ABCG2外排泵-癌症抗原多特异性抗体及其相关组合物、试剂、试剂盒和方法与流程

背景技术：

1、耐药性为一种众所周知的疾病对药物治疗耐受的现象，也是包括肿瘤学在内的各医学领域所面临的一项日益严峻的重大挑战。虽然许多类型的癌症期初对化疗敏感，但随着时间的推移，某些机制(包括通过dna突变、促进药物抑制、降解和增强外排的代谢变化)都可能产生耐药性。

2、外排泵(ep)是由各种活细胞表达的蛋白质，并且已经完成进化，可以细胞自然外排各种化合物。atp结合盒(abc)转运蛋白家族蛋白质的成员为药物外排的ep实例。尽管转运蛋白结构因蛋白质而异(例如，人类abc家族有49个已知成员)，其均依照按两个不同结构域(即高度保守的核苷酸结合结构域和更可变的跨膜结构域)的存在进行分类。由atp结合盒亚家族b成员1(abcb1)基因编码的多药耐药蛋白1(abcg2)为其中首个被鉴定出的转运蛋白，该转运蛋白已得到了广泛的研究。abcg2表达在进行某些化疗后呈上升趋势。

3、ep导致肿瘤对化学治疗剂产生耐药性。这种耐药性通常与化学治疗剂从耐药性细胞的外排增强相关。如果这种化疗耐药性适用于一种以上化学治疗剂，则被称为多药耐药性(mdr)。

4、在癌症患者中，通过化疗，转移性癌细胞群已基本被杀死并从患者体内清除，耐药性癌细胞群出现和扩散而对早期疗法的重新治疗没有反应，这种情况并不少见。在大多数情况下，在再次出现新的耐药细胞和/或肿瘤之前，会使用具有不同作用机制的不同药物。

5、因此，有必要研发用于测定抑制ep的试剂。

技术实现思路

1、本发明提供了可作为多特异性抗体的抗abcg2抗体，所述多特异性抗体可同时靶向abcg2和肿瘤相关抗原(taa)，还提供了包含或编码所述多特异性抗体的药物组合物、核酸、重组表达载体、细胞和试剂盒。所述多特异性抗体包括包含abcg2抗原结合位点的共同可变轻(vl)链、包含abcg2抗原结合位点的第一可变重(vh)链、以及包含taa抗原结合位点的第二vh链或包含abcg2抗原结合位点的第一vh链和第一vl链，以及包含taa抗原结合位点的第二vh链和第二vl链。本发明还提供了治疗癌症受试者的方法，所述方法包括向受试者施用靶向abcg2和taa的多特异性抗体。治疗可能涉及单独施用多特异性抗体，或多特异性抗体和化学治疗剂联合施用。本发明还提供了产生所述多特异性抗体以及与其相关的试剂的方法，包括在主题方法中有用的经基因修饰的细胞系以及制备此类经基因修饰的细胞系的方法。

2、本文提供的双特异性抗体与表达abcg2和taa的癌细胞结合，同时显示与表达abcg2和/或taa的非癌细胞的结合减少。换言之，本文提供的双特异性抗体以低亲和力与(1)低表达或不表达abcg2的表达taa的细胞结合；以及(2)低表达或不表达taa的表达abcg2的细胞结合，并且以高低亲和力与以较高水平(即高于正常细胞的水平)表达至少一种或两种abcg2和taa的癌细胞结合。

技术特征：

1.一种结合atp结合盒亚家族g成员2(abcg2)和肿瘤相关抗原(taa)的双特异性抗体分子，所述抗体分子包括两条相同的可变轻链(vl)、一条第一可变重链(vh)和一条第二vh链，

2.根据权利要求1所述的双特异性抗体分子，其中所述两条vl链的所述抗原结合位点包括具有如下序列的vl链的轻链cdr 1-3(lcdr 1-3)：

3.根据权利要求2所述的双特异性抗体分子，其中所述两条vl链包含lcdr 1-3，其中lcdr1包含序列kasgyilnrla(seq id no：2)；lcdr2包含序列gatslet(seq id no:3)，并且lcdr3包含序列qqywstpwt(seq id no：4)。

