本发明属于中药有效成分提取物领域；具体涉及一种黄芪蒲公英提取物及其制备方法及其组合物及其应用。
背景技术：
《黄帝内经》提出了“上医治未病”的预防观点，强调的是未病先防与既病防变，这与现代医学提出的疾病预防具有异曲同工之妙。世界卫生组织(who)提出：1/3的人类癌症是可以预防的，加强预防是战胜癌症的重中之重。所以，探讨癌症的发病机理，发明有效的癌症预防药物是目前医药学界关注的重大课题。目前研究的预防癌症的化学药物多具有较为严重的毒副作用。与之相比，中草药预防以其药食同源，低毒，无残留等独特优势成为癌症预防的重要组成部分，被广泛地应用于临床治疗和预防多种肿瘤疾病。选择天然、毒副作用小、使用安全的中草药预防癌症极具吸引力，将为预防日趋严重的结肠癌疾病的研究提供新途径和新方法。
氧化应激在许多疾病的发生发展中起着重要作用.因自由基的清除和活性氧的激活，各种信号通路可保护组织细胞免受氧化应激损伤，于是相关抗氧化损伤作用的抗氧化剂便应运而生。这些抗氧化剂可能是内源的，也可能是外源性的，其中黄芪和蒲公英被认为是强大的潜在外源性抗氧化剂，研究表明体外抗氧化活性表明，黄芪和蒲公英对活性氧、dpph自由基、超氧阴离子及过氧化氢具有相对较强的清除能力，还能防止运动过度引起的衰老和疲劳所引起的氧化应激，提高氧化应激酶的活性。
蒲公英和黄芪配伍，在临床广泛适用于机体正常免疫功能低下或异常活跃的多种免疫性疾病及慢性炎症性疾病。现代药理研究证实黄芪、蒲公英均有增强机体免疫的功效。
随着核技术在工农业、医学生命科学等方面应用的迅速发展，人们与放射线接触的机会日益增多，遭受辐射损伤的可能性随之增加。尤其是临床上对肿瘤患者进行放疗、职业受照人员的辐射性损害日益得到重视。已有研究表明黄芪能促进造血干细胞的增殖和向红细胞和粒细胞分化，黄芪甲甙对辐射损伤细胞与骨髓造血细胞有一定的保护作用，能使损伤的脾细胞向正常逆转，加速粒细胞增殖与动员作用，促进成熟迟粒细胞成熟进入储存池，从而进入到外周血循环，对淋巴细胞有激活作用。蒲公英提取物可通过抑制外周血白细胞的减少，进而缓解电离辐射对小鼠造血系统的损伤，实现其辐射防护效应，从而达到防止辐射损伤的目的。
技术实现要素：
本发明目的是提供了一种用于预防结肠癌的黄芪蒲公英提取物及其制备方法及其应用。
本发明通过以下技术方案实现：
一种黄芪蒲公英提取物，所述的一种黄芪蒲公英提取物包括以下结构式的化合物：
蒲公英叶萜a，蒲公英叶萜b，黄芪叶三萜m1，黄芪叶三萜m3，黄芪叶三萜m4。
蒲公英叶萜a(2α，6α-dimethyl-3-one-8β-hydroxy-eudesma-4，13(14)-dien-15-oicacid)的结构式如下所示：
蒲公英叶萜b(2β，6α-dimethyl-3-one-2α，8β-dihydroxy-eudesma-4，13(14)-dien-15-oicacid)的结构式如下所示：
黄芪叶三萜m1(huangqiyeninm1)的结构式如下所示：
黄芪叶三萜m3(huangqiyeninm3)的结构式如下所示：
黄芪叶三萜m4(huangqiyeninm4)的结构式如下所示：
本发明所述的一种黄芪蒲公英提取物，所述的一种黄芪蒲公英提取物包括以下结构式的化合物：香叶木素，芫花素，对香豆酸，丁香酸，阿魏酸，香草酸，异豆蔻素，二氢猕猴桃内酯，丁香皂苷ⅲ，罗比尼苷b，罗比尼苷f，大豆皂苷b，环芳烃苷a，丁香苷，环黄芪皂醇。
本发明所述的一种黄芪蒲公英提取物，所述的一种黄芪蒲公英提取物由菊科植物蒲公英属植物的根、豆科植物蒙古黄芪或膜荚黄芪的全草混合，提取后制得。
