含有表达安第斯病毒(ANDV)蛋白的修饰的BCG菌株的、可用于预防和治疗汉坦-安第斯病毒感染的免疫原性制剂

报告了一种用于制备针对安第斯病毒(andesvirus)(andv)的疫苗的免疫原性制剂，其中该制剂包括至少一种减毒的牛分枝杆菌(mycobacterium bovis)卡介菌(bacilluscalmette-guérin，bcg)菌株，其重组地表达一种或多种andv的蛋白或免疫原性片段。

背景技术：

1、汉坦病毒是人类两种疾病的病原因子：肾综合征出血热(hfrs)和汉坦病毒心肺综合征(hcps)。这些分布在世界各地的病毒被归类为导致hfrs的旧世界汉坦病毒，在欧洲和亚洲的主要物种：汉坦病毒(htnv)和汉城病毒(seoul virus)(seov)等。另一方面，新世界的汉坦病毒造成hcps并且包括36个物种，它们其中：分布在美洲的安第斯病毒(andv)、辛诺柏病毒(sin nombre)(snv)和埃可(choclo)病毒(chov)。

2、物种andv是美洲特有的，与其他汉坦病毒相比具有高毒力，到目前为止，它是唯一能够在人与人之间传播的物种。值得一提的是，针对旧世界汉坦病毒物种的疫苗开发处于领先地位，然而，这些疫苗并不能针对新世界物种提供保护。

3、andv是一种反义或负链rna病毒，在其基因组中包括编码核衣壳蛋白(n)的小片段(s)，编码源自糖蛋白gn和gc的前体糖蛋白的中片段(m)，以及编码rna依赖性聚合酶的大片段(l)。

4、目前，还没有能够在宿主中产生针对andv感染的免疫记忆的预防性治疗。

5、在技术现状中，我们发现了一些公开或保护针对andv的疫苗的文件，其中为wo2019178286a1、cl201802306和cl201101085，其中所有这些文件都使用andv的包膜糖蛋白gn和gc作为免疫原性颗粒。这些蛋白是最明显的疫苗靶标，因为在衣壳中被认为更容易被宿主的免疫系统识别。另一方面，d.m.custer et al.(journal of virology,2003,vol.77,no 18,p.9894-9905)披露了包括andv的基因组片段m的dna疫苗，如前所述，它也编码gn和gc。虽然这种策略很有前途，但迄今为止，还没有关于在人类宿主中接种外源dna的立法或卫生许可。

6、鉴于这种情况，本发明人开发了一种新的疫苗，其策略与其他团体开发的疫苗不同，它主要基于andv的n蛋白，而不是gn和gc，并且其使用牛分枝杆菌卡介菌(bcg)的减毒菌株作为载体，卡介菌在100多年来已经被证明可以安全用于新生儿，并且已知可以作为佐剂并诱导赋予长期免疫力的应答。令人惊讶的是，本发明人表明，通过使用病毒的核衣壳蛋白(n)，产生免疫力，从而允许控制andv的感染。

技术实现思路

技术特征：

1.针对汉坦病毒和/或汉坦病毒心肺综合征(hcps)的发展赋予保护的免疫原性制剂，其特征在于，它包括在药学上可接受的盐缓冲溶液中的每剂的量为104-109个cfu之间的分枝杆菌属(mycobacterium)卡介菌(bcg)的减毒重组菌株，其表达病毒安第斯病毒(andv)的至少一种蛋白或免疫原性片段。

2.根据权利要求1所述的免疫原性制剂，其特征在于，所述病毒安第斯病毒的蛋白或免疫原性片段对应于andv的n蛋白或其免疫原性片段。

3.根据权利要求2所述的免疫原性制剂，其特征在于，所述病毒安第斯病毒的蛋白或免疫原性片段对应于与seq id no:1的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列。

4.根据权利要求3所述的免疫原性制剂，其特征在于，所述病毒安第斯病毒的免疫原性蛋白或片段与seq id no:1的序列具有至少95％同一性。

5.根据权利要求2所述的免疫原性制剂，其特征在于，编码andv的n蛋白或其免疫原性片段的基因以一个或多个拷贝插入分枝杆菌属bcg的基因组中或染色体外质粒中。

6.根据权利要求5所述的免疫原性制剂，其特征在于，编码andv的n蛋白或其免疫原性片段的基因对应于与seq id no:2具有至少75％同一性的核苷酸序列。

7.根据权利要求6所述的免疫原性制剂，其特征在于，编码andv的n蛋白或其免疫原性片段的基因对应于与seq id no:2具有至少95％同一性的核苷酸序列。

8.根据权利要求7所述的免疫原性制剂，其特征在于，基因的表达由分枝杆菌属bcg的内源性或外源性启动子控制，所述启动子为组成型或诱导型。

9.根据权利要求8所述的免疫原性制剂，其特征在于，andv的n蛋白或其免疫原性片段能够以可溶性胞质方式由bcg表达，分泌至细胞外或作为结合至细胞膜的蛋白。

10.根据权利要求1所述的免疫原性制剂，其特征在于，所述免疫原性制剂通过冷冻、冻干或盐缓冲液和赋形剂稳定，用于使用前保存。

11.根据权利要求9所述的免疫原性制剂，其特征在于，所述免疫原性制剂通过冷冻、冻干或盐缓冲液和赋形剂稳定，用于使用前保存。

12.根据权利要求1所述的免疫原性制剂，其特征在于，所述减毒重组菌株为bcgdanish或bcg pasteur。

13.根据前述权利要求中任一项所述的免疫原性制剂的用途，其特征在于，它用于制备疫苗以预防、治疗或减弱andv感染和/或汉坦病毒心肺综合征(hcps)的发展，其中，所述制剂含有用生理上可接受的盐溶液稳定的1x104-1x109个菌落形成单位之间的分枝杆菌属bcg重组减毒菌株。

14.根据权利要求13所述的用途，其特征在于，它用于制备疫苗以预防、治疗或减弱andv的感染和/或汉坦病毒心肺综合征(hcps)的发展，以在生理上可接受的盐溶液中以皮下、经皮或真皮下给药。

技术总结
本发明涉及一种免疫原性制剂，所述免疫原性制剂在药学上可接受的盐缓冲溶液中以104‑109之间的细菌浓度含有卡介菌(BCG)菌株，该菌株表达安第斯病毒(ANDV)的至少一种蛋白或免疫原性片段，其用于制备可用于预防、治疗或减弱ANDV感染的疫苗。ANDV属于汉坦病毒家族，并且是高毒性人类病原体，其每年在智利影响数十人，在一些感染者中引起汉坦病毒心肺综合征(HCPS)。

技术研发人员：亚历克西斯·卡莱伊斯·帕拉,苏珊·布埃诺·拉米雷斯,巴勃罗·冈萨雷斯·穆尼奥斯
受保护的技术使用者：智利天主教教皇大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/14