免疫细胞因子及其用途的制作方法

发明领域本发明涉及免疫细胞因子、其制备方法和用途，所述免疫细胞因子包含细胞因子或其变体，所述细胞因子或其变体位于抗体(例如，全长抗体)的重链铰的链区，或位于抗原结合片段(例如，配体、受体或抗体片段)和fc结构域亚基或其部分之间的铰链区。

背景技术：

0、发明背景

1、细胞因子是先天性和适应性免疫系统的关键调节剂，使免疫细胞能够相互交流。激活癌症患者免疫系统的细胞因子疗法仍然是临床癌症研究的一个重要目标领域。细胞因子单一疗法的一个重大挑战是在不引起治疗限制性毒性的情况下实现有效的抗肿瘤反应。il-2和il-12疗法的低反应率和臭名昭著的毒性很好地说明了这种困境。已发现高剂量的il-2会诱发血管渗漏综合征(vls)、由激活诱导的细胞死亡(aicd)引起的肿瘤耐受，以及由调节性t细胞(treg)的激活引起的免疫抑制。这些严重的副作用通常限制最佳il-2剂量，这限制了成功响应治疗的患者数量。il-12在临床试验中表现出适度的抗肿瘤反应，但通常伴随着重大的毒性问题(lasek et al.,cancer immunol immunother.,2014)。已发现il-12治疗与全身性流感样症状(例如发烧、发冷、疲劳、红斑性肢痛和头痛)以及对骨髓和肝脏的毒性作用有关。剂量研究表明，患者只能耐受低于1μg/kg的il-12，远低于治疗有效剂量。无论是作为单一疗法还是与其他药剂联合使用，il-12都未能在临床试验中证明有效的持续治疗效果(lasek et al.,2014)。

2、已经采取了几种方法来克服细胞因子单一疗法的问题。最近，nktr-214，一种与聚乙二醇(peg；“il-2-peg”)缀合的重组人il-2，已在动物模型中显示出有希望的结果。il-2-peg提供两个好处。首先，peg的空间位阻掩盖了il-2上与il-2受体α(il-2rα)亚基相互作用的区域，该亚基负责激活免疫抑制性treg，并偏向肿瘤杀伤cd8+t细胞的活性(charych etal.,clin cancer res.,2016)。其次，peg的缀合大大提高了血浆半衰期和蛋白水解稳定性，并降低了免疫原性和肝脏摄取(chaffee et al.,j clin invest.,1992；pyatak etal.,res commun chem pathol pharmacol.,1980)。还开发了通过局部注射或使用免疫细胞因子(与抗体、抗体片段或配体/受体-fc融合蛋白融合的细胞因子)将细胞因子(例如，il-12)靶向递送至肿瘤部位，以克服细胞因子治疗的副作用。免疫细胞因子可以将细胞因子靶向目标细胞或组织，如肿瘤细胞或免疫效应细胞(klein et al.,oncoimmunology,2017；king et al.,j clin oncol.,2004)。

3、本文提及的所有出版物、专利、专利申请和公开的专利申请的公开内容均通过引用整体并入本文。

技术实现思路

0、发明概述

1、本技术的一个方面提供了一种免疫细胞因子，其包含：a)特异性识别靶抗原的抗原结合蛋白(例如，抗体或配体/受体-fc融合蛋白)；和b)细胞因子或其变体，所述抗原结合蛋白包含抗原结合多肽(例如，重链或配体/受体-fc融合多肽)，所述抗原结合多肽从n端至c端包含：抗原结合片段(例如，抗体片段、配体或受体)、铰链区和fc结构域亚基或其部分，并且所述细胞因子或其变体位于铰链区(例如，其n-末端、c-末端，或之内)。

2、在根据上述任何一种免疫细胞因子的一些实施方案中，与不存在所述抗原结合蛋白与所述靶抗原结合的情况相比，在存在所述抗原结合蛋白(例如，抗体或配体/受体-fc融合蛋白)与所述靶抗原结合的情况下，所述细胞因子或其变体的活性增加至少约20％(如至少约30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、200％、300％、400％、500％或更多中的任一个)。

3、在根据上述任何一种免疫细胞因子的一些实施方案中，在不存在所述抗原结合蛋白(例如，抗体或配体/受体-fc融合蛋白)与所述靶抗原结合的情况下，位于所述铰链区的细胞因子或其变体的活性不超过相应细胞因子或其变体在游离状态下的活性的约70％(如不超过约60％、50％、40％、30％、20％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％、0.9％、0.8％、0.7％、0.6％、0.5％、0.4％、0.3％、0.2％、0.1％或0％中的任一个)。