本发明所述的一种黄芪蒲公英提取物，由蒲公英(菊科植物蒲公英属数种植物的全草)和黄芪(豆科植物蒙古黄芪astragalusmembranaceus(fisch.)bge.var.mongholicus(bge.)hsiao或膜荚黄芪astragalusmembranaceus(fisch.)bge.的全草)混合提取后制得。
本发明所述的一种黄芪蒲公英提取物，黄芪和蒲公英的重量比为5:1、1:1和1:5。
本发明所述的一种黄芪蒲公英提取物：
蒲公英叶萜a的结构式如下所示：
蒲公英叶萜b的结构式如下所示：
黄芪叶三萜m1的结构式如下所示：
黄芪叶三萜m3的结构式如下所示：
黄芪叶三萜m4的结构式如下所示：
本发明所述的一种黄芪蒲公英提取物的制备方法，包括如下步骤：
步骤1、按照重量份数分别称量黄芪、蒲公英根，加入粉碎机粉碎后，得到的混合物，待用；
步骤2、按照料液比为1:5～15g/ml将步骤1得到的混合物中加入乙醇溶液，浸渍一定时间后，回流提取2～3次，过滤得到滤渣、滤液，待用；
步骤3、将步骤2得到的滤液浓缩到比重为1.15～1.25g/ml，干燥，得到提取物a；
步骤4、按照料液比为1:5～15g/ml将步骤2得到的滤渣中加入纯化水，索式提取2～3次，然后按照体积比向提取液中加入三氯甲烷和正丁醇的混合溶液，搅拌一定时间后，离心分离，取上清干燥得到提取物b；
步骤5、将步骤3的提取物a、步骤4的提取物b混合均匀，得到所述的一种黄芪蒲公英提取物。
本发明所述的一种黄芪蒲公英提取物的制备方法，步骤1中的乙醇溶液的浓度为75～85wt％；步骤2中的回流提取温度为65～75℃，提取时间为1～3h。
本发明所述的一种黄芪蒲公英提取物的制备方法，步骤3中的干燥温度为80～100℃；步骤4中的索式提取温度为为95～100℃，提取时间为1～3h，三氯甲烷和正丁醇的体积比为4～5:1，提取液和三氯甲烷和正丁醇的混合溶液的体积比为3～4:1。
本发明所述的一种黄芪蒲公英提取物的制备方法，步骤3中离心分离的转速为3000～4000r/min，离心时间3～10min。
本发明所述的一种黄芪蒲公英提取物的应用，用于预防结肠癌，抗氧化、增强免疫的药物。
本发明所述的一种黄芪蒲公英提取物的应用，所述的一种黄芪蒲公英提取物用于制备口服制剂，所述的口服制剂包括颗粒剂、散剂、片剂、胶囊剂、口服液、酒剂、露酒。
本发明的有益效果为：
本发明所述的一种黄芪蒲公英提取物，黄芪具有的作用，以黄芪为君药，配伍具有的作用的蒲公英，二者对结肠癌的预防能发挥协同作用，二药合用较之单味药物的使用作用更佳，可以发挥中医药的配伍优势，综合预防结肠癌。实验证明二者配合对结肠癌的预防具有独到的优势。本发明是挖掘祖国医药药学宝库，在结肠癌防治基础上，选用纯中药，按照中医药基础理论组方，经严格筛选，结合现代先进工艺制法组合而成。该组合药物可达到治疗的药效，具有疗效显著、安全毒副作用小，费用低，操作简便等特点。
本发明所述的一种黄芪蒲公英提取物，经药理学实验证明，黄芪蒲公英提取物能够预防结肠癌。
本发明所述的一种黄芪蒲公英提取物的制备方法，提取皂苷类成分占15％、多糖类成分占30％，制备方法提取效率好，尤其多糖类成分提取率更佳。
具体实施方式
通过以下实施方式进一步详细说明本发明的技术方案。需要指出的是，以下说明仅仅对本发明要求保护的技术方案的举例说明，并对这些技术方案的任何限制。本发明的保护范围以所附权利要求记载的内容为准。
具体实施方式一：
一种黄芪蒲公英提取物的制备方法，将黄芪5kg和蒲公英根1kg粉碎，用75％乙醇；料液比1:15；提取温度为70℃；提取时间2h，提取3次，过滤得到滤渣及滤液，滤液挥干后得到提取物a。滤渣纯水100℃索式提取；料液比1:6，提取时间2h，提取2次，向提取液中加入1/4倍体积的氯仿─正丁醇(氯仿：正丁醇＝5∶1)溶液，混合20min，3500r/min离心5min，中层白色絮状沉淀为蛋白质，取上清干燥得到提取物b。混合提取物a和提取物b即得黄芪蒲公英提取物。
