7-CH2-CH3),0.93(t,3H,J＝8.4Hz,C18-H)；MS-ESI m/z:605.2[M+Na]+.
实施例10：目标化合物2j的合成
与实施例2同，仅以2，3-二氢苯并呋喃-5-甲醛代替苯甲醛。反应所得产物检测数据如下：产率:82％；白色固体。1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ:8.21(dd,1H,J＝9.3,5.6Hz,C9-H),8.05 (d,1H,J＝10.4Hz,C12-H),7.78-7.65(m,3H,-COCH＝CH-,C11-H,Ar-H),7.55(d,1H,J＝8.5Hz, Ar-H),7.00(s,1H,C14-H),6.83(d,1H,J＝8.3Hz,Ar-H),6.66(d,1H,J＝16.0Hz,-COCH＝CH-), 5.54(s,2H,C17-H),5.34(s,2H,C5-H),4.61(d,2H,J＝8.7Hz,Ar-O-CH2-CH2-),3.25-3.14(m,4H, C7-CH2-CH3,Ar-O-CH2-CH2-),2.23(d,2H,J＝6.5Hz,C19-H),1.27(t,3H,J＝7.5Hz,C7-CH2-CH3), 0.99(t,3H,J＝7.4Hz,C18-H)；MS-ESI m/z:589.2[M+Na]+.
实施例11：目标化合物2k的合成
与实施例1同，仅以4-乙基苯甲醛代替苯甲醛。反应所得产物检测数据如下：产率:产率:80％；白色固体。1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ:8.20(dd,1H,J＝9.2，5.6Hz,C9-H),8.04(d,1H, J＝10.4Hz,C12-H),7.80-7.66(m,4H,C11-H,Ar-H，-COCH＝CH-),7.30(d,2H,J＝7.9Hz,Ar-H), 7.00(s,1H,C14-H),6.82(d,1H,J＝16.0Hz,-COCH＝CH-),5.55(s,2H,C17-H),5.32(s,2H, C5-H),3.18(d,2H,J＝7.7Hz,C7-CH2-CH3),2.65(d,2H,J＝7.4Hz,ArCH2CH3),2.24(d,2H, J＝7.6Hz,C19-H),1.27(t,3H,J＝7.5Hz,C7-CH2-CH3),1.19(t,3H,J＝7.5Hz,ArCH2CH3),1.00(t, 3H,J＝7.4Hz,C18-H)；MS-ESI m/z:575.2[M+Na]+.
实施例12：目标化合物2l的合成
与实施例1同，仅以4-氯苯甲醛代替苯甲醛。反应所得产物检测数据如下：产率:91％；白色固体。1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ:8.19(dd,1H,J＝9.4，5.6Hz,C9-H),8.04(d,1H,J＝10.2Hz, C12-H),7.90-7.78(m,3H,-COCH＝CH-,Ar-H),7.75(m,1H,C11-H),7.53(d,2H,J＝8.1Hz,Ar-H), 7.02(s,1H,C14-H),6.91(d,1H,J＝16.0Hz,-COCH＝CH-),5.55(s,2H,C17-H),5.32(s,2H, C5-H),3.18(d,2H,J＝7.5Hz,C7-CH2-CH3),2.23(d,2H,J＝9.9Hz,C19-H),1.27(t,3H,J＝7.7Hz, C7-CH2-CH3),1.00(t,3H,J＝7.3Hz,C18-H)；MS-ESI m/z:581.1[M+Na]+.
实施例13：目标化合物2m的合成
与实施例1同，仅以2，4-二氯苯甲醛代替苯甲醛。反应所得产物检测数据如下：产率:86％；淡黄色固体。1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ:8.20(dd,1H,J＝9.3，5.7Hz,C9-H),8.13(d,1H, J＝10.3Hz,C12-H),8.06(m,1H,C11-H),7.96(d,1H,J＝16.0Hz,-COCH＝CH-),7.78(s,1H, Ar-H),7.55(d,1H,J＝8.0Hz,Ar-H),7.36(m,1H,Ar-H),7.06-7.00(m,2H,C14-H,-COCH＝CH-), 5.52(s,2H,C17-H),5.34(s,2H,C5-H),3.19(d,2H,J＝7.8Hz,C7-CH2-CH3),2.25(d,2H,J＝7.9Hz, C19-H),1.27(t,3H,J＝7.5Hz,C7-CH2-CH3),0.99(t,3H,J＝7.0Hz,C18-H)；MS-ESI m/z:615.1 [M+Na]+.
实施例14：目标化合物2n的合成
与实施例1同，仅以3,5-二氯苯甲醛代替苯甲醛。反应所得产物检测数据如下：产率:86％；白色固体。1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ:8.21(dd,1H,J＝9.3,2.9Hz,C9-H),8.05(d,1H, J＝10.0Hz,C12-H),7.96(s,2H,Ar-H),7.79-7.67(m,3H,-COCH＝CH-,Ar-H,C11-H),7.08(d,1H, J＝16.1Hz,-COCH＝CH-),6.99(s,1H,C14-H),5.55(s,2H,C17-H),5.33(s,2H,C5-H),3.19(d, 2H,J＝7.7Hz,C7-CH2-CH3),2.23(d,2H,J＝7.6Hz,C19-H),1.27(t,3H,J＝7.5Hz,C7-CH2-CH3), 1.02(t,3H,J＝7.3Hz,C18-H)；MS-ESI m/z:615.1[M+Na]+.