4、在根据上述任何一种免疫细胞因子的一些实施方案中，所述细胞因子或其变体是细胞因子变体，并且所述细胞因子变体在游离状态下的活性不超过相应野生型细胞因子在游离状态下的活性的约80％(如不超过约70％、60％、50％、40％、30％、20％、10％或5％中的任一个)。

5、在根据上述任何一种免疫细胞因子的一些实施方案中，所述抗原结合蛋白(例如，抗体或配体/受体-fc融合蛋白)包含两个抗原结合多肽(例如，重链或配体/受体-fc融合多肽)，每个所述抗原结合多肽包含铰链区，并且仅一个抗原结合多肽包含位于所述铰链区的细胞因子或其变体。在一些实施方案中，所述抗原结合蛋白包含两个抗原结合多肽，每个所述抗原结合多肽包含铰链区，并且每个抗原结合多肽包含位于所述铰链区的细胞因子或其变体。

6、在根据上述任何一种免疫细胞因子的一些实施方案中，所述免疫细胞因子包含两个或更多个(例如，2个、3个、4个或更多个)细胞因子或其变体，并且两个或更多个细胞因子或其变体以串联位于所述抗原结合多肽(例如，重链或配体/受体-fc融合多肽)的铰链区。

7、在根据上述任何一种免疫细胞因子的一些实施方案中，所述细胞因子或其变体是单体细胞因子或其变体(例如，il-2、ifn-α如ifn-α2b)。在一些实施方案中，所述细胞因子或其变体是二聚细胞因子或其变体(例如，ifn-γ、il-10、il-12或il-23)。在一些实施方案中，二聚细胞因子或其变体的两个亚基以串联位于所述抗原结合多肽(例如，重链或配体/受体-fc融合多肽)的铰链区。在一些实施方案中，所述抗原结合蛋白包含两个抗原结合多肽，每个所述抗原结合多肽包含铰链区，并且所述二聚细胞因子或其变体的一个亚基位于一个抗原结合多肽的铰链区，并且所述二聚体细胞因子或其变体的另一个亚基位于另一个抗原结合多肽的铰链区。

8、在根据上述任何一种免疫细胞因子的一些实施方案中，两个或更多个(例如，2、3、4个或更多个)细胞因子或其变体是相同的。在一些实施方案中，两个或更多个(例如，2、3、4个或更多个)细胞因子或其变体是不同的。

9、在根据上述任何一种免疫细胞因子的一些实施方案中，所述抗原结合蛋白是单特异性抗原结合蛋白(例如，单特异性抗体或配体/受体-fc融合蛋白)。在一些实施方案中，所述抗原结合蛋白是多特异性抗原结合蛋白(例如，多特异性抗体或配体/受体-fc融合蛋白)。

10、在根据上述任何一种免疫细胞因子的一些实施方案中，所述靶抗原选自下组：tigit、pd-1、pd-l1、pd-l2、ctla-4、cd3、cd4、cd8、cd123、cd25和her2。