经检测黄芪和蒲公英根提取物，皂苷类成分占15％，多糖类成分占30％，该方法提取效率好，尤其多糖类成分提取率更佳。
具体实施方式二：
一种黄芪蒲公英提取物的制备方法，将黄芪5kg和蒲公英根1kg粉碎，用80％乙醇；料液比1:10；提取温度为70℃；提取时间1h，提取3次，过滤得到滤渣及滤液。滤液挥干后得到提取物a。滤渣纯水100℃索式提取；料液比1:6，提取时间2h，提取2次，向提取液中加入1/4倍体积的氯仿─正丁醇(氯仿：正丁醇＝5∶1)溶液，混合20min，3500r/min离心5min，中层白色絮状沉淀为蛋白质，取上清干燥得到提取物b。混合提取物a和提取物b即得黄芪蒲公英提取物。
经检测黄芪和蒲公英根提取物，皂苷类成分占15％上，多糖类成分占30％以上，总皂苷提取率效果更明显。
具体实施方式三：
一种黄芪蒲公英提取物的制备方法，将黄芪5kg和蒲公英根1kg粉碎，用85％乙醇；料液比1:5；提取温度为70℃；提取时间2h，提取3次，过滤得到滤渣及滤液。滤液挥干后得到提取物a。滤渣纯水100℃索式提取；料液比1:6，提取时间2h，提取2次，向提取液中加入1/4倍体积的氯仿─正丁醇(氯仿：正丁醇＝5∶1)溶液，混合20min，3500r/min离心5min，中层白色絮状沉淀为蛋白质，取上清干燥得到提取物b。混合提取物a和提取物b即得黄芪蒲公英提取物。
经检测黄芪和蒲公英根提取物，皂苷类成分占15％上，多糖类成分占30％。该法提取效率较好。
对具体实施方式一至三的总皂苷和总多糖含量检测试验研究如下所示：
总皂苷的含量测定：
取黄芪甲苷对照品约16mg，精密称定，加甲醇溶解于10ml量瓶中。制成1.62mg/l的对照品溶液。
供试品溶液的制备：精密称取所述的黄芪蒲公英提取物50mg，甲醇溶解，置100ml具塞三角瓶中，室温振摇5min，过滤，将滤液置于10ml量瓶中，甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
测定法取黄芪甲苷对照品母液，加甲醇逐级稀释配制成质量浓度为1.626，1.018，0.764，0.509，0.470，0.255，0.235，0.118g·l－1溶液。分别精密吸取20μl，平行进样2次。以进样量(μg)对数对峰面积对数进行线性回归。分别精密吸取对照品溶液10，20μl，供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，测定用外标两点法供试品溶液。
表1不同批次的提取物总皂苷的含量测定结果
总多糖的含量测定：
对照品溶液的制备，精密称取无水葡萄糖对照品2mg于100ml容量瓶中稀释至刻度，摇匀得20μg/ml葡萄糖标准液。
供试品溶液的制备：精密称取所述的黄芪蒲公英提取物100mg，100ml蒸馏水加热回流2h，过滤出溶液，然后加入100ml的蒸馏水，继续加热回流提取2h，过滤出溶液，将2次过滤出的溶液混合均匀，减压浓缩至原体积的1/5，加入2倍量体积的95％乙醇放置过夜，醇沉得粗制的多糖，过滤得沉淀，然后取等量黄芪多糖粗品加蒸馏水依次配置出浓度为40mg/ml和20mg/ml的黄芪多糖溶液。
测定法精密量取上述葡萄糖标准液2、4、6、8、10ml，分别置10ml容量瓶中，加水定容至刻度。精密吸取1ml，加5％苯酚溶液1.0ml，浓硫酸5ml，静置10min，加热至沸腾15min，室温放置20min，照分光光度法，于波长490nm处测定吸光度，以蒸馏水按同样显色操作为空白，测定吸光度a。以吸光度a为纵坐标，葡萄糖浓度c为横坐标，得葡萄糖的线性回归方程a＝0.0330c+0.1316(相关系数＝0.9989)
