本发明涉及农业应用生物技术领域，特别是提供一种对油菜毛状根快速诱导的方法。
背景技术：
油菜在进行基因功能验证的方法中，一般采用油菜外植体诱导愈伤再生体系，该技术实验周期较长而且转化效率比较低。但是油菜毛状根具有生长周期短，便于培养，易于转化、转化率高等优点。目前，黄籽油菜育种是当代油菜育种的热点，对油菜中种皮基因的克隆和基因功能验证就尤为重要。因此油菜的毛状根诱导和基因转化效率十分必要，同时可以利用转入毛状根中gus基因，对其进行gus染色鉴定转化效率，这对利用油菜毛状根有着十分重要的意义。
油菜外植体用发根农杆菌诱导毛状根，其中发根农杆菌菌种是关键物质。k599是发根农杆菌一种，已有文献报道可以诱导植物发根。发根农杆菌诱导植物产生毛状根的产生是一个复杂的过程，与之含有的ri质粒有着密切的关系,主要是由ri质粒中ori区、vir区及t-dna区三部分共同作用的结果。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种快速诱导埃塞俄比亚油菜毛状根的方法。
本发明采用的技术方案：一种快速诱导埃塞俄比亚油菜毛状根的方法,是将2-3周的埃塞俄比亚油菜无菌苗，分别用侵染液a和侵染液b侵染5-10分钟，然后进行共培养,24-48小时后，转移到筛选培养基中进行培养，一周以后从外植体中剪下生长快速的毛状根，转移到继代培养基上，二周以后转移到液体培养基上进行扩大培养，一个月以后得到大量毛状根；所述的侵染液a为野生型发根农杆菌k599，侵染液b为转入gus报告基因的发根农杆菌k599。
所述的侵染液a由od值(600）0.8发根农杆菌k599进行离心用等体积ms液体进行重悬得到。
所述的侵染液b由od值(600）0.8发根农杆菌k599带有gus报告基因进行离心用等体积ms液体进行重悬得到。
本发明有益效果：
本发明采用od值为0.8的野生型发根农杆菌k599对埃塞俄比亚油菜进行诱导，能高效诱导出大量毛状根；并且，诱导出的毛状根中带有gus报告基因，能被染成蓝色。从而能采用化学染色法简便、直观探究出埃塞俄比亚油菜的诱导转化效率。发明方法操作简单，分析速度快，使用试剂价格低廉。
具体实施方式
实施例1:
一种快速诱导埃塞俄比亚油菜毛状根的方法，包括步骤：
（1）侵染液a：由50mlod值(600）0.8发根农杆菌k599进行离心，用等体积ms液体进行重悬得到，混匀备用。
（2）侵染液b：50mlod值(600）0.8发根农杆菌k599带有gus报告基因进行离心，用等体积ms液体进行重悬得到，混匀备用。
（3）取两瓶2周龄的的黑籽埃塞俄比亚油菜，剪段。
（4）一组加入到50毫升侵染液a，使外植体完全浸泡在液体中，侵染5-10分钟。另外一组加入到50毫升侵染液b中。
（5）放入ms固体培养基上，25℃暗培养48h。
（6）共培养结束以后，转移至含有100mg/ml头孢的ms固体培养基中，培养两周到三周以后，下胚轴和子叶分化形成毛状根。
（7）剪去2-3cm毛状根，在加入100mg/ml头孢ms固体培养基上进行筛选培养。两周以后筛选出生长速度快的油菜毛状根，在含50mg/ml头孢的ms固体培养基上进行继代培养。继代培养2-3次以后，得到脱毒的油菜毛状根。
（8）剪去2-3cm状根，在加入ms液体培养基上进行扩大培养，得到生长快,侧根分支多的油菜毛状根。
（9）对b侵染液侵染并培养的埃塞俄比亚油菜进行gus染色，发现变蓝。
实施例2:
一种快速诱导埃塞俄比亚油菜毛状根的方法，包括步骤：
（1）侵染液a：由50mlod值(600）0.8农杆菌k599进行离心，用等体积ms液体进行重悬得到，混匀备用。
（2）侵染液b：50mlod值(600）0.8农杆菌k599带有gus报告基因进行离心，用等体积ms液体进行重悬得到，混匀备用。
（3）取两瓶2周龄黄籽埃塞俄比亚油菜，剪段。
（4）一组加入到50毫升侵染液a，使外植体完全浸泡在液体中，侵染5-10分钟。另外一组加入到50毫升侵染液b中。
（5）放入ms固体培养基上，25℃暗培养48h。
（6）共培养结束以后，转移至含有100mg/ml头孢的ms固体培养基上，培养两周到三周以后，下胚轴和子叶分化形成毛状根。
（7）剪去2-3cm毛状根，在加入100mg/ml头孢ms固体培养基上进行筛选培养。两周以后筛选出生长速度快的油菜毛状根，在含50mg/ml头孢的ms固体培养基上进行继代培养。继代培养2-3次以后，得到脱毒的油菜毛状根。
（8）剪去2-3cm毛状根，在加入ms液体培养基上进行扩大培养，得生长快,侧根分支多的油菜毛状根。
（9）对b侵染液侵染并培养的黄籽埃塞俄比亚油菜进行gus染色，发现变蓝。