11、在根据上述任何一种免疫细胞因子的一些实施方案中，所述细胞因子或其变体选自下组：il-1、il-2、il-3、il-4、il-5、il-6、il-7、il-8、il-9、il-10、il-12、il-15、il-17、il-18、il-21、il-22、il-23、il-27、il-35、ifn-α、ifn-β、ifn-γ、tnf-α、tgf-β、vegf、促红细胞生成素、血小板生成素、g-csf、m-csf、scf和gm-csf。在一些实施方案中，所述细胞因子或其变体选自下组：il-2、il-10、il-12、il-23、ifn-α和ifn-γ。在一些实施方案中，所述细胞因子或其变体是il-2或其变体。在一些实施方案中，相对于包含seq id no:1序列的野生型il-2，所述il-2变体在选自下组的位置包含一个或多个突变：l18、q22、f24、k35、r38、f42、k43、e61、p65、q126和s130。在一些实施方案中，相对于包含seq id no:1序列的野生型il-2，所述il-2变体包含选自下组的一个或多个突变：l18r、q22e、f24a、r38d、k43e、e61r、p65l、q126t和s130r。在一些实施方案中，相对于包含seq id no:1序列的野生型il-2，所述il-2变体包含r38d/k43e/e61r突变、l18r/q22e/r38d/k43e/e61r突变、r38d/k43e/e61r/q126t突变、l18r/q22e/r38d/k43e/e61r/q126t突变，或l18r/q22e/r38d/k43e/e61r/q126t/s130r突变。在一些实施方案中，所述il-2变体包含seq id no:2和seq id no:251-254中任一个的序列。在一些实施方案中，所述细胞因子或其变体是ifn-α或其变体。在一些实施方案中，相对于包含seq id no:3序列的ifn-α，所述ifn-α变体在选自下组的位置包含一个或多个突变：r22、l26、f27、l30、k31、d32、r33、h34、d35、f36、s68、t79、k83、y85、y89、r120、k121、y122、q124、y129、k131、e132、r144和e146。在一些实施方案中，相对于包含seqid no:3序列的ifn-α，所述ifn-α变体包含选自下组的一个或多个突变：l30a、k31a、d32a、r33a、h34a和d35a的突变。在一些实施方案中，所述ifn-α变体包含seq id no:4-9中任一个的序列。在一些实施方案中，相对于包含seq id no:3序列的ifn-α，所述ifn-α变体包含l30a突变。在一些实施方案中，所述ifn-α变体包含seq id no:4的序列。在一些实施方案中，所述细胞因子或其变体是ifn-γ或其变体。在一些实施方案中，相对于包含seq id no:10序列的野生型ifn-γ亚基，所述ifn-γ变体在一个或两个ifn-γ亚基内在选自下组的位置包含一个或多个突变：v5、s20、d21、v22、a23、d24、n25、g26、h111和q115。在一些实施方案中，相对于包含seq id no:10序列的野生型ifn-γ亚基，所述ifn-γ变体在一个或两个ifn-γ亚基内包含选自下组的一个或多个突变：s20a、d21a、d21k、v22a、a23s、a23e、a23q、a23v、d24a、d24e、n25a、n25k和h111d。在一些实施方案中，相对于包含seq id no:10序列的野生型ifn-γ亚基，所述ifn-γ变体在一个或两个ifn-γ亚基内包含选自下组的一个或多个突变：s20a/d21a、d21k、v22a/a23s、d24a/n25a、a23e/d24e/n25k、a23q和a23v。在一些实施方案中，所述ifn-γ变体的一个或两个亚基包含seq id no:11-17中任一个的序列。在一些实施方案中，相对于包含seq id no:10序列的野生型ifn-γ亚基，所述ifn-γ变体在一个或两个ifn-γ亚基内包含a23v突变。在一些实施方案中，所述ifn-γ变体的一个或两个亚基包含seq id no:13的序列。在一些实施方案中，所述ifn-γ或其变体的两个亚基通过接头连接。在一些实施方案中，所述ifn-γ变体包含seq id no:19的序列。在一些实施方案中，所述细胞因子或其变体是il-10或其变体。在一些实施方案中，相对于包含seq id no:20序列的野生型il-10亚基，所述il-10变体在一个或两个il-10亚基内选自下组的位置包含一个或多个突变：n21、m22、r24、d25、l26、r27、d28、a29、f30、s31、r32、h90和s93。在一些实施方案中，相对于包含seq id no:20序列的野生型il-10亚基，所述il-10变体在一个或两个il-10亚基内包含选自下组的一个或多个突变：r24a、d25a、l26a、r27a、d28a、a29s、f30a、s31a和r32a。在一些实施方案中，相对于包含seq id no:20序列的野生型il-10亚基，所述il-10变体在一个或两个il-10亚基内包含选自下组的一个或多个突变：r24a、d25a/l26a、r27a、d28a/a29s、f30a/s31a和r32a。在一些实施方案中，所述il-10变体的一个或两个亚基包含seq id no:21-26中任一个的序列。在一些实施方案中，相对于包含seq id no:20序列的野生型il-10亚基，所述il-10变体在一个或两个il-10亚基内包含r27a突变。在一些实施方案中，所述il-10变体的一个或两个亚基包含seq id no:23的序列。在一些实施方案中，所述il-10或其变体的两个亚基通过接头连接。在一些实施方案中，所述il-10变体包含seq id no:28的序列。在一些实施方案中，所述细胞因子或其变体是il-12或其变体。在一些实施方案中，相对于包含seq id no:30序列的野生型p40亚基，所述il-12变体在p40亚基内在选自下组的位置包含一个或多个突变：e45、q56、v57、k58、e59、f60、g61、d62、a63、g64、q65和c177。在一些实施方案中，相对于包含序列seq id no:30的野生型p40亚基，所述il-12变体在p40亚基内包含选自下组的一个或多个突变：q56a、v57a、k58a、e59a、f60a、g61a、d62a、a63s、g64a和q65a。在一些实施方案中，所述il-12变体的p40亚基包含seq idno:31-34中任一个的序列。在一些实施方案中，相对于包含seq id no:30序列的野生型p40亚基，所述il-12变体在p40亚基内包含e59a/f60a突变。在一些实施方案中，所述il-12变体的p40亚基包含seq id no:31的序列。在一些实施方案中，相对于包含seq id no:30序列的野生型p40亚基，所述il-12变体在p40亚基内包含f60a突变。在一些实施方案中，所述il-12变体的p40亚基包含seq id no:33的序列。在一些实施方案中，所述il-12或其变体的p40亚基和p35亚基通过接头连接。在一些实施方案中，所述il-12变体包含seq id no:36、275、331或332的序列。在一些实施方案中，所述细胞因子或其变体是il-23或其变体。在一些实施方案中，相对于包含seq id no:30序列的野生型p40亚基，所述il-23变体在p40亚基内在选自下组的位置包含一个或多个突变：e45、q56、v57、k58、e59、e60、g61、d62、a63、g64、q65和c177。在一些实施方案中，相对于包含序列seq id no:30的野生型p40亚基，所述il-23变体在p40亚基内包含选自下组的一个或多个突变：q56a、v57a、k58a、e59a、e60a、g61a、d62a、a63s、g64a和q65a。在一些实施方案中，所述il-23变体的p40亚基包含seq id no:31-34中任一个的序列。在一些实施方案中，相对于包含seq id no:30序列的野生型p40亚基，所述il-23变体在p40亚基内包含e59a/f60a突变。在一些实施方案中，所述il-23变体的p40亚基包含seq id no:31的序列。在一些实施方案中，所述il-23或其变体的p40亚基和p19亚基通过接头连接。在一些实施方案中，所述il-23变体包含seq id no:39的序列。在一些实施方案中，所述接头包含seq id no:194-242中任一个的序列，如seq id no:227-229中任一个的序列。