表2不同批次的提取物总多糖的含量测定结果
具体实施方式四：
根据具体实施方式一至三的方法制备的所述的一种黄芪蒲公英提取物的组合物为片剂。
本实施方式所述的一种黄芪蒲公英提取物的组合物中片剂的制备方法如下：
表3黄芪蒲公英提取物片剂处方
将黄芪蒲公英提取物在60℃下充分减压干燥，粉碎，过80目筛；辅料在50-70℃下充分干燥，过100目筛，备用。以淀粉和微晶纤维素为填充剂，羧甲基淀粉钠为解崩剂，混合均匀，在相同压力下压制片剂，片重约为300mg。
片剂检查
①外观形状：黄色至棕黄色片剂
②重量差异：按《中国药典》(2020版)检查崩解时限，在30分钟内全部崩解，符合规定。
具体实施方式五：
根据具体实施方式一至三的方法制备的所述的一种黄芪蒲公英提取物的组合物为颗粒剂。
本实施方式所述的一种黄芪蒲公英提取物的组合物中颗粒剂的制备方法如下：
表4黄芪蒲公英提取物颗粒剂处方
将黄芪蒲公英提取物与乳糖和可溶性淀粉按适宜比例混合，加适量40％的乙醇制成软材，轻压即散为标准，过3号筛(50目筛)制粒，40℃烘干40-80分钟后整粒(取过3号筛但不能通过5号筛的颗粒作为成品)，整粒后50-60摄氏度烘干即得成品，装袋，每袋重量约为1000mg。
颗粒剂检查：
①外观性状：颗粒剂应干燥，粒径均匀，色泽-致，无吸潮、结块、潮解等现象。
②粒度检查：按《中国药典》(2020版)照粒度和粒度分布测定法(通则0982第二法双筛分法)测定，不能通过一号筛与能通过五号筛的总和不超过12％。
③干燥失重：按《中国药典》(2020版)照干燥失重测定法(通则0831)测定，于在80℃减压干燥至恒重，减失重量不超过2.0％。
④溶化性检查：可溶颗粒检查法中药单剂量包装取1袋，加热水200ml，搅拌5分钟，立即观察，可溶颗粒应全部溶化或轻微浑浊。
⑤水分：按《中国药典》(2020版)中药颗粒剂照水分测定法(通则0832)测定，水分不得超过6.0％。
⑥装量：照《中国药典》(2020版)最低装量检查法(通则0942)检查，符合规定。
具体实施方式六：
根据具体实施方式一至三的方法制备的所述的一种黄芪蒲公英提取物的组合物为胶囊剂。
本实施方式所述的一种黄芪蒲公英提取物的组合物中胶囊剂的制备方法如下：
表5黄芪蒲公英提取物胶囊剂处方
将黄芪蒲公英提取物在60c下充分减压干燥，粉碎，过80日筛；辅料过100日筛，备用。以淀粉和微晶纤维素为填充剂，羧甲基淀粉钠为崩解剂，混合均匀，以适量纯化水为润湿剂制软材，20目筛制粒，60℃干燥，加入润滑剂硬脂酸镁和助流剂微粉硅胶，混合均匀，装入胶囊，制成1000粒胶囊，即得。每粒胶囊重约为300mg。
胶囊剂检查:
①外观性状:黄色至棕黄色内容物。
②水分:取供试品内容物，照《中国药典》(2020版)水分测定法(通则0832)测定，不超过8.0％。
③装量差异:超出装量差异限度的不多于2粒，并没有1粒超出限度1倍。平均装量装量差异限度为±8％。
④崩解时限:按《中国药典》(2020版)崩解时限检查法(通则0921)检查，在30分钟内全部崩解，符合规定。
具体实施方式七：
一种黄芪蒲公英提取物的制备方法，将黄芪5kg和蒲公英根1kg粉碎，用75％乙醇；料液比1:15；提取温度为70℃；提取时间2h，提取3次，过滤得到滤渣及滤液，滤液挥干后得到提取物a。滤渣纯水100℃索式提取；料液比1:6，提取时间2h，提取2次，向提取液中加入1/4倍体积的氯仿─正丁醇(氯仿：正丁醇＝5∶1)溶液，混合20min，3500r/min离心5min，中层白色絮状沉淀为蛋白质，取上清干燥得到提取物b。混合提取物a和提取物b即得黄芪蒲公英提取物。