实施例15：目标化合物2o的合成
与实施例1同，仅以4-氰基苯甲醛代替苯甲醛。反应所得产物检测数据如下：产率:88％；白色固体。1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ:8.19(dd,1H,J＝9.3,5.7Hz,C9-H),8.04(d,3H, J＝10.5Hz,C12-H,Ar-H),7.94-7.76(m,3H,-COCH＝CH-,Ar-H),7.72(d,1H,J＝7.7Hz,C11-H), 7.05(d,2H,J＝17.7Hz,C14-H,-COCH＝CH-),5.56(s,2H,C17-H),5.33(s,2H,C5-H),3.19(d,2H, J＝7.6Hz,C7-CH2-CH3),2.25(d,2H,J＝8.5Hz,C19-H),1.26(t,3H,J＝7.6Hz,C7-CH2-CH3),1.01(t, 3H,J＝7.4Hz,C18-H)；MS-ESI m/z:572.2[M+Na]+.
实施例16：目标化合物2p的合成
与实施例1同，仅以4-三氟甲基苯甲醛代替苯甲醛。反应所得产物检测数据如下：产率:93％；白色固体。1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ:8.18(dd,1H,J＝9.3,5.7Hz,C9-H),8.07-7.98(m,3H, C12-H,Ar-H),7.93(d,2H,J＝8.1Hz,Ar-H),7.85(d,1H,J＝16.1Hz,-COCH＝CH-),7.72(m,1H, C11-H),7.07(d,1H,J＝16.2Hz,-COCH＝CH-),7.02(s,1H,C14-H),5.56(s,2H,C17-H),5.32(s, 2H,C5-H),3.18(d,2H,J＝8.2Hz,C7-CH2-CH3),2.24(d,2H,J＝7.4Hz,C19-H),1.27(t,3H, J＝7.5Hz,C7-CH2-CH3),1.01(t,3H,J＝7.4Hz,C18-H)；MS-ESI m/z:615.2[M+Na]+.
实施例17：目标化合物2q的合成
与实施例1同，仅以3-三氟甲基苯甲醛代替苯甲醛。反应所得产物检测数据如下：产率:88％；白色固体。1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ:8.30-8.16(m,2H,C9-H,C12-H),8.14(d,1H, J＝7.9Hz,-COCH＝CH-),8.06(d,1H,J＝7.8Hz,C11-H),7.96-7.79(m,2H,Ar-H),7.77-7.60(m,2H, Ar-H),7.10(d,1H,J＝16.2Hz,-COCH＝CH-),6.99(d,1H,J＝9.4Hz,C14-H),5.54(d,2H,J＝15.6Hz, C17-H),5.33(d,2H,J＝9.4Hz,C5-H),3.19(d,2H,J＝7.7Hz,C7-CH2-CH3),2.24(d,2H,J＝7.6Hz, C19-H),1.27(t,3H,J＝7.5Hz,C7-CH2-CH3),1.01(t,3H,J＝7.4Hz,C18-H)；MS-ESI m/z:615.2 [M+Na]+.
实施例18：目标化合物2r的合成
与实施例1同，仅以4-三氟甲氧基苯甲醛代替苯甲醛。反应所得产物检测数据如下：产率:90％；白色固体。1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ:8.20(dd,1H,J＝9.3，5.7Hz,C9-H),8.06(d,1H, J＝10.4Hz,C12-H),7.97(d,2H,J＝8.7Hz,Ar-H),7.82(d,1H,J＝16.1Hz,-COCH＝CH-),7.73(m, 1H,C11-H),7.46(d,2H,J＝8.3Hz,Ar-H),7.02(s,1H,C14-H),6.93(d,1H,J＝16.1Hz, -COCH＝CH-),5.55(s,2H,C17-H),5.34(s,2H,C5-H),3.19(d,2H,J＝8.3Hz,C7-CH2-CH3),2.25 (d,2H,J＝7.7Hz,C19-H),1.27(t,3H,J＝7.3Hz,C7-CH2-CH3),1.00(t,3H,J＝7.7Hz,C18-H)； MS-ESI m/z:631.2[M+Na]+.
实施例19：目标化合物2s的合成
与实施例1同，仅以3，4-二氟苯甲醛代替苯甲醛。反应所得产物检测数据如下：产率:90％；白色固体。1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ:8.25(dd,1H,J＝9.3,5.7Hz,C9-H),8.12-8.08(m,2H, -COCH＝CH-,C12-H),7.87-7.68(m,3H,Ar-H,C11-H),7.60(m,1H,Ar-H),7.08-6.92(m,2H, C14-H,-COCH＝CH-),5.55(s,2H,C17-H),5.33(s,2H,C5-H),3.19(d,2H,J＝8.0Hz, C7-CH2-CH3),2.24(d,2H,J＝7.5Hz,C19-H),1.27(t,3H,J＝7.5Hz,C7-CH2-CH3),0.99(t,3H, J＝7.4Hz,C18-H)；MS-ESI m/z:583.2[M+Na]+.
