本发明涉及医美级胎盘基蜕膜干细胞内液的制备方法，具体为细胞应用技术领域。
背景技术：
胎盘基蜕膜干细胞是一种具有自我复制和多向分化能力的细胞，它们可以不断地自我更新，并在特定条件下转变成为一种或多种构成人体组织或器官的细胞，被医学界称为万用细胞。胎盘基蜕膜干细胞是多能干细胞，是干细胞的一个研究分支，属于非造血成体干细胞，是生物医学研究和组织工程中最常用的种子细胞。此外，胎盘基蜕膜干细胞还具有独特的细胞因子分泌功能，它们分泌的蛋白在组织愈合中发挥重要的作用。胎盘基蜕膜干细胞分泌的蛋白更倾向于在血管生成、细胞的增殖分化、细胞存活率、免疫调节以及胶原的降解方面发挥作用。在胎盘干细胞的条件培养基中，特有的活性蛋白包括成纤维细胞生长因子2(fgf2)、成纤维细胞生长因子7(fgf7)、趋化因子(ccl2)、基质金属蛋白酶1(mmp1)和基质金属蛋白酶19(mmp9)。其中，fgf2和fgf7在胚胎发育、细胞存活、细胞分裂、血管生成、细胞分化和细胞迁移的调节中起到重要作用；ccl2是趋化因子，可以吸引单核细胞和嗜碱性粒细胞，并可以增强单核细胞的抗肿瘤活性；mmp1和mmp9分为i，ii，iii，iv，v，vii和x型胶原酶。
因此,开发胎盘基蜕膜干细胞内液应用于组织再生和修复治疗,可作为一种安全和有效的高科技医美技术和方案。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种操作过程较为简单，操作容易，适合在医疗医美业和生活医美业中大范围推广的医美方法。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：医美级胎盘基蜕膜干细胞内液的制备方法具体步骤为：步骤一、胎盘的选择：选择35-40周新生儿盘状胎盘、一级胎盘，采集产妇的外周血，采用elasa方法检测乙肝、丙肝、梅毒、艾滋、eb病毒、嗜热t细胞病毒为阴性；
步骤二、胎盘基蜕膜的分离，将含有庆大霉素的pbs缓冲液反复冲洗胎盘，用眼科剪取胎盘基蜕膜部分到培养皿中；
步骤三、胎盘基蜕膜干细胞内液的制备，在gmp制备车间中将剪碎的胎盘基蜕膜放到50毫升离心管中，加入3毫升的3mg/ml的胶原蛋白酶i消化60分钟，加入dmem/f12培养基终止消化，在2200rpm/min下离心5分钟，弃掉上清，在细胞沉淀中加入20毫升无血清细胞培养基中培养，每3天换液，第7-15天，可观察到梭形细胞长出，7-8个克隆的时候可以传代、冻存；
步骤四、医美级胎盘基蜕膜干细胞内液的制备方法：选择超滤膜，将胎盘基蜕膜干细胞裂解液进行膜分离，在-20℃冷冻储存，医美使用时室温融化。
作为优选，所述的步骤一中的胎盘在无菌状态下取得，并在运输的过程中需要冷链运输，冷冻储存。
作为优选，所述的步骤四中使用的超滤膜选择截留分子量范围在1000～300000的超滤膜。
与现有技术相比，本发明的有益效果如下：本医美级胎盘基蜕膜干细胞内液制备方法具有易于操作，低免疫反应风险，活性高、效果明显等优点，并且能有效利用医院医疗废物，且制备成本低廉、可操作性强。突破皮肤吸收屏障，所述的医美级胎盘基蜕膜干细胞内液深度导入到皮下组织部位，迅速被肌肤组织吸收，发挥作用，从而产生疗效。还能够准确地直接到达真皮层，同时又没有创伤，因此具有准确、安全、高效、适应证广、并发症无等优点，现已成为美容行业的首选产品。
具体实施方式
下面将结合本发明具体实施方式对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例：
医美级胎盘基蜕膜干细胞内液的制备方法，它包含以下步骤：步骤一：胎盘的选择：选择38周新生儿盘状胎盘、一级胎盘；采集产妇的外周血，采用elasa方法检测乙肝、丙肝、梅毒、艾滋、eb病毒、嗜热t细胞病毒为阴性；
步骤二：胎盘基蜕膜的分离：将含有庆大霉素的pbs缓冲液反复冲洗胎盘，用眼科剪取胎盘基蜕膜部分到培养皿中，其中丛密绒毛膜借绒毛干呈树枝状深入基蜕膜,周围形成血窦，大部分绒毛浸浴在血窦中，少部分绒毛与基蜕膜融合，起固定作用，因此要将胎盘基蜕膜进行分离处理；
步骤三：胎盘基蜕膜干细胞内液的制备，在gmp制备车间中将剪碎的胎盘基蜕膜放到50毫升离心管中，加入3毫升的3mg/ml的胶原蛋白酶i消化60分钟，加入dmem/f12培养基终止消化，2200rpm/min离心5分钟，弃掉上清，细胞沉淀加入20毫升无血清细胞培养基中培养。每3天换液，第10天，可观察到梭形细胞长出，7个克隆的时候可以传代、冻存。
步骤四：医美级胎盘基蜕膜干细胞内液的制备方法：选择超滤膜，超滤膜选择截留分子量为200000的超滤膜，将胎盘基蜕膜干细胞裂解液进行膜分离，在-20℃冷冻储存，医美使用时临时室温融化，采用超滤法，超滤是介于微滤和纳滤之间的一种膜过程，膜孔径在0.05um至1nm分子量之间，超滤是一种能够将溶液进行净化、分离、浓缩的膜分离技术，超滤过程通常可以理解成与膜孔径大小相关的筛分过程。以膜两侧的压力差为驱动力，以超滤膜为过滤介质，在一定的压力下，当水流过膜表面时，只允许水及比膜孔径小的小分子物质通过，达到溶液的净化、分离、浓缩的目的。
本实施例制备的胎盘基蜕膜干细胞内液能深度利用和再次开发胎盘，研发出的医美级胎盘基蜕膜干细胞内液是再造和恢复美丽容颜的最好的细胞提取物。医美级胎盘基蜕膜干细胞内液有显著的美容美肤效果：能使松驰下坠的皮肤光滑收紧，恢复皮肤弹性，减少皮肤皱纹和色素沉着。经统计发现，经医美级胎盘基蜕膜干细胞内液美容抗衰老获得的美容效果，更换各种衰老、受损组织细胞，从肌底细胞本源进行修复，让细胞重新得到年轻化生理能力，细胞具备持久年轻活力，由内而外的淡化色斑、抹平细纹、皮肤重新焕发水嫩感，恢复紧致弹力，美白，提亮肌肤光泽。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。