12、在根据上述任何一种免疫细胞因子的一些实施方案中，所述细胞因子或其变体位于所述抗原结合多肽(例如，重链，或配体/受体-ec融合多肽)的铰链区内。

13、在根据上述任何一种免疫细胞因子的一些实施方案中，所述fc结构域亚基或其部分包含杵臼(kih)突变。

14、在根据上述任何一种免疫细胞因子的一些实施方案中，所述抗原结合蛋白是特异性识别所述靶抗原的抗体，包含所述铰链区的抗原结合多肽是所述抗体的重链，并且所述细胞因子或其变体位于所述重链的铰链区。在一些实施方案中，所述抗体是抗-her2抗体，其包含：i)含有seq id no:188序列的vh-cdr1；ii)含有seq id no:189序列的vh-cdr2；iii)含有seq id no:190序列的vh-cdr3；iv)含有seq id no:191序列的vl-cdr1；v)含有seq id no:192序列的vl-cdr2；和vi)含有seq id no:193序列的vl-cdr3。在一些实施方案中，所述抗体包含：含有seq id no:150序列的vh和含有seq id no:151序列的vl。在一些实施方案中，所述抗体包含含有seq id no:154序列的轻链，(i)所述细胞因子或其变体是包含seq id no:2序列的il-2变体，并且包含位于所述铰链区的il-2变体的重链包含seq idno:156的序列；(ii)所述细胞因子或其变体是包含seq id no:4序列的ifn-α变体，并且包含位于所述铰链区的ifn-α变体的重链包含seq id no:157的序列；(iii)所述细胞因子或其变体是包含seq id no:19序列的ifn-γ变体，并且包含位于所述铰链区的ifn-γ变体的重链包含seq id no:158的序列；(iv)所述细胞因子或其变体是包含seq id no:28序列的il-10变体，并且包含位于所述铰链区的il-10变体的重链包含seq id no:159的序列；(v)所述细胞因子或其变体是包含seq id no:36序列的il-12变体，并且包含位于所述铰链区的il-12变体的重链包含seq id no:160的序列；或(vi)所述细胞因子或其变体是包含seqid no:39序列的il-23变体，并且包含位于所述铰链区的il-23变体的重链包含seq id no:161的序列。在一些实施方案中，所述抗体包含第二重链，所述第二重链不包含位于所述铰链区的细胞因子或其变体，并且所述第二重链包含seq id no:155的序列。在一些实施方案中，所述抗体是抗-cd3抗体，其包含：i)含有seq id no:85序列的vh-cdr1；ii)含有seq idno:86序列的vh-cdr2；iii)含有seq id no:87序列的vh-cdr3；iv)含有seq id no:88序列的vl-cdr1；v)含有seq id no:89序列的vl-cdr2；和vi)含有seq id no:90序列的vl-cdr3。在一些实施方案中，所述抗体包含：含有seq id no:91序列的vh和含有seq id no:92序列的vl。在一些实施方案中，所述抗体包含含有seq id no:94序列的轻链，(i)所述细胞因子或其变体是包含seq id no:2序列的il-2变体，并且包含位于所述铰链区的il-2变体的重链包含seq id no:96的序列；(ii)所述细胞因子或其变体是包含seq id no:4序列的ifn-α变体，并且包含位于所述铰链区的ifn-α变体的重链包含seq id no:97的序列；(iii)所述细胞因子或其变体是包含seq id no:19序列的ifn-γ变体，并且包含位于所述铰链区的ifn-γ变体的重链包含seq id no:98的序列；(iv)所述细胞因子或其变体是包含seq idno:28序列的il-10变体，并且包含位于所述铰链区的il-10变体的重链包含seq id no:99的序列；(v)所述细胞因子或其变体是包含seq id no:36序列的il-12变体，并且包含位于所述铰链区的il-12变体的重链包含seq id no:100的序列；或(vi)所述细胞因子或其变体是包含seq id no:39序列的il-23变体，并且包含位于所述铰链区的il-23变体的重链包含seq id no:101的序列。在一些实施方案中，所述抗体包含第二重链，所述第二重链不包含位于所述铰链区的所述细胞因子或其变体，并且所述第二重链包含seq id no:95的序列。在一些实施方案中，所述抗体是抗-pd-1抗体，其包含：含有seq id no:102序列的vh的vh-cdr1、vh-cdr2和vh-cdr3，以及含有seq id no:103序列的vl的vl-cdr1、vl-cdr2和vl-cdr3。在一些实施方案中，所述抗体包含：含有seq id no:102序列的vh和含有seq id no:103序列的vl。在一些实施方案中，所述抗体包含含有seq id no:106序列的轻链，(i)所述细胞因子或其变体是包含seq id no:2序列的il-2变体，并且包含位于所述铰链区的il-2变体的重链包含seq id no:108的序列；(ii)所述细胞因子或其变体是包含seq id no:4序列的ifn-α变体，并且包含位于所述铰链区的ifn-α变体的重链包含seq id no:109的序列；(iii)所述细胞因子或其变体是包含seq id no:19序列的ifn-γ变体，并且包含位于所述铰链区的ifn-γ变体的重链包含seq id no:110的序列；(iv)所述细胞因子或其变体是包含seq id no:28序列的il-10变体，并且包含位于所述铰链区的il-10变体的重链包含seqid no:111的序列；(v)所述细胞因子或其变体是包含seq id no:36序列的il-12变体，并且包含位于所述铰链区的il-12变体的重链包含seq id no:112的序列；或(vi)所述细胞因子或其变体是包含seq id no:39序列的il-23变体，并且包含位于所述铰链区的il-23变体的重链包含seq id no:113的序列。