经检测黄芪和蒲公英根提取物，皂苷类成分占15％，多糖类成分占30％，该方法提取效率好，尤其多糖类成分提取率更佳。
具体实施方式八：
本实施方式和具体实施方式七不同之处在于，本实施方式所用的原料，黄芪的量为1kg和蒲公英根为1kg。
具体实施方式九：
本实施方式和具体实施方式七不同之处在于，本实施方式所用的原料，黄芪的量为1kg和蒲公英根为5kg。
利用具体实施方式七至具体实施方式九制备的黄芪蒲公英提取物，进行药理学实验研究如下所示：
一、黄芪蒲公英提取物对aom/dss诱导的结肠癌小鼠的预防作用：
实验材料和动物：黄芪蒲公英提取物，13-16克的雄性balb/c小鼠
实验方法：aom/dss诱导的结肠癌小鼠模型的建立：通过aom(氧化偶氮甲烷)和dss(右旋葡聚糖硫酸钠)刺激建立预防结肠癌动物模型。实验前1天，腹腔注射aom盐溶液并记录体重；实验第7天起，以1.5％dss溶液为饮小鼠饮用水；实验第14天起，改为正常饮用水2周。从实验第28天到第49天重复进行dss的第2～3次循环：
动物分组和给药方式：空白对照组，模型组，阿司匹林阳性对照组，低剂量给药组，中剂量给药组，高剂量给药组，第一次dss造模后的第3天，小鼠每天1次口服给药至实验结束。
黄芪蒲公英提取物(黄芪根：蒲公英根＝5:1)高剂量组(hph5:1):1.8g/kg.d；
黄芪蒲公英提取物(黄芪根：蒲公英根＝5:1)中剂量组(hpm5:1):0.6g/kg.d；
黄芪蒲公英提取物(黄芪根：蒲公英根＝5:1)低剂量组(hpl5:1):0.18g/kg.d；
黄芪蒲公英提取物(黄芪根：蒲公英根＝1:1)高剂量组(hph1:1):1.8g/kg.d；
黄芪蒲公英提取物(黄芪根：蒲公英根＝1:1)中剂量组(hpm1:1):0.6g/kg.d；
黄芪蒲公英提取物(黄芪根：蒲公英根＝1:1)低剂量组(hpl1：1):0.18g/kg.d；
黄芪蒲公英提取物(黄芪根：蒲公英根＝1:5)高剂量组(hph5:1):1.8g/kg.d；
黄芪蒲公英提取物(黄芪根：蒲公英根＝1:5)中剂量组(hpm5:1):0.6g/kg.d；
黄芪蒲公英提取物(黄芪根：蒲公英根＝1:5)低剂量组(hpl5:1):0.18g/kg.d；
黄芪根提取物1.8g/kg.d；蒲公英根提取物1.8g/kg.d；空白对照组：不造模；模型组：只造模不给药；阿司匹林阳性对照组：dss造模后的第3天，小鼠每天1次口服阿司匹林至实验结束。
给药方式为每天清晨灌胃，每天1次，用药治疗期间各组小鼠每日均饲以普通饲料，自由进食，饮水。
观察指标：肿瘤数量、结肠长度、最大肿瘤、血便案例。
实验结果结果如表6所示：
表6黄芪蒲公英提取物对aom/dss诱导的结肠癌小鼠的预防作用对比表
从表6中能够看出，相对于造模后/给药前，黄芪蒲公英提取物在给药后小鼠便血情况，肿瘤情况均有改善，说明黄芪蒲公英根提取物中大量的皂苷类和多糖类成分有关，可以有效的预防结肠癌的发生。同时说明，原料中黄芪蒲公英根的质量比为1:5时，预防结肠癌效果最佳，并明显优于黄芪、蒲公英根提取物单独使用时的预防效果。黄芪蒲公英根提取物高、中剂量组对结肠癌模型小鼠的结肠缩短，便血，肿瘤尺寸均有改善作用，抑制结肠癌的发生。
二、黄芪蒲公英提取物的增强免疫作用：
实验材料：黄芪蒲公英提取物，spf级昆明种小白鼠，雌性，体重18-22g，
实验方法：将小鼠随机平均分组，每组20只，每天1次，连续治疗2周。末次灌胃后对小鼠迟发型变态反应实验、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能等指标进行测定。
动物分组和给药方式：
黄芪蒲公英提取物(黄芪根：蒲公英根＝5:1)高剂量组(hph3:1):1.8g/kg.d；
