一种从海南狗牙花中提取ErvatamiaD的方法与流程

本发明涉及天然产物的化合物分离技术，更具体地说，是涉及一种从海南狗牙花中提取ervatamiad的方法。

背景技术：

本发明涉及的ervatamiad是从药用狗牙花(ervatamiaofficinalis)分离的新化合物，关于它的文献报道参见：iboga-typealkaloidsfromervatamiaofficinalis[j].journalofnaturalproducts,2014,77(8):1839-1846。虽然在该文献中公开了如何提取分离ervatamiad的方法，但是所采用的方法提取分离效率低，本发明的目的是提供一种提取分离率更高的方法。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种从海南狗牙花中提取ervatamiad的方法，其提取分离效率高，以克服现有技术的不足。

本发明解决其技术问题的技术方案是：所述ervatamiad的结构式为：

其特征在于包括如下步骤：

s1)提取：取海南狗牙花干燥粉碎物，加入95％的乙醇溶液，常温浸泡12h后，加热回流提取3h，过滤，收集滤液，重复上述操作，共加热回流提取3次，加热时长每次3h，合并三次滤液，浓缩成干燥浸膏；

s2)酸碱处理：上述浸膏加入水混悬后，加入盐酸水溶液至ph3，过滤，收集滤液，滤液加入氨水碱化至ph9，再用等体积的氯仿萃取三次，回收萃取液，得总生物碱部位浸膏；

s3)分离纯化：总生物碱部位，使用氯仿/甲醇混合溶剂溶解，2倍量d101大孔吸附树脂伴样，10倍量的d101大孔吸附树脂装柱，以浓度为10％、30％、50％、70％、95％的乙醇/水系统分别进行梯度洗脱，浓缩洗脱液得各部位浸膏，其中，取70％乙醇/水系统的部位浸膏为ervatamiad的目标流分；

70％部位浸膏使用硅胶柱色谱，氯仿/甲醇系统梯度洗脱，氯仿与甲醇的比例为50:1～1:1，以100ml为一流分，得到60个流分，合并相同流分，得5个流分，分别为er-1～er-5，流分er-2有块状结晶固体析出，经重结晶纯化后，得到化合物ervatamiad。

本发明的有益效果是：

与现有技术相比，本发明的方法通过2倍量d101大孔吸附树脂伴样，10倍量的d101大孔吸附树脂装柱，以乙醇/水系统(10％，30％，50％，70％，95％)进行梯度洗脱，最终得到ervatamiad，大孔吸附树脂吸附耗损较小，从而提高新化合物的提取率。

附图说明

图1是本发明ervatamiad的提取与分离工艺流程图。

具体实施方式

为了使本发明的目的，技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步的详细说明。

图1是本发明实施提供的从海南狗牙花中分离ervatamiad的方法实现流程。主要包括以下4步：

s1:提取：取海南狗牙花干燥粉碎物10kg，加入25l95％的乙醇溶液，常温浸泡12h后，加热回流提取3h，过滤，收集滤液，重复上述操作，共加热回流提取3次，加热时长每次3h，合并三次滤液，浓缩成干燥浸膏456g。

s2:酸碱处理：上述浸膏加入1l水混悬后，加入1％的盐酸水溶液至ph3，过滤，收集滤液，滤液加入氨水碱化至ph9，再用等体积的氯仿萃取三次，回收萃取液，得总生物碱部位浸膏32g。

s3:分离纯化：总生物碱部位，使用氯仿/甲醇混合溶剂溶解，2倍量d101大孔吸附树脂伴样，10倍量的d101大孔吸附树脂装柱，以乙醇/水系统(0％，30％，50％，70％，95％)进行梯度洗脱，浓缩洗脱液得各部位浸膏，其中，70％部位浸膏为ervatamiad的目标流份。

70％部位浸膏使用硅胶柱色谱，氯仿/甲醇系统梯度洗脱，氯仿与甲醇的比例为50:1～1:1，以100ml为一流分，得到60个流分，合并相同流分，得5个流分，分别为er-1～er-5，流分er-2有块状结晶固体析出，经重结晶纯化后，得到化合物ervatamiad，38.2mg。

s4：结构解析：通过对化合物的核磁共振谱(1d和2d)、质谱的解析，以及和有关文章报道的数据进行比较，确定化合物为ervatamiad。

ervatamiad：无色方晶，易溶于氯仿，甲醇，不溶于石油醚；254nm紫外灯下有暗斑，碘熏显黄色，碘化铋钾显色反应呈红棕色。hr-esi-ms显示准分子离子峰m/z379.1629[m+na]⁺(calcdforc20h24n2o4na,379.1628)，分子式为c20h24n2o4，不饱和度ω＝10。核磁共振谱数据(1d和2d)见表1，并与文献(iboga-typealkaloidsfromervatamiaofficinalis

[j].jnatprod,2014,77(8):1839-1846.)报道数据相比较，鉴定结构为ervatamiad。

表1ervatamiad的核磁共振数据(measuredat600mhz,dmso-d6,δinppm,jinhz)

尽管已经示出和描述了本发明的实施例，本领域的普通技术人员应当理解：在不脱离本发明的原理和宗旨的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由权利要求及其等同替换所限定，在未经创造性劳动所作的改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

技术特征：

技术总结
本发明提供一种从海南狗牙花中提取Ervatamia D的方法，包括提取、分离纯化等步骤，提取：取海南狗牙花干燥粉碎物，乙醇常温浸泡后加热回流提取，合并三次滤液，浓缩成干燥浸膏；干燥浸膏进行酸碱处理；然后总生物碱部位使用氯仿/甲醇混合溶剂溶解，D101大孔吸附树脂以乙醇/水系统(10％，30％，50％，70％，95％)进行梯度洗脱，取70％乙醇/水系统部位浸膏为Ervatamia D的目标流分，使用硅胶柱色谱，氯仿/甲醇系统梯度洗脱；经重结晶纯化后，得到化合物Ervatamia D。

技术研发人员：唐本钦;张晓琦;叶文才;于国东;马彦
受保护的技术使用者：顺德职业技术学院
技术研发日：2019.05.11
技术公布日：2019.08.20