在一些实施方案中，所述抗体包含第二重链，所述第二重链不包含位于所述铰链区的细胞因子或其变体，并且所述第二重链包含seq id no:107的序列。在一些实施方案中，所述抗体是抗-cd4抗体，其包含：i)含有seq id no:67序列的vh-cdr1；ii)含有seq id no:68序列的vh-cdr2；iii)含有seq id no:69序列的vh-cdr3；iv)含有seq id no:70序列的vl-cdr1；v)含有seq id no:71序列的vl-cdr2；和vi)含有seq idno:72序列的vl-cdr3。在一些实施方案中，所述抗体包含：含有seq id no:73序列的vh和含有seq id no:74序列的vl。在一些实施方案中，所述抗体包含含有seq id no:77序列的轻链，(i)所述细胞因子或其变体是包含seq id no:2序列的il-2变体，并且包含位于所述铰链区的il-2变体的重链包含seq id no:79的序列；(ii)所述细胞因子或其变体是包含seqid no:4序列的ifn-α变体，并且包含位于所述铰链区的ifn-α变体的重链包含seq id no:80的序列；(iii)所述细胞因子或其变体是包含seq id no:19序列的ifn-γ变体，并且包含位于所述铰链区的ifn-γ变体的重链包含seq id no:81的序列；(iv)所述细胞因子或其变体是包含seq id no:28序列的il-10变体，并且包含位于所述铰链区的il-10变体的重链包含seq id no:82的序列；(v)所述细胞因子或其变体是包含seq id no:36序列的il-12变体，并且包含位于所述铰链区的il-12变体的重链包含seq id no:83序列；或(vi)所述细胞因子或其变体是包含seq id no:39序列的il-23变体，并且包含位于所述铰链区的il-23变体的重链包含seq id no:84的序列。在一些实施方案中，所述抗体包含第二重链，所述第二重链不包含位于所述铰链区的细胞因子或其变体，并且所述第二重链包含seq id no:78的序列。在一些实施方案中，所述抗体是抗-cd8抗体，其包含：含有seq id no:114序列的vh的vh-cdr1、vh-cdr2和vh-cdr3，以及含有seq id no:115序列的vl的vl-cdr1、vl-cdr2和vl-cdr3。在一些实施方案中，所述抗体包含：含有seq id no:114序列的vh和含有seq id no:115序列的vl。在一些实施方案中，所述抗体包含含有seq id no:117序列的轻链，(i)所述细胞因子或其变体是包含seq id no:2序列的il-2变体，并且包含位于所述铰链区的il-2变体的重链包含seq id no:119的序列；(ii)所述细胞因子或其变体是包含seq id no:4序列的ifn-α变体，并且包含位于所述铰链区的ifn-α变体的重链包含seq id no:120的序列；(iii)所述细胞因子或其变体是包含seq id no:19序列的ifn-γ变体，并且包含位于所述铰链区的ifn-γ变体的重链包含seq id no:121的序列；(iv)所述细胞因子或其变体是包含seq id no:28序列的il-10变体，并且包含位于所述铰链区的il-10变体的重链包含seqid no:122的序列；(v)所述细胞因子或其变体是包含seq id no:36序列的il-12变体，并且包含位于所述铰链区的il-12变体的重链包含seq id no:123的序列；或(vi)所述细胞因子或其变体是包含seq id no:39序列的il-23变体，并且包含位于所述铰链区的il-23变体的重链包含seq id no:124的序列。在一些实施方案中，所述抗体包含第二重链，所述第二重链不包含位于所述铰链区的细胞因子或其变体，并且所述第二重链包含seq id no:118的序列。在一些实施方案中，所述抗体是抗-ctla-4抗体，其包含：含有seq id no:125序列的vh的vh-cdr1、vh-cdr2和vh-cdr3，以及含有seq id no:126序列的vl的vl-cdr1、vl-cdr2和vl-cdr3。在一些实施方案中，所述抗体包含：含有seq id no:125序列的vh和含有seq idno:126序列的vl。在一些实施方案中，所述抗体包含含有seq id no:129序列的轻链，(i)所述细胞因子或其变体是包含seq id no:2序列的il-2变体，并且包含位于所述铰链区的il-2变体的重链包含seq id no:131的序列；(ii)所述细胞因子或其变体是包含seq id no:4序列的ifn-α变体，并且包含位于所述铰链区的ifn-α变体的重链包含seq id no:132的序列；(iii)所述细胞因子或其变体是包含seq id no:19序列的ifn-γ变体，并且包含位于所述铰链区的ifn-γ变体的重链包含seq id no:133的序列；(iv)所述细胞因子或其变体是包含seq id no:28序列的il-10变体，并且包含位于所述铰链区的il-10变体的重链包含seq id no:134的序列；(v)所述细胞因子或其变体是包含seq id no:36序列的il-12变体，并且包含位于所述铰链区的il-12变体的重链包含seq id no:135的序列；或(vi)所述细胞因子或其变体是包含seq id no:39序列的il-23变体，并且包含位于所述铰链区的il-23变体的重链包含seq id no:136的序列。