一种鸡血液DNA快速提取方法及其应用与流程

本发明涉及dna提取技术领域，特别涉及鸡血液dna快速提取方法及其应用。

背景技术：

目前，从动物组织或血液中提取dna的技术已很成熟，但这些方法首先都需要用蛋白酶对其进行消化处理，处理时间少则1小时，多则需过夜，而且这些方法都使用刺激的化学试剂或昂贵的过滤柱。因此，dna提取花费大量的人力物力，是制约影响以pcr为基础的分子检测成本和效率的关键因素。

畜禽绝大部分的经济性状都是数量性状，传统的畜禽育种工作在对经济性状进行选育时是利用表型和系谱记录，通过最佳线性无偏预测来估计个体的育种值，并根据ebv排名进行选种选配。这种方法己经在畜禽遗传改良中取得了很大进展，但是对于一些遗传力比较低的性状、限性性状、屠体性状及表型难测定的性状来说却进展缓慢。随着分子生物学技术的发展，大量的分子标记被开发出来，这为低遗传力性状的育种提供了新思路。分子标记的发展，主要经历了三个时期：第一代是以分子杂交为核心的分子标记，包括rflp、dna指纹技术等；第二代是以pcr为核心的分子标记，包括随机扩增多态性rapd、简单序列重复ssr、扩增片段长度多态性aflp、序列标签位点sts等；第三代是一些新型的分子标记，如snp标记、表达序列标签est标记等。随着芯片技术和测序技术的发展，测序成本和芯片成本不断降低，为全基因组组关联分析在动物育种的应用提供了可能。由于分子标记不易受环境影响，能遗传给后代，没有性别和年龄限制，可以进行早期选种，短世代间隔，提高选择的准确性，所以利用开发出来的分子标记进行辅助育种具有广阔的应用前景。由此可见，不管是以pcr为核心的分子标记，还是以测序或芯片获得snp的基因组选择，前提都需要快速简便的获取基因组dna。

公开于该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

技术实现要素：

本发明针对现有技术中存在的dna提取方法的费时、对身体有害和价格昂贵等缺点，发明一种鸡血液dna快速提取方法及其应用，旨在得到一种能快速、简便获得基因组dna的提取方法。

为实现上述目的，本发明提供的技术方案如下：

一种鸡血液dna快速提取方法：将鸡血液放入自制裂解液中混合均匀，加热至100℃，保持2分钟，立刻放于冰上冷却，离心，鸡血液基因组dna即在上清液中。

优选地，所述的鸡血液与自制裂解液按1：49的体积比混合均匀。

优选地，所述的自制裂解液为0.25mnaoh与1％sds(十二烷基硫酸钠)混合所得物质。

优选地，所述的离心条件为12000rpm，10min。

上述方法提取所得基因组dna可用于pcr扩增、微卫星检测、基因组测序及基因组芯片分型；即以pcr为核心的分子检测、基于以基因组测序和芯片为核心的snp分型。

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

本发明能快速、简便地获得基因组dna，用于以pcr为核心的分子检测、基于以基因组测序和芯片为核心的snp分型，为分子标记辅助选择及基因组选择技术领域显著降低了成本、节约了人工、提高了效率，有助于分子育种的应用和推广。

附图说明

图1本发明提取的鸡血液基因组dna为模板的pcr性别鉴定结果。

图2普通dna提取方法提取的dna为模板的pcr性别鉴定结果。

图3以用本发明提取的鸡血液基因组dna为模板对刚出雏鸡进行遗传鉴定的结果；其中，泳道中两条带表示雏鸡为雌性，泳道含一条带表示雏鸡为雄性。

具体实施方式

下面结合附图具体实施方式进行详细描述，但应当理解本发明的保护范围并不受具体实施方式的限制。实施例中采用的原料、实际若无特殊说明，皆为市售所得。裂解液中1％sds是体积浓度为1％的sds。