黄芪蒲公英提取物(黄芪根：蒲公英根＝5:1)中剂量组(hpm3:1):0.6g/kg.d；
黄芪蒲公英提取物(黄芪根：蒲公英根＝5:1)低剂量组(hpl3:1):0.18g/kg.d；
黄芪蒲公英提取物(黄芪根：蒲公英根＝1:1)高剂量组(hph2:1):1.8g/kg.d；
黄芪蒲公英提取物(黄芪根：蒲公英根＝1:1)中剂量组(hpm2:1):0.6g/kg.d；
黄芪蒲公英提取物(黄芪根：蒲公英根＝1:1)低剂量组(hpl2:1):0.18g/kg.d；
黄芪蒲公英提取物(黄芪根：蒲公英根＝1:5)高剂量组(hph1:1):1.8g/kg.d；
黄芪蒲公英提取物(黄芪根：蒲公英根＝1:5)中剂量组(hpm1:1):0.6g/kg.d；
黄芪蒲公英提取物(黄芪根：蒲公英根＝1:5)低剂量组(hpl1:1):0.18g/kg.d；
黄芪根提取物1.8g/kg.d；蒲公英根提取物1.8g/kg.d；空白对照组：不造模；给药方式为每天清晨灌胃，每天1次，用药治疗期间各组小鼠每日均饲以普通饲料，自由进食，饮水。
迟发型变态反应测定方法：采用二硝基氟苯(dnfb)诱导小鼠迟发型超敏反应:小鼠腹部用硫化钠脱毛，范围约3cm×3cm，用10mg/ml二硝基氟苯(dnfb)溶液50μl均匀涂抹致敏。5d后用10mg/mldnfb溶液10μl均匀涂抹于小鼠右耳(两面)进行攻击。攻击后24h颈椎脱臼处死小鼠，剪下左右耳壳，用打孔器取下直径8mm耳片，称重，以左右两耳片重量之差为迟发型变态反应值。
小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的测定，每只小鼠第14天给药后腹腔注射1％鸡红细胞溶液，1～1.5h后将小鼠断椎处死，腹腔注射1ml生理盐水，按摩腹腔，在腹部中央将皮肤剪一小口，吸取约0.2ml腹腔液滴于载玻片上，水平涂片，将玻片放在湿盒内，置37℃温箱中孵育30min，取出，用生理盐水冲洗，自然晾干后用giemsa-wright染液染5min。再用生理盐水淋洗。晾干后油镜下观察，计数200个巨噬细胞中吞噬的鸡红细胞总数。吞噬百分率＝吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数/200巨噬细胞。吞噬指数＝被吞噬鸡红细胞数/200巨噬细胞。
实验结果如表7所示：
表7黄芪蒲公英提取物的免疫作用对比表
从表7中能够看出，与空白对照组比较，黄芪蒲公英提取物能增强小鼠的巨噬细胞吞噬功能，对小鼠迟发变态反应的程度有增高的趋势，说明黄芪蒲公英根提取物中大量的皂苷类和多糖类成分有关，可以有效的增强免疫功能。同时说明，原料中黄芪蒲公英根的质量比为2:1时，增强免疫效果最佳，并明显优于黄芪、蒲公英根提取物单独使用时的预防效果。黄芪蒲公英根提取物高、中剂量组对小鼠免疫功能均有增强作用。
三、黄芪蒲公英提取物的抗辐射作用：
实验材料：黄芪蒲公英提取物，spf级icr鼠，雌性
实验方法：连续灌胃小鼠30天后，ⅰ组以4gy剂量的60co-γ射线照射1次，3天后测定骨髓细胞dna含量；ⅱ组以7gy剂量的60co-γ射线照射1次，7天后测定血清中超氧化物歧化酶(sod)活性；ⅲ组以2gy剂量的60co-γ射线照射1次，7天后检测血清溶血素水平。
动物分组和给药方式：
黄芪蒲公英提取物(黄芪根：蒲公英根＝5:1)高剂量组(hph3:1):1.8g/kg.d；
黄芪蒲公英提取物(黄芪根：蒲公英根＝5:1)中剂量组(hpm3:1):0.6g/kg.d；
黄芪蒲公英提取物(黄芪根：蒲公英根＝5:1)低剂量组(hpl3:1):0.18g/kg.d；