在一些实施方案中，所述抗体包含第二重链，所述第二重链不包含位于所述铰链区的细胞因子或其变体，并且所述第二重链包含seq id no:130的序列。在一些实施方案中，所述抗体是抗-pd-ll抗体，其包含：i)含有seq id no:243序列的vh-cdr1；ii)含有seq id no:244序列的vh-cdr2；iii)含有seq id no:245序列的vh-cdr3；iv)含有seq id no:246序列的vl-cdr1；v)含有seq id no:247序列的vl-cdr2；和vi)含有seq id no:248序列的vl-cdr3。在一些实施方案中，所述抗体包含：含有seq idno:137序列的vh和含有seq id no:138序列的vl。在一些实施方案中，所述抗体包含含有seq id no:140序列的轻链，(i)所述细胞因子或其变体是包含seq id no:2序列的il-2变体，并且包含位于所述铰链区的il-2变体的重链包含seq id no:144的序列；(ii)所述细胞因子或其变体是包含seq id no:4序列的ifn-α变体，并且包含位于所述铰链区的ifn-α变体的重链包含seq id no:145的序列；(iii)所述细胞因子或其变体是包含seq id no:19序列的ifn-γ变体，并且包含位于所述铰链区的ifn-γ变体的重链包含seq id no:146的序列；(iv)所述细胞因子或其变体是包含seq id no:28序列的il-10变体，并且包含位于所述铰链区的il-10变体的重链包含seq id no:147的序列；(v)所述细胞因子或其变体是包含seq id no:36序列的il-12变体，并且包含位于所述铰链区的il-12变体的重链包含seq idno:148的序列；或(vi)所述细胞因子或其变体是包含seq id no:39序列的il-23变体，并且包含位于所述铰链区的il-23变体的重链包含seq id no:149的序列。在一些实施方案中，所述抗体包含第二重链，所述第二重链不包含位于所述铰链区的细胞因子或其变体，并且第二重链包含seq id no:143的序列。在一些实施方案中，所述抗体是抗-cd25抗体，其包含：含有seq id no:162序列的vh的vh-cdr1、vh-cdr2和vh-cdr3，以及含有seq id no:163序列的vl的vl-cdr1、vl-cdr2和vl-cdr3。在一些实施方案中，所述抗体包含：含有seq idno:162序列的vh和含有seq id no:163序列的vl。在一些实施方案中，所述抗体包含含有seq id no:165序列的轻链，(i)所述细胞因子或其变体是包含seq id no:2序列的il-2变体，并且包含位于所述铰链区的il-2变体的重链包含seq id no:169的序列；(ii)所述细胞因子或其变体是包含seq id no:4序列的ifn-α变体，并且包含位于所述铰链区的ifn-α变体的重链包含seq id no:170的序列；(iii)所述细胞因子或其变体是包含seq id no:19序列的ifn-γ变体，并且包含位于所述铰链区的ifn-γ变体的重链包含seq id no:171的序列；(iv)所述细胞因子或其变体是包含seq id no:28序列的il-10变体，并且包含位于所述铰链区的il-10变体的重链包含seq id no:172的序列；(v)所述细胞因子或其变体是包含seq id no:36序列的il-12变体，并且包含位于所述铰链区的il-12变体的重链包含seq idno:173的序列；或(vi)所述细胞因子或其变体是包含seq id no:39序列的il-23变体，并且包含位于所述铰链区的il-23变体的重链包含seq id no:174的序列。在一些实施方案中，所述抗体包含第二重链，所述第二重链不包含位于铰链区的细胞因子或其变体，并且所述第二重链包含seq id no:168的序列。在一些实施方案中，与纳武单抗(nivolumab)相比，所述抗体是与pd-1的结合亲和力降低(降低至少约2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、50、100、1000或更多倍)的抗-pd-1抗体。在一些实施方案中，所述抗体是抗-pd-1抗体，其包含：含有seq idno:102序列的vh的vh-cdr1、vh-cdr2和vh-cdr3，以及含有seq id no:103序列的vl的vl-cdr1、vl-cdr2和vl-cdr3，其中相对于seq id no:102所述vh-cdr3包含以下突变中的任一种：d100n、d100g、d100r、n99g、n99a或n99m。在一些实施方案中，所述抗体包含含有seq idno:106序列的轻链，其中所述细胞因子或其变体是包含seq id no:36序列的il-12变体，并且其中包含位于所述铰链区的il-12变体的重链包含seq id no:268-273中任一个的序列。