4.根据权利要求1至3中任何一项所述的双特异性抗体分子，其中所述两条vl链包含与下述序列至少90％、至少95％或至少99％相同的序列或氨基酸序列：

5.根据前述任何一项权利要求所述的双特异性抗体分子，其中所述第一vh链的所述抗原结合位点包括具有如下序列的vh链的重链cdr 1-3(hcdr 1-3)：

6.根据权利要求1-4中任何一项所述的双特异性抗体分子，其中第一vh链的所述抗原结合位点包括重链cdr 1-3(hcdr 1-3)，其中：

7.根据权利要求1至6中任何一项所述的双特异性抗体分子，其中所述第一vh链包括所述氨基酸序列或与所述至少90％、至少95％或至少99％的所述氨基酸序列相同的氨基酸序列：

8.根据前述任何一项权利要求所述的双特异性抗体分子，其中所述第一和/或第二vh链被人源化和/或vl链被人源化。

9.根据前述任何一项权利要求所述的双特异性抗体分子，其中所述第二vh链源自与taa结合的单特异性抗体分子，并且双特异性抗体分子对taa的亲和力比vh链与其中一条轻链配对时，亲和力比源自vh链条的单特异性抗体分子对taa的亲和力至少低2倍。

10.根据前述任何一项权利要求所述的双特异性抗体分子，其中所述taa为cd47。

11.根据权利要求10所述的双特异性抗体分子，其中所述第二vh链的所述抗原结合位点包括包含如下氨基酸序列的vh链的hcdr 1-3：

12.根据权利要求1至11中任何一项所述的双特异性抗体分子，其中所述第二vh链包括包含如下序列的hcdr1：nynmh(seq id no:9)，所述hcdr2包括序列：

13.根据权利要求1至12中任何一项所述的双特异性抗体分子，其中所述第二vh链包括所述氨基酸序列或与至少90％、至少95％或至少99％的所述氨基酸序列相同的氨基酸序列：

14.根据权利要求1-9中任何一项所述的双特异性抗体分子，其中所述taa为受体酪氨酸-蛋白激酶erbb-1。

15.根据权利要求14所述的双特异性抗体分子，其中所述第二vh链的所述抗原结合位点包括包含如下氨基酸序列的vh链的hcdr 1-3：

16.根据权利要求14所述的双特异性抗体分子，其中所述第二vh链的所述抗原结合位点包括包含如下序列的hcdr1：sgdyyws(seq id no:19)；所述hcdr2包括序列：yiyysgstdynpslks(seq id no:20)，并且所述hcdr3包括序列：

17.根据权利要求14至16中任何一项所述的双特异性抗体分子，其中所述第二vh链包括所述氨基酸序列或与至少90％、至少95％或至少99％的所述氨基酸序列相同的氨基酸序列：

18.根据权利要求1-9中任何一项所述的双特异性抗体分子，其中所述taa为受体酪氨酸-蛋白激酶erbb-2。

19.根据权利要求18所述的双特异性抗体分子，其中所述第二vh链的所述抗原结合位点包括包含所述氨基酸序列的vh链的hcdr 1-3：

20.根据权利要求18所述的双特异性抗体分子，其中所述第二vh链的所述抗原结合位点包括包含如下序列的hcdr1：dytmd(seq id no:13)；所述hcdr2包括序列：dvnpnsggsiynqrfkg(seq id no:14)；并且所述hcdr3包括序列：

21.根据权利要求18至20中任何一项所述的双特异性抗体分子，其中所述第二vh链包括所述氨基酸序列或与至少90％、至少95％或至少99％的所述氨基酸序列相同的氨基酸序列：

22.根据权利要求1-9中任何一项所述的双特异性抗体分子，其中所述taa为程序性细胞死亡配体1(pd-l1)。

23.根据权利要求22所述的双特异性抗体分子，其中所述第二vh链的所述抗原结合位点包括包含所述氨基酸序列的vh链的hcdr 1-3：

24.根据权利要求22所述的双特异性抗体分子，其中所述第二vh链的所述抗原结合位点包括包含如下序列的hcdr1：dswih(seq id no:28)；所述hcdr2包括序列：wispyggstyyadsvkg(seq id no:29)；并且所述hcdr3包括序列：rhwpggfdy(seq id no:30)。

