1.本发明涉及药物化学技术领域，尤其涉及一种西罗莫司粗品的制备方法。
背景技术：
2.西罗莫司是一种新型大环内酯类免疫抑制剂,为白色固体结晶，熔点为183-185℃，亲脂性，溶解于甲醇、乙醇、丙酮、氯仿等有机溶剂，极微溶于水，几乎不溶于乙醚。早在20世纪70年代就被研发出来，起初被作为低毒性的抗真菌药物,1977年发现具有免疫抑制作用,1989年开始把西罗莫司作为治疗器官移植的排斥反应的新药进行试用,从动物实验及临床应用的效果看，是一种疗效好，低毒，无肾毒性的新型免疫抑制剂。现在经常作为维持移植器官免疫能力的药物(特别是肾移植)，以减缓器官移植手术后的免疫排斥反应,然而科学家近期发现它另外一种用途：可用于治疗阿尔茨海默症(老年性痴呆)。令他们颇感兴趣的是，西罗莫司的主要成分也存在于复活岛隔离土壤中的细菌产物，最新实验表明该物质施用在实验老鼠患体上可起到恢复识记缺陷能力。
3.西罗莫司通常从发酵液中分离提取得到。由于西罗莫司的生产主要是通过发酵，会存在很多杂质，这对后续提取纯化西罗莫司的工艺稳定性会产生不小的干扰，因此，开发一个可以稳定获得西罗莫司粗品的方法，有利于保证后续纯化工艺的稳定性，以提高产品利用度和用药安全性。
技术实现要素：
4.本发明的目的在于公开一种西罗莫司粗品的制备方法，通过陶瓷膜和硅胶柱层析的结合，步骤上的优化，得到西罗莫司的粗品，西罗莫司含量高，异构体水平低。
5.为实现上述目的，本发明提供了一种西罗莫司粗品的制备方法，包括以下步骤：
6.s1、西罗莫司发酵液通过陶瓷膜浓缩过滤，除去发酵液中的水溶性物质，得到浓缩菌体；
7.s2、浓缩菌体加入溶媒抽提，抽提溶媒为醇类或酮，抽提菌液通过陶瓷膜过滤，收集抽提清液；
8.s3、西罗莫司抽提清液经减压浓缩后，用酯类溶剂萃取，萃取液脱色后得到脱色液；
9.s4、脱色液经柱层析分离后，减压浓缩，加入非极性溶剂结晶，得西罗莫司粗品。
10.进一步地，步骤s1中西罗莫司发酵液通过50～200nm孔径的陶瓷膜浓缩过滤。
11.进一步地，步骤s2中菌体与溶媒的比例为1:2-3，抽提菌液在陶瓷膜内先循环抽提2-4小时后，再开始陶瓷膜过滤。
12.进一步地，步骤s3中的酯类溶剂为乙酸乙酯或乙酸丁酯，西罗莫司浓缩液与酯类溶剂的萃取比例为1:1～2。
13.进一步地，层析柱填料为200-300目硅胶，分离流动相为乙酸乙酯，结晶溶剂为正己烷、环己烷或石油醚。
14.与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明是通过陶瓷膜和硅胶柱层析的结合，步骤上的优化，得到西罗莫司的粗品，西罗莫司含量高，异构体水平低。
具体实施方式
15.下面结合各实施方式对本发明进行详细说明，但应当说明的是，这些实施方式并非对本发明的限制，本领域普通技术人员根据这些实施方式所作的功能、方法、或者结构上的等效变换或替代，均属于本发明的保护范围之内。
16.本发明提供了一种西罗莫司粗品的制备方法，包括以下步骤：
17.s1、西罗莫司发酵液通过陶瓷膜浓缩过滤，除去发酵液中的水溶性物质，得到浓缩菌体；西罗莫司发酵液通过50～200nm孔径的陶瓷膜浓缩过滤。
18.s2、浓缩菌体加入溶媒抽提，抽提溶媒为醇类或酮，抽提菌液通过陶瓷膜过滤，收集抽提清液；菌体与溶媒的比例为1:2-3，抽提菌液在陶瓷膜内先循环抽提2-4小时后，再开始陶瓷膜过滤。
19.s3、西罗莫司抽提清液经减压浓缩后，用酯类溶剂萃取，萃取液脱色后得到脱色液；酯类溶剂为乙酸乙酯或乙酸丁酯，西罗莫司浓缩液与酯类溶剂的萃取比例为1:1～2。
20.s4、脱色液经柱层析分离后，减压浓缩，加入非极性溶剂结晶，得西罗莫司粗品。层析柱填料为200-300目硅胶，分离流动相为乙酸乙酯，结晶溶剂为正己烷、环己烷或石油醚。
21.实施例1
22.西罗莫司发酵液300l，过50nm陶瓷膜，将发酵液体积浓缩至100l后，保持进出口匀速顶洗水至出液澄清，向200l发酵浓缩液中加入100l乙醇，打开循环回流2小时，关闭循环口，打开透析液出口，加入乙醇顶洗浓缩液至出液无单位。抽提液减压浓缩至5l，加入5l乙酸乙酯萃取，加入50g活性炭脱色过滤后，将脱色液浓缩至0.5l，过200目硅胶柱层析，收集液浓缩至成油状液体，加入10l正己烷静置结晶，结晶后过滤干燥得西罗莫司固体粗品42.7g，经检测含量为78.1％。
