1.本发明涉及一种等电点沉淀血红素提取方法。
背景技术：
：：2.血红素(heme)又称铁卟啉，由原卟啉ⅸ与一个铁离子络合而成，广泛存在于动物的血液、肌肉和某些植物组织中，是血红蛋白、肌红蛋白、细胞色素c、过氧化氢酶和过氧化物酶等的辅基。血红素在血液中主要存在于红细胞内，一分子珠蛋白与四分子血红素以非共价键结合。血红素具有重要的生理功能和很高的应用价值，在医药、食品、化工、保健品行业中有广泛应用。在临床上，血红素是目前治疗缺铁性贫血的一种疗效较好的补铁剂，与常用的硫酸亚铁、富马酸铁、葡萄糖酸亚铁等化学补铁剂比较，具有生物利用度高、无体内铁蓄积中毒及胃肠刺激等优点；血红素与edta配合还可用于治疗铅中毒。3.在制药工业中，血红素是制备用于治疗恶性肿瘤的血卟啉类药物和治疗急、慢性迁延性、慢性活动性肝炎的原卟啉钠的原料。在食品行业，血红素是一种天然色素，可替代熟肉制品中危及人体健康的发色剂亚硝酸盐及人工合成色素，减少亚硝酸盐的致癌作用，并能保持肌肉固有的天然色泽。血红素作为一种高效铁源物质，已在饲料生产中开始应用，成为一种新型绿色饲料添加剂。在分析化学上，血红素可用来鉴定铜。目前国内血红素的生产分离提取仍未突破传统的方法，使用大量有机溶剂，不安全环保，得到的血红素油性大，需要蒸馏塔等大型设备，设备投入很大，产品纯度低，产品成本高，应用受到限制。技术实现要素：4.本发明的目的是提供一种等电点沉淀血红素提取方法。5.上述的目的通过以下的技术方案实现：一种等电点沉淀血红素提取方法，该方法包括如下步骤：（1）取抗凝血400ml倒入烧杯静置分离成三层，下层为红细胞层，中层为白细胞血小板层，上层为血浆蛋白层，将白细胞血小板层和血浆蛋白层倒入另一个烧杯，留取红细胞层；（2）冲洗红细胞，手持玻璃棒边搅拌边加入0.9%生理盐水冲洗，然后待红细胞完全沉淀后，观察红细胞上层液体是否浑浊，若完全透明，否则红细胞冲洗完毕，否则继续冲洗，直至红细胞上层液体完全透明为止；（3）将冲洗完成后的红细胞完全沉淀后，将烧杯里的生理盐水到出，手持玻璃棒边加入无菌蒸馏水搅拌至红细胞完全破壁呈均匀浅酱红色为止；（4）手持玻璃棒边加入丙酮边搅拌，待珠蛋白析出后，捞取珠蛋白沉淀放入另一个500ml的烧杯中，反复加入丙酮直至没有白色沉淀为止，剩余的液体为血红素析出液；（5）在血红素析出液中加入5%的氢氧化钠，边加入5%的氢氧化钠，边用ph计搅拌，待ph计显示的ph值达到等电点时，静置析出带有荧光色的紫黑色血红素结晶；（6）将双颈三角烧杯的大颈口装上瓷漏斗，瓷漏斗内放置滤纸，小颈口与高压泵胶管连接，加压抽取烧杯里的结晶的血红素混合液，经过滤纸过滤后，血红素结晶留在滤纸上，收取血红素结晶干燥备用。6.有益效果：本发明采用等电点沉淀法从抗凝血中提取血红素，静置分离血液中的红细胞层后，用丙酮析出红细胞中的珠蛋白，用氢氧化钠试剂使得混合液达到等电点后，沉淀血红素结晶。本发明的等电点沉淀血红素提取方法成本低廉，制备效率高，安全环保，生产工艺简单可控，产品收率高，产品纯度高，具有较好的经济效益和社会效益。7.