25.根据权利要求22-24中任何一项所述的双特异性抗体分子，其中所述第二vh链包括所述氨基酸序列或与至少90％、至少95％或至少99％的所述氨基酸序列相同的氨基酸序列：

26.根据前述任何一项权利要求所述的双特异性抗体分子，其中所述双特异性抗体分子包括已被修饰以减少或消除抗体与一种或多种fcγ受体结合的fc结构域。

27.根据前述任何一项权利要求所述的双特异性抗体分子，在治疗受试者癌症的方法中的用途，所述方法包括向受试者施用抗体。

28.根据权利要求26所述的双特异性抗体分子的用途，其中所述方法包括将抗体与至少一种附加活性剂联合使用，其中所述至少一种附加活性剂包括化学治疗剂、多药耐药转运体的抑制剂、免疫治疗剂或其组合。

29.根据权利要求27所述的双特异性抗体分子的用途，其中所述至少一种附加活性剂是化学治疗剂，可选地，其中所述化学治疗剂是紫杉烷、长春花生物碱、蒽环类抗生素、依托泊苷、米托蒽醌，或甲氨蝶呤。

30.一种用于治疗癌症的方法中使用的化学治疗剂，所述方法包括将化学治疗剂与权利要求1至26中任何一项所述的抗体联合施用于受试者，任选地，其中所述化学治疗剂是紫杉烷、长春花生物碱，或蒽环类抗生素。

31.根据权利要求27-29所述的双特异性抗体分子的用途，其中接受治疗的受试者患有已确定患有化学治疗剂具有耐药性的癌症。

32.一种治疗受试者癌症的方法，所述方法包括向受试者施用权利要求1至26中任何一项所述的治疗有效量的双特异性抗体分子。

33.根据权利要求32所述的方法，其中所述方法包括将双特异性抗体分子与至少一种附加活性剂联合使用，其中所述至少一种附加活性剂包括化学治疗剂、多药耐药转运体的抑制剂、免疫治疗剂或其组合。

34.根据权利要求33所述的方法，其中所述至少一种附加活性剂是化学治疗剂，可选地，其中所述化学治疗剂是紫杉烷、长春花生物碱、蒽环类抗生素、依托泊苷、米托蒽醌，或甲氨蝶呤。

35.根据权利要求33所述的方法，其中接受治疗的受试者患有已确定对化学治疗剂具有耐药性的癌症。

36.一种药物组合物，包括:

