本发明涉及pd-l1(程序性死亡配体-1)-特异性抗体和抗pd-l1-car-t细胞,它们对于肿瘤的过继免疫基因治疗领域中是有用的。
背景技术:
1、免疫疗法正在成为一种非常有前途的癌症治疗方法。t细胞或t淋巴细胞是我们免疫系统的武装力量,不断寻找外来抗原并将异常(癌症或经感染细胞)和正常细胞区分开来。利用car(嵌合抗原受体)构建体对t细胞进行基因修饰已成为设计肿瘤特异性t细胞最常见的方法。将靶向肿瘤相关抗原(taa)的car-t细胞输入患者体内(称为过继细胞转移或act)是一种有效的免疫治疗方法[1,2]。与化疗或抗体相比,car-t技术的优点在于经重新编程的工程化t细胞能在患者体内实现增殖和持续存在(“一种活的药物”)[1,3,4]。
2、car通常由在n-末端部分的单克隆抗体来源的单链可变片段(scfv)、铰链、跨膜结构域和若干胞内共刺激结构域:(i)cd28,(ii)cd137(4-1bb)、cd27或其他共刺激结构域,与cd3ζ结构域串联组成(图1)[1,2]。car的演变经历了从第一代(无共刺激结构域)到第二代(有一个共刺激结构域)再到第三代car(有若干个共刺激结构域)。产生具有多个共刺激结构域的car(所谓的第三代car)增强了car-t细胞毒活性,显著改善car-t细胞的持久性,从而增强其抗肿瘤活性。
3、图1示出了car的结构。左侧示出了第一代(无共刺激结构域)的结构,中间示出了第二代(一个共刺激结构域cd28或4-1bb)的结构,以及右侧示出了第三代(两个或若干个共刺激结构域)。该图来自于golubovskaya,wu,cancers,2016[5]。
4、pd-l1,也称为分化簇274、cd274或b7同源物1、b7-h1,是一种40kda的跨膜蛋白,在疾病或其他事件期间在抑制免疫系统中起重要作用。pd-l1结构域与pd-1蛋白的结合阻断了负责免疫防御的cd8+t细胞的增殖和活性。pd-l1/pd-1的相互作用在体内,特别是在肿瘤微环境中于抑制t细胞响应中起主导作用。
5、若干类型的癌症会过表达pd-l1。在临床试验中测试了抗pd-l1单克隆抗体(mabs)和抗pd-1mabs免疫疗法[3]。pd-l1在正常组织的细胞表面通常不表达,但在许多肿瘤组织中表达升高。此外,pd-l1表达通过免疫细胞,主要通过其的产生ifn-γ而被显著上调。
6、美国食品药品监督管理局(fda)于2017年加速批准阿维鲁单抗(avelumab)用于治疗患有转移性默克尔细胞瘤的成人和12岁及以上儿童患者。阿维鲁单抗是一种阻断pd-l1的人igg1λ单克隆抗体。
7、需要一种具有高特异性和活性的抗pd-l1抗体。
技术实现思路
1.一种单克隆抗人pd-l1抗体或其抗原结合片段,包括:具有seq id no:3所示氨基酸的vh和具有seq id no:5所示氨基酸的vl,其中所述抗体结合至人pd-l1蛋白。
2.一种单链可变片段(scfv),包括:具有seq id no:3所示氨基酸的vh和具有seq idno:5所示氨基酸的vl,其中所述scfv结合至人pd-l1蛋白。
3.根据权利要求2所述的scfv,进一步包括位于vh与vl之间的接头。
4.根据权利要求2所述的scfv,其具有seq id no:9所示氨基酸序列。
5.一种嵌合抗原受体融合蛋白(car),所述嵌合抗原受体融合蛋白自n-末端到c-末端包括:
6.根据权利要求5所述的car,其中,所述scfv进一步包括位于vh与vl之间的接头。
7.根据权利要求5所述的car,其中,所述共刺激结构域是cd28或4-1bb。
8.根据权利要求5所述的car,其中,所述激活结构域是cd3ζ。
9.根据权利要求5所述的car,其具有seq id no:20或seq id no:24所示氨基酸序列。
10.一种编码权利要求5所述的car的核酸。
11.经修饰以表达权利要求5所述的car的t细胞或自然杀伤细胞。