具体实施方式：实施例1：一种等电点沉淀血红素提取方法，该方法包括如下步骤：（1）取抗凝血400ml倒入烧杯静置分离成三层，下层为红细胞层，中层为白细胞血小板层，上层为血浆蛋白层，将白细胞血小板层和血浆蛋白层倒入另一个烧杯，留取红细胞层；（2）冲洗红细胞，手持玻璃棒边搅拌边加入0.9%生理盐水冲洗，然后待红细胞完全沉淀后，观察红细胞上层液体是否浑浊，若完全透明，否则红细胞冲洗完毕，否则继续冲洗，直至红细胞上层液体完全透明为止；（3）将冲洗完成后的红细胞完全沉淀后，将烧杯里的生理盐水到出，手持玻璃棒边加入无菌蒸馏水搅拌至红细胞完全破壁呈均匀浅酱红色为止；（4）手持玻璃棒边加入丙酮边搅拌，待珠蛋白析出后，捞取珠蛋白沉淀放入另一个500ml的烧杯中，反复加入丙酮直至没有白色沉淀为止，剩余的液体为血红素析出液；（5）在血红素析出液中加入5%的氢氧化钠，边加入5%的氢氧化钠，边用ph计搅拌，待ph计显示的ph值达到等电点时，静置析出带有荧光色的紫黑色血红素结晶；（6）将双颈三角烧杯的大颈口装上瓷漏斗，瓷漏斗内放置滤纸，小颈口与高压泵胶管连接，加压抽取烧杯里的结晶的血红素混合液，经过滤纸过滤后，血红素结晶留在滤纸上，收取血红素结晶干燥备用；等电点沉淀法原理：由于蛋白质表面离子化侧链的存在，蛋白质带净电荷。由于这些侧链都是可以滴定的（titratable），对于每个蛋白都存在一个ph使它的表面净电荷为零即等电点。蛋白质在溶液中有两性电离现象。假设某一溶液中含有一种蛋白质。当pi=ph时该蛋白质极性基团解离的正负离子数相等，净电荷为0，此时的该溶液的是ph值是该蛋白质的pi值。某一蛋白质的pi大小是特定的，与该蛋白质结构有关，而与环境ph无关。8.等电点时，蛋白质分子以两性离子形式存在，其分子净电荷为零(即正负电荷相等)，此时蛋白质分子颗粒在溶液中因没有相同电荷的相互排斥，分子相互之间的作用力减弱，其颗粒极易碰撞、凝聚而产生沉淀，所以蛋白质在等电点时，其溶解度最小，最易形成沉淀物。等电点时的许多物理性质如黏度、膨胀性、渗透压等都变小，从而有利于悬浮液的过滤。在等电点外的所有其他ph值，依据蛋白质所带净电荷采用电泳和离子交换层析来分离和分离纯化该蛋白质。技术特征：1.一种等电点沉淀血红素提取方法，其特征是：该方法包括如下步骤：（1）取抗凝血400ml倒入烧杯静置分离成三层，下层为红细胞层，中层为白细胞血小板层，上层为血浆蛋白层，将白细胞血小板层和血浆蛋白层倒入另一个烧杯，留取红细胞层；（2）冲洗红细胞，手持玻璃棒边搅拌边加入0.9%生理盐水冲洗，然后待红细胞完全沉淀后，观察红细胞上层液体是否浑浊，若完全透明，否则红细胞冲洗完毕，否则继续冲洗，直至红细胞上层液体完全透明为止；（3）将冲洗完成后的红细胞完全沉淀后，将烧杯里的生理盐水到出，手持玻璃棒边加入无菌蒸馏水搅拌至红细胞完全破壁呈均匀浅酱红色为止；（4）手持玻璃棒边加入丙酮边搅拌，待珠蛋白析出后，捞取珠蛋白沉淀放入另一个500ml的烧杯中，反复加入丙酮直至没有白色沉淀为止，剩余的液体为血红素析出液；（5）在血红素析出液中加入5%的氢氧化钠，边加入5%的氢氧化钠，边用ph计搅拌，待ph计显示的ph值达到等电点时，静置析出带有荧光色的紫黑色血红素结晶；（6）将双颈三角烧杯的大颈口装上瓷漏斗，瓷漏斗内放置滤纸，小颈口与高压泵胶管连接，加压抽取烧杯里的结晶的血红素混合液，经过滤纸过滤后，血红素结晶留在滤纸上，收取血红素结晶干燥备用。技术总结等电点沉淀血红素提取方法。目前国内血红素的生产分离提取仍未突破传统的方法，使用大量有机溶剂，不安全环保，得到的血红素油性大，需要蒸馏塔等大型设备，设备投入很大，产品纯度低，产品成本高，应用受到限制。一种等电点沉淀血红素提取方法包括如下步骤：取抗凝血400ml倒入烧杯静置分离成三层，下层为红细胞层，中层为白细胞血小板层，上层为血浆蛋白层，将白细胞血小板层和血浆蛋白层倒入另一个烧杯，留取红细胞层。本发明用于血红素提取。本发明用于血红素提取。技术研发人员：尹志宽受保护的技术使用者：尹志宽技术研发日：2021.10.26技术公布日：2021/12/27