37.根据权利要求36所述的药物组合物，进一步包括至少一种附加活性剂。

38.根据权利要求37所述的药物组合物，其中所述至少一种附加活性剂包括化学治疗剂。

39.根据权利要求38所述的药物组合物，其中所述化学治疗剂为紫杉烷、长春花生物碱、蒽环类抗生素、依托泊苷、米托蒽醌，或甲氨蝶呤。

40.根据权利要求37至39中任何一项所述的药物组合物，其中所述至少一种附加活性剂包括多药耐药转运体的抑制剂。

41.根据权利要求40所述的药物组合物，其中所述至少一种附加活性剂包括免疫治疗剂。

42.一种或多种核酸，其包含编码根据前述任何一项权利要求所述抗体的一个或多个序列。

43.根据权利要求42所述的一种或多种核酸，其中所述一种或多种序列可操作地连接一个启动子。

44.根据权利要求42或43所述的包含一种或多种核酸的一种或多种重组表达载体。

45.权利要求44所述的一种或多种重组表达载体进行基因修饰的一种哺乳动物细胞。

46.根据权利要求45所述的细胞，其中所述细胞为免疫细胞。

47.一种试剂盒，包括：

48.根据权利要求47所述的试剂盒，其中所述至少一种附加活性剂包括化学治疗剂、多药耐药转运体的抑制剂、免疫治疗剂或其组合。

49.一种杀死癌细胞的方法，其中所述方法包括使癌细胞与权利要求1至26中任何一项抗体接触。

50.根据权利要求49所述的方法，包括施用至少一种附加活性剂。

51.根据权利要求50所述的方法，其中所述至少一种附加活性剂包括化学治疗剂。

52.根据权利要求50或51所述的方法，与单独接触所述至少一种附加活性剂相比，其中所述方法使癌细胞的杀伤增加至少5％。

53.根据权利要求49至52中任何一项所述的方法，其中所述癌细胞为耐药性癌细胞。

54.一种治疗受试者癌症的方法，所述方法包括向受试者施用权利要求1至26中任何一项所述的抗体或权力要求35-41中任何一项所述的药物组合物。

55.根据权利要求54所述的方法，其中所述受试者先前已接受过癌症治疗。

56.根据权利要求54或55所述的方法，其中所述癌症为耐药癌症或多药耐药癌症。

57.根据权利要求56所述的方法，其中所述癌症对化学治疗剂具有耐药性。

58.根据权利要求56所述的方法，其中所述癌症对免疫治疗剂具有耐药性。

59.根据权利要求54至56中任何一项所述的方法，其中癌症对多药耐药转运体的抑制剂具有耐药性。

60.根据权利要求54至59中任何一项所述的方法，进一步包括向受试者施用至少一种附加活性剂。

61.根据权利要求60所述的方法，其中所述至少一种附加活性剂包括化学治疗剂。

62.根据权利要求61所述的方法，其中所述化学治疗剂为紫杉烷、长春花生物碱、蒽环类抗生素、依托泊苷、米托蒽醌，或甲氨蝶呤。

63.根据权利要求60至62中任何一项所述的方法，其中所述至少一种附加活性剂包括多药耐药转运体的抑制剂。

64.根据权利要求60至62中任何一项所述的方法，其中所述至少一种附加活性剂包括免疫治疗剂。

65.根据权利要求60至62中任何一项所述的方法，与单独使用所述至少一种附加活性剂进行治疗相比，其中所述方法增加了所述至少一种附加活性的有效性。

66.根据权利要求65所述的方法，其中所述增加的有效性包括对癌细胞的杀伤至少增加了5％。

67.根据权利要求54至66中任何一项所述的方法，进一步包括分析癌症样品，以确定癌症对abcg2的表达是否高于预定阈值、对癌症相关抗原(taa)表达是否高于预定阈值，或两者，其中可选地，taa包括cd47、erbb1、erbb2或pd-l1。

68.根据权利要求67所述的方法，其中所述预定阈值对应于由参考细胞表达的abcg2和/或taa水平。

69.根据权利要求68所述的方法，其中abcg2和/或taa在参考细胞中已被敲除或敲低。

70.根据权利要求68或69所述的方法，其中所述参考细胞为非癌细胞。

71.根据权利要求68所述的方法，其中所述非癌细胞表达abcg2和/或taa的正常水平。

72.根据权力要求54至71中任何一项所述的方法，其中如果癌症以预定阈值或高于预定阈值表达abcg2和taa，则可以向受试者施用所述多特异性抗体；并且如果癌症以低于预定阈值表达taa和abcg2或taa，则可以不施用所述多特异性抗体对受试者进行治疗。

73.一种结合atp结合盒亚家族g成员2(abcg2)和肿瘤相关抗原(taa)的双特异性抗体分子，其中所述抗体分子包括：

技术总结
本发明提供了可同时靶向细胞外排泵ABCG2和癌症相关抗原的多特异性抗体，还提供了包含或编码所述多特异性抗体的药物组合物、核酸、重组表达载体、细胞和试剂盒。本发明还提供了治疗癌症受试者的方法，所述方法包括向受试者施用同时靶向细胞外排泵和癌症相关抗的多特异性抗体。本发明还提供了产生所述多特异性抗体以及与其相关的试剂的方法，包括在主题方法中有用的经基因修饰的细胞系以及制备此类经基因修饰的细胞系的方法。

技术研发人员：W·R·阿拉松,R·布莱恩特,S·莫汉蒂,P·D·波那斯,翟倩婷
受保护的技术使用者：肯乔克蒂生物技术股份有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/14