实施例1

一种鸡血液dna快速提取方法：用8#注射器针头，扎刚出雏小鸡的脚上血管直至出血，然后用移液枪吸取1μl血液放入含自制的裂解液(0.25mnaoh+1％sds)的离心管中，离心管中的自制的裂解液为49μl，混合均匀，然后将离心管放在pcr仪上，加热至100℃，保持2分钟，然后立即取出放于冰上冷却，离心(12000rpm,10min)，取上清液，鸡血液基因组dna即在上清液中，上清液置于-20℃冰箱，需使用基因组dna时取出即可。

应用

根据chd1基因在z和w染色体上具有不同大小的片段，母鸡的chd1基因在琼脂糖检测时有两条带，而公鸡只有一条带。chd1基因的引物序列如下：chd1f:5′gttactgattcgtctacgaga3′和chd1r:5′attgaaatgatccagtgcttg3′。

pcr扩增体系：基因组模板1μl，1×pcrbuffer(10mmtris-hclph8.3,1.5mmmgcl2,50mmkcl)，0.1mmdntps，0.2μmeachofprimers，0.5uoftaqdnapolymerase；

pcr扩增程序：94℃，5min；94℃，30s；52℃，30s；72℃，30s；重复35个循环，最后72℃延伸5min，pcr产物用2％的琼脂糖凝胶检测。

根据上述pcr扩增体系和扩增程序，采用本发明提取的鸡血液基因组dna为模板的pcr性别鉴定，结果如图1所示。

根据上述pcr扩增体系和扩增程序，采用普通dna提取方法提取的dna为模板的pcr性别鉴定，结果如如图2所示。

根据上述pcr扩增体系和扩增程序，采用本发明提取的鸡血液基因组dna为模板对刚出雏鸡进行遗传鉴定，结果如图3所示；其中，泳道中两条带表示雏鸡为雌性，泳道含一条带表示雏鸡为雄性。从图3中可见，以本发明提取的dna为模板有效的区分刚出雏的鸡，且效果与用常规dna抽提方法相同。

用本方法提取所得基因组dna，可当成普通传统酚仿法提取的dna使用。

前述对本发明的具体示例性实施方案的描述是为了说明和例证的目的。这些描述并非想将本发明限定为所公开的精确形式，并且很显然，根据上述教导，可以进行很多改变和变化。对示例性实施例进行选择和描述的目的在于解释本发明的特定原理及其实际应用，从而使得本领域的技术人员能够实现并利用本发明的各种不同的示例性实施方案以及各种不同的选择和改变。本发明的范围意在由权利要求书及其等同形式所限定。

技术特征：

1.一种鸡血液dna快速提取方法，其特征在于：将鸡血液放入自制裂解液中混合，加热至100℃，保持2分钟，立刻放于冰上冷却，离心，鸡血液基因组dna即在上清液中。

2.根据权利要求1所述的鸡血液dna快速提取方法，其特征在于：自制裂解液按1：49的体积比混合。

3.根据权利要求1所述的鸡血液dna快速提取方法，其特征在于：所述的自制裂解液为0.25mnaoh与1％sds混合所得物质。

4.根据权利要求1所述的鸡血液dna快速提取方法，其特征在于：所述的离心条件为12000rpm，10min。

5.一种采用如权利要求1所述的方法提取所得基因组dna在pcr扩增、微卫星检测、基因组测序及基因组芯片分型中的应用。

技术总结
本发明公开了一种鸡血液DNA快速提取方法：将鸡血液放入自制裂解液中混合均匀，加热至100℃，保持2分钟，立刻放于冰上冷却，离心，鸡血液基因组DNA即在上清液中。本发明能快速、简便地获得基因组DNA，用于以PCR为核心的分子检测、基于以基因组测序和芯片为核心的SNP分型，为分子标记辅助选择及基因组选择技术领域显著降低了成本、节约了人工、提高了效率，有助于分子育种的应用和推广。

技术研发人员：杨秀荣;邓继贤
受保护的技术使用者：广西大学
技术研发日：2020.05.29
技术公布日：2020.09.04