1.一种病毒形式的新型冠状病毒核酸标准物质,其特征是,所述标准物质以病毒为载体,包裹新型冠状病毒核酸检测的靶标基因。
2.根据权利要求1所述的一种病毒形式的新型冠状病毒核酸标准物质,其特征是,所述靶标基因为orf1ab、n基因和e基因。
3.根据权利要求1或2所述的一种病毒形式的新型冠状病毒核酸标准物质,其特征是,所述病毒载体还包裹内参基因hrnasep基因。
4.一种病毒形式的新型冠状病毒核酸标准物质的制备方法,其特征是,包括:
合成靶标基因;
将靶标基因分别载入病毒质粒载体;
将病毒质粒转化入大肠杆菌进行培养;
分离、回收病毒质粒;
将病毒质粒转染hek293t细胞并进行病毒包装;
将包装好的病毒颗粒提纯、重悬后,加冻干保护剂分装,经真空冷冻干燥后封装。
5.根据权利要求4所述的一种病毒形式的新型冠状病毒核酸标准物质的制备方法,其特征是,所述靶标基因的合成方法为:
对新型冠状病毒的开放阅读框orf1ab基因、核衣壳n基因、包膜e基因和内参基因hrnasep基因序列进行修改,使其在5'端和3'端包含随机的终止密码子;
合成上述4种基因并做基因融合,合成4种融合基因片段,分别是orf1ab基因和hrnasep基因、e基因和hrnasep基因、n基因和hrnasep基因以及单独的hrnasep基因。
6.根据权利要求4所述的一种病毒形式的新型冠状病毒核酸标准物质的制备方法,其特征是,将靶标基因分别载入病毒质粒载体的方法为:采用genbuilder™克隆试剂盒,将靶标基因分别反向克隆到慢病毒质粒plenti-puro载体中的puromycin抗性基因上游的多克隆位点,同时替换慢病毒质粒载体上的cmv启动子。
7.根据权利要求4所述的一种病毒形式的新型冠状病毒核酸标准物质的制备方法,其特征是,将病毒质粒转化入大肠杆菌的方法为:将病毒质粒分别转化入大肠杆菌stbl3,在lb培养基37℃、14~16小时过夜培养。
8.根据权利要求4所述的一种病毒形式的新型冠状病毒核酸标准物质的制备方法,其特征是,分离、回收病毒质粒的方法为:用碱性裂解提取法分离质粒,经离子交换柱层析、te洗脱、质粒纯化后回收病毒质粒并去除内毒素。
9.根据权利要求4所述的一种病毒形式的新型冠状病毒核酸标准物质的制备方法,其特征是,将病毒质粒转染hek293t细胞及病毒包装的过程为:将病毒颗粒在培养皿中和表达病毒结构蛋白的辅助质粒混合vsvg蛋白、jaj-pol蛋白、rev蛋白,室温孵育20分钟后,转染dmem培养基中的hek293t细胞,37℃、5%co2培养,实现靶标基因片段的转录、病毒外壳蛋白的表达和病毒组装,组装好的病毒分泌胞外。
10.根据权利要求4所述的一种病毒形式的新型冠状病毒核酸标准物质的制备方法,其特征是,所述真空冷冻干燥的方法为:
初步冷冻:将产物在-50℃下保持5小时,然后在-50℃下在0.1mbar下再保持1小时;初步干燥:在1小时内将温度升至-20℃,并在-20℃下保持30小时;
二次干燥:在10个小时内将温度从-20℃升至25℃,在25℃、0.03mbar下保持15小时。