15、在根据上述任何一种免疫细胞因子的一些实施方案中，(i)所述抗原结合片段是配体，并且所述靶抗原是被所述配体特异性识别的受体；或(ii)所述抗原结合片段是受体，并且所述靶抗原是被所述受体特异性识别的配体。在一些实施方案中，所述配体或受体选自下组：il-2、il-2rα(cd25)、pd-1、pd-l1、pd-l2、nkg2a、nkg2c、nkg2f、nkg2d、bcma、april、baff、il-3、il-13、llt1、aicl、dnam-1和nkp80。在一些实施方案中，所述配体是pd-l2。在一些实施方案中，所述配体包含seq id no:176的序列。在一些实施方案中，(i)所述细胞因子或其变体是包含seq id no:2序列的il-2变体，并且包含位于所述铰链区的il-2变体的抗原结合多肽包含seq id no:180的序列；(ii)所述细胞因子或其变体是包含seq id no:4序列的ifn-α变体，并且包含位于所述铰链区的ifn-α变体的抗原结合多肽包含seq id no:182的序列；(iii)所述细胞因子或其变体是包含seq id no:19序列的ifn-γ变体，并且包含位于所述铰链区的ifn-γ变体的抗原结合多肽包含seq id no:183的序列；(iv)所述细胞因子或其变体是包含seq id no:28序列的il-10变体，并且包含位于所述铰链区的il-10变体的抗原结合多肽包含seq id no:184的序列；(v)所述细胞因子或其变体是包含seq idno:36序列的il-12变体，并且包含位于所述铰链区的il-12变体的抗原结合多肽包含seqid no:186的序列；(vi)其中所述细胞因子或其变体是包含seq id no:275序列的il-12变体，并且其中包含位于所述铰链区的il-12变体的抗原结合多肽包含seq id no:274的序列；或(vii)所述细胞因子或其变体是包含seq id no:39序列的il-23变体，并且包含位于所述铰链区的il-23变体的抗原结合多肽包含seq id no:187的序列。在一些实施方案中，所述抗原结合蛋白包含第二抗原结合多肽，所述第二抗原结合多肽不包含位于所述铰链区的细胞因子或其变体，并且所述第二抗原结合多肽包含seq id no:178、179、181和185中任一个的序列。在一些实施方案中，所述配体是或源自pd-l1的胞外域。在一些实施方案中，与野生型pd-1相比，pd-l1配体与pd-1的结合增加(例如，增加至少约2、3、4、5、6、10、20、50、100、100或更多倍中的任一个)。在一些实施方案中，相对于seq id no:249，pd-l1配体包含以下任何突变或其组合：i54q、e58m、r113t、m115l、s117a和g119k。在一些实施方案中，相对于seq id no:249，pd-l1配体包含以下任何突变：e58m/r113t/m115l/s117a/g119k、i54q/e58m/r113t/m115l/s117a/g119k、i54q/r113t/m115l/s117a/g119k、i54q/e58m/m115l/s117a/g119k、i54q/e58m/r113t/s117a/g119k、i54q/e58m/r113t/m115l/g119k或i54q/e58m/r113t/m115l/s117a。在一些实施方案中，所述配体包含seq id no:255-261中任一个的序列。在一些实施方案中，所述细胞因子或其变体是包含seq id no:36序列的il-12变体，并且包含位于所述铰链区的il-12变体的抗原结合多肽包含seq id no:277的序列。在一些实施方案中，所述抗原结合蛋白包含第二抗原结合多肽，所述第二抗原结合多肽包含位于铰链区或fc片段的c’处的第二细胞因子或其变体。在一些实施方案中，所述第二细胞因子或其变体是本文所述的任何细胞因子或其变体，如il-2或ifn-γ或其变体。在一些实施方案中，所述抗原结合蛋白包含第二抗原结合多肽，所述第二抗原结合多肽包含位于所述铰链区的第二细胞因子或其变体，并且所述第二抗原结合多肽包含seqid no:285-288和seq id no:327中任一个的序列。在一些实施方案中，配体是或源自pd-l2的胞外域。在一些实施方案中，与野生型pd-l2相比，pd-l2配体与pd-1的结合增加(例如，增加至少约2、3、4、5、6、10、20、50、100、100或更多倍中的任一个)。在一些实施方案中，相对于seq id no:176，pd-l2配体包含以下任何突变或其组合：t56v、s58v、q60l或t56v/s58v/q60l。在一些实施方案中，所述pd-l2配体包含seq id no:262-265中任一个的序列。在一些实施方案中，所述细胞因子或其变体是包含seq id no:36序列的il-12变体，并且其中包含位于所述铰链区的il-12变体的抗原结合多肽包含seq id no:293的序列。在一些实施方案中，所述抗原结合蛋白包含第二抗原结合多肽，所述第二抗原结合多肽包含位于铰链区或fc片段的c’处的第二细胞因子或其变体。在一些实施方案中，所述第二细胞因子或其变体是本文所述的任何细胞因子或其变体，如il-2或ifn-γ或其变体。在一些实施方案中，所述配体是或源自cd155的胞外域。在一些实施方案中，所述cd155配体包含seq id no:267的序列。