实施例20：目标化合物2t的合成
与实施例1同，仅以3,5-二氟苯甲醛代替苯甲醛。反应所得产物检测数据如下：产率:88％；白色固体。1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ:8.60(s,2H,Ar-H),8.23-8.17(m,2H,C9-H,C12-H), 8.06(d,1H,J＝10.5Hz,C11-H),7.99(d,1H,J＝16.3Hz,-COCH＝CH-),7.73(m,1H,Ar-H),7.32 (d,1H,J＝16.2Hz,-COCH＝CH-),7.00(s,1H,C14-H),5.52(s,2H,C17-H),5.33(s,2H,C5-H), 3.19(d,2H,J＝7.9Hz,C7-CH2-CH3),2.24(d,2H,J＝7.5Hz,C19-H),1.28(t,3H,J＝7.6Hz, C7-CH2-CH3),0.99(t,3H,J＝7.4Hz,C18-H)；MS-ESI m/z:583.2[M+Na]+.
实施例21：目标化合物2u的合成
与实施例1同，仅以3，4，5-三氟苯甲醛代替苯甲醛。反应所得产物检测数据如下：产率:89％；白色固体。1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ:8.21(dd,1H,J＝9.3,5.7Hz,C9-H),8.06(d,1H, J＝10.4Hz,C12-H),7.91(m,2H,Ar-H),7.81-7.68(m,2H,-COCH＝CH-,C11-H),7.06-6.92(m,2H, C14-H,-COCH＝CH-),5.55(s,2H,C17-H),5.33(s,2H,C5-H),3.18(d,2H,J＝7.8Hz, C7-CH2-CH3),2.24(d,2H,J＝8.1Hz,C19-H),1.27(t,3H,J＝7.5Hz,C7-CH2-CH3),1.00(t,3H, J＝7.3Hz,C18-H)；MS-ESI m/z:601.1[M+Na]+.
实施例22：目标化合物2v的合成
与实施例1同，仅以3-氟-4-甲氧基苯甲醛代替苯甲醛。反应所得产物检测数据如下：产率:86％；淡黄色固体。1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ:8.21(dd,1H,J＝9.3,5.7Hz,C9-H),8.05(d,1H, J＝10.6Hz,C12-H),7.81(d,1H,J＝14.9Hz,-COCH＝CH-),7.63-7.54(m,2H,C11-H,Ar-H),7.58 (m,1H,Ar-H),7.22(m,1H,Ar-H),6.99(s,1H,C14-H),6.79(d,1H,J＝16.0Hz,-COCH＝CH-), 5.54(s,2H,C17-H),5.34(s,2H,C5-H),3.90(s,3H,-ArOCH3),3.19(d,2H,J＝7.6Hz, C7-CH2-CH3),2.23(d,2H,J＝7.6Hz,C19-H),1.26(t,3H,J＝7.3Hz,C7-CH2-CH3),0.99(t,3H, J＝7.3Hz,C18-H)；MS-ESI m/z:595.2[M+Na]+.
实施例23:化合物2a-v的抗肿瘤活性的试验方法及结果
本发明的药理实验采用MTT比色法测定细胞活力。肿瘤细胞培养选用10％胎牛血清(FBS) 的RPMI-1640培养基，取对数生长期细胞用胰酶/EDTA消化液消化，离心，用完全培养液吹打成单细胞悬液，调整浓度为3×104个/mL，96孔板每孔准确接种细胞悬液100ul，置于37℃含5％CO2培养箱培养24小时。加入不同浓度的待测试目标化合物溶液，每孔加入150ul溶液，最高浓度组DMSO终浓度不高于千分之二。溶媒对照组加150ul含千分之二DMSO的完全培养液。培养72小时后，弃去旧液，每孔用150ul PBS清洗后弃去，MTT储备液用完全培养液10倍稀释后，各孔加入终浓度为0.5mg/ml的MTT 100ul，继续培养3小时。弃去旧液，每孔加入150ul DMSO，培养板振荡器震荡3分钟。采用Synergy HT型多功能酶标仪(美国Bio-Tek公司生产)测定492nm、630nm处测定每孔的吸光度值。所有试验设三个平行组或重复三次。化合物2a-v的细胞毒活性测试结果见表1。
表1化合物2a-v对3种细胞株的细胞毒活性(μM)
注：(1)筛选方法：MTT比色法；(2)作用时间：72小时；(3)化合物编号2a-v分别为前述实施例1至实施例22所得产物。
体外实验表明，本发明所述的化合物2a-v对对人结肠癌(HCT116)、人前列腺癌(PC3)和人非小细胞肺癌(A549)表现出较强的抑制活性，其中化合物2t的活性与目前临床药物拓扑替康相当。表现出较好的应用前景，因此本发明所制得化合物可用于制备抗肿瘤药物，且该类化合物合成方法简单、原料廉价易得，产品纯度高。