黄芪蒲公英提取物(黄芪根：蒲公英根＝1:1)高剂量组(hph2:1):1.8g/kg.d；
黄芪蒲公英提取物(黄芪根：蒲公英根＝1:1)中剂量组(hpm2:1):0.6g/kg.d；
黄芪蒲公英提取物(黄芪根：蒲公英根＝1:1)低剂量组(hpl2:1):0.18g/kg.d；
黄芪蒲公英提取物(黄芪根：蒲公英根＝1:5)高剂量组(hph1:1):1.8g/kg.d；
黄芪蒲公英提取物(黄芪根：蒲公英根＝1:5)中剂量组(hpm1:1):0.6g/kg.d；
黄芪蒲公英提取物(黄芪根：蒲公英根＝1:5)低剂量组(hpl1:1):0.18g/kg.d；
黄芪根提取物1.8g/kg.d；蒲公英根提取物1.8g/kg.d；空白对照组：灌胃纯水；上述每组再均分ⅰ、ⅱ、ⅲ组，给药方式为每天清晨灌胃，每天1次，用药治疗期间各组小鼠每日均饲以普通饲料，自由进食，饮水。
骨髓细胞dna含量测定:在实验第31天，模型对照组和各剂量组小鼠均以4剂量的60co-γ射线照射1次，照射后第3天各组小鼠处死，取股骨，用注射器(6.5号针头)吸取2mlhanks液，冲出股骨中的全部骨髓细胞，让细胞悬液通过4号针头的注射器，使细胞在悬中充分分散。用紫外分光光度计260nm处测定od值。
血清中超氧化物歧化酶(sod)活性实验在实验第31天，模型对照组和各剂量组小鼠均以7gy剂量的60co-γ射线照射1次，照射后第7天各组小鼠摘眼球取血，离心取血清按试剂盒法进行测定。总sod活力(u/ml)＝(对照od值－测定od值)/(对照od值)×2×反应液总体积(ml)/取样量(ml)。
小鼠血清溶血素测定:在实验第31天，模型对照组和各剂量组小鼠均以2gy剂量的60co-γ射线照射1次，照射后第7天，各组小鼠腹腔注射2％(v/v)绵羊红细胞srbc，5d后，摘眼球取血，离心，取血清稀释150倍，进行半数溶血值(hc50)测定。hc50＝样品光密度值×稀释倍数/srbc半数溶血时的光密度值。
实验结果如表8所示：
表8黄芪蒲公英提取物的抗辐射作用对比表
从表8中能够看出，与空白对照组比较，黄芪蒲公英提取物能增加小鼠骨髓细胞dna含量，提高血清中超氧化物歧化酶(sod)活性。说明黄芪蒲公英根提取物中大量的皂苷类和多糖类成分有关，具有抗辐射损伤的作用。同时说明，原料中黄芪蒲公英根的质量比为2:1时，抗辐射伤害效果最佳，并明显优于黄芪、蒲公英根提取物单独使用时的预防效果。黄芪蒲公英根提取物各剂量组均具有抗辐射伤害作用。
四、黄芪蒲公英提取物的抗氧化活性作用：
实验材料：黄芪蒲公英提取物
实验方法：dpph自由基清除能力的测定：准确称取2.0ml不同浓度的样品溶液和2.0ml、0.1mol/l的dpph溶液混合，摇匀。避光反应30min，以无水乙醇作为空白，517nm波长处测吸光度。
对羟基自由基(oh)清除率测定：10ml离心管中依次加入1ml样品溶液，1ml、6mmol/l的feso4溶液，1ml、6mmol/l水杨酸-乙醇溶液和1ml、6mmol/l的h2o2溶液，于37℃水浴30min，然后在510nm处测定吸光值。
邻二氮菲－fe3+法测定抗氧化能力：分别取样品溶液100、200、400、600、800μl于10ml容量瓶中，各自补充蒸馏水至1ml，加入1ml、0.2％氯化高铁溶液，500μl、0.5％邻二氮菲，用60％乙醇定容至10ml，暗处放置20min，在510nm处测定吸光度。
abts+·清除率的测定方法:用20mmol/l、ph为4.5的醋酸缓冲液制备得到7.0mmol/l的abts+·贮液，取5mlabts+·贮液与5ml、2.45mmol/l过硫酸钾混合，室温避光反应12～16h，使用前稀释，使溶液在734nm吸光值在0.700±0.002即可使用，该工作液现配现用。将20μl样品溶液加入180μlabts+·工作液，室温避光反应60min，测吸光值。