23.实施例2
24.西罗莫司发酵液300l，过200nm陶瓷膜，将发酵液体积浓缩至100l后，保持进出口匀速顶洗水至出液澄清，向100l发酵浓缩液中加入300l甲醇，打开循环回流4小时，关闭循环口，打开透析液出口，加入甲醇顶洗浓缩液至出液无单位。抽提液减压浓缩至5l，加入5l乙酸乙酯萃取，加入100g活性炭脱色过滤后，将脱色液浓缩至0.5l，过300目硅胶柱层析，收集液浓缩至成油状液体，加入20l环己烷静置结晶，结晶后过滤干燥得西罗莫司固体粗品45.3g，经检测含量为77.3％。
25.实施例3
26.西罗莫司发酵液300l，过200nm陶瓷膜，将发酵液体积浓缩至100l后，保持进出口匀速顶洗水至出液澄清，向100l发酵浓缩液中加入200l丙酮，打开循环回流4小时，关闭循环口，打开透析液出口，加入丙酮顶洗浓缩液至出液无单位。抽提液减压浓缩至5l，加入5l乙酸丁酯萃取，加入100g活性炭脱色过滤后，将脱色液浓缩至0.5l，过300目硅胶柱层析，收集液浓缩至成油状液体，加入20l石油醚静置结晶，结晶后过滤干燥得西罗莫司固体粗品47.6g，经检测含量为76.3％。
27.实施例4
28.西罗莫司发酵液300l，过50nm陶瓷膜，将发酵液体积浓缩至100l后，保持进出口匀速顶洗水至出液澄清，向100l发酵浓缩液中加入300l乙醇，打开循环回流3小时，关闭循环口，打开透析液出口，加入乙醇顶洗浓缩液至出液无单位。抽提液减压浓缩至5l，加入10l乙酸丁酯萃取，加入100g活性炭脱色过滤后，将脱色液浓缩至0.5l，过200目硅胶柱层析，收集液浓缩至成油状液体，加入20l正己烷静置结晶，结晶后过滤干燥得西罗莫司固体粗品44.7g，经检测含量为75.7％。
29.上文所列出的一系列的详细说明仅仅是针对本发明的可行性实施方式的具体说明，它们并非用以限制本发明的保护范围，凡未脱离本发明技艺精神所作的等效实施方式或变更均应包含在本发明的保护范围之内。
30.此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。
技术特征：
1.一种西罗莫司粗品的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：s1、西罗莫司发酵液通过陶瓷膜浓缩过滤，除去发酵液中的水溶性物质，得到浓缩菌体；s2、浓缩菌体加入溶媒抽提，抽提溶媒为醇类或酮，抽提菌液通过陶瓷膜过滤，收集抽提清液；s3、西罗莫司抽提清液经减压浓缩后，用酯类溶剂萃取，萃取液脱色后得到脱色液；s4、脱色液经柱层析分离后，减压浓缩，加入非极性溶剂结晶，得西罗莫司粗品。2.根据权利要求1所述的西罗莫司粗品的制备方法，其特征在于，所述步骤s1中西罗莫司发酵液通过50～200nm孔径的陶瓷膜浓缩过滤。3.根据权利要求2所述的西罗莫司粗品的制备方法，其特征在于，所述步骤s2中菌体与溶媒的比例为1:2-3，所述抽提菌液在陶瓷膜内先循环抽提2-4小时后，再开始陶瓷膜过滤。4.根据权利要求3所述的西罗莫司粗品的制备方法，其特征在于，所述步骤s3中的酯类溶剂为乙酸乙酯或乙酸丁酯，所述西罗莫司浓缩液与酯类溶剂的萃取比例为1:1～2。5.根据权利要求4所述的西罗莫司粗品的制备方法，其特征在于，所述层析柱填料为200-300目硅胶，分离流动相为乙酸乙酯，结晶溶剂为正己烷、环己烷或石油醚。
技术总结
本发明提供了一种西罗莫司粗品的制备方法，包括以下步骤：S1、西罗莫司发酵液通过陶瓷膜浓缩过滤，除去发酵液中的水溶性物质，得到浓缩菌体；S2、浓缩菌体加入溶媒抽提，抽提溶媒为醇类或酮，抽提菌液通过陶瓷膜过滤，收集抽提清液；S3、西罗莫司抽提清液经减压浓缩后，用酯类溶剂萃取，萃取液脱色后得到脱色液；S4、脱色液经柱层析分离后，减压浓缩，加入非极性溶剂结晶，得西罗莫司粗品。本发明所述的西罗莫司粗品的制备方法所制得的西罗莫司粗品，西罗莫司含量高，异构体水平低。异构体水平低。
技术研发人员：游云龙 付静 金丹甜 史佳栋
受保护的技术使用者：无锡福祈制药有限公司
技术研发日：2021.12.27
技术公布日：2022/4/12