实验结果如表9所示：
表9黄芪蒲公英提取物的抗氧化活性作用表
从表9中能够看出，说明黄芪蒲公英根提取物中大量的皂苷类和多糖类成分有关，具有抗氧化活性。同时说明，原料中黄芪蒲公英根的质量比为2:1时，抗氧化作用最强，并明显优于黄芪、蒲公英根提取物单独使用时的预防效果。
具体实施方式十：
一种黄芪蒲公英提取物，所述的一种黄芪蒲公英提取物包括以下结构式的化合物：
蒲公英叶萜a，蒲公英叶萜b，黄芪叶三萜m1，黄芪叶三萜m3，黄芪叶三萜m4。
蒲公英叶萜a的结构式如下所示：
蒲公英叶萜b，的结构式如下所示：
黄芪叶三萜m1的结构式如下所示：
黄芪叶三萜m3的结构式如下所示：
黄芪叶三萜m4的结构式如下所示：
具体实施方式十一：
根据具体实施方式十所述的一种黄芪蒲公英提取物，所述的一种黄芪蒲公英提取物包括以下结构式的化合物：香叶木素，芫花素，对香豆酸，丁香酸，阿魏酸，香草酸，异豆蔻素，二氢猕猴桃内酯，丁香皂苷ⅲ，罗比尼苷b，罗比尼苷f，大豆皂苷b，环芳烃苷a，丁香苷，环黄芪皂醇。
具体实施方式十二：
根据具体实施方式十所述的一种黄芪蒲公英提取物，所述的一种黄芪蒲公英提取物由菊科植物蒲公英属植物的根、豆科植物蒙古黄芪或膜荚黄芪的全草混合，提取后制得。
具体实施方式十三：
根据具体实施方式十所述的一种黄芪蒲公英提取物，黄芪和蒲公英的重量比为1:5、1:1和5:1。
具体实施方式十四：
根据具体实施方式十所述的一种黄芪蒲公英提取物的制备方法，包括如下步骤：
步骤1、按照重量份数分别称量黄芪、蒲公英根，加入粉碎机粉碎后，得到的混合物，待用；
步骤2、按照料液比为1:5～15g/ml将步骤1得到的混合物中加入乙醇溶液，浸渍一定时间后，回流提取2～3次，过滤得到滤渣、滤液，待用；
步骤3、将步骤2得到的滤液浓缩到比重为1.15～1.25g/ml，干燥，得到提取物a；
步骤4、按照料液比为1:5～15g/ml将步骤2得到的滤渣中加入纯化水，索式提取2～3次，然后按照体积比向提取液中加入三氯甲烷和正丁醇的混合溶液，搅拌一定时间后，离心分离，取上清干燥得到提取物b；
步骤5、将步骤3的提取物a、步骤4的提取物b混合均匀，得到所述的一种黄芪蒲公英提取物。
具体实施方式十五：
根据具体实施方式十四所述的一种黄芪蒲公英提取物的制备方法，步骤1中的乙醇溶液的浓度为75～85wt％；步骤2中的回流提取温度为65～75℃，提取时间为1～3h。
具体实施方式十六：
根据具体实施方式十四所述的一种黄芪蒲公英提取物的制备方法，步骤3中的干燥温度为80～100℃；步骤4中的索式提取温度为为95～100℃，提取时间为1～3h，三氯甲烷和正丁醇的体积比为4～5:1，提取液和三氯甲烷和正丁醇的混合溶液的体积比为3～4:1。
具体实施方式十七：
根据具体实施方式十四所述的一种黄芪蒲公英提取物的制备方法，步骤3中离心分离的转速为3000～4000r/min，离心时间3～10min。
具体实施方式十八：
根据具体实施方式十所述的一种黄芪蒲公英提取物的应用，用于预防结肠癌，抗氧化、增强免疫的药物，所述的用于预防结肠癌，抗氧化、增强免疫的药物为口服制剂。
具体实施方式十九：
根据具体实施方式十所述的一种黄芪蒲公英提取物的组合物，所述的一种黄芪蒲公英提取物的组合物包括颗粒剂、散剂、片剂、胶囊剂、口服液、酒剂、露酒。
本发明内容仅仅举例说明了要求保护的一些具体实施方案，其中一个或多个技术方案所记载的技术特征可以与任意的一个或多个技术方案相组合，这些经组合而得到的技术方案也在本申请保护范围内，就像这些经组合而得到的技术方案已经在本发明公开内容中具体记载一样。