16、本技术还提供了本文所述的任何抗-pd-1抗体，如本文所述的具有hc-cdr3突变的抗-pd-1抗体。

17、本技术还提供本文描述的任何免疫细胞因子，如实施例中描述的任何构建体，包括细胞因子在铰链区的单链融合体、细胞因子(相同或不同)在铰链区的双链融合体，或一个细胞因子在一条链的铰链区融合，而另一个与另一条链fc的c’融合。在一些实施方案中，细胞因子是本文所述的任何细胞因子或其变体，如il-2、il-12、ifn-γ等。

18、本文还提供了一种免疫细胞因子，其包含融合到特异性识别靶抗原的抗原结合蛋白的c’(例如，在fc片段的c’)的细胞因子或其变体。在一些实施方案中，所述免疫细胞因子包含：a)特异性识别靶抗原的抗原结合蛋白；和b)细胞因子或其变体(例如，本文所述的任一种)，其中抗原结合蛋白包含抗原结合多肽，所述抗原结合多肽从n端至c端包含：抗原结合片段(例如，抗-pd-1、pd-l1或pd-l2)、铰链区和fc结构域亚基或其部分，并且其中所述细胞因子或其变体位于fc结构域亚基或其部分的c’。

19、本文还提供了一种免疫细胞因子，其包含：a)特异性识别靶抗原的抗原结合蛋白；b)第一细胞因子(例如，il-2或ifn-γ)或其变体，和c)第二细胞因子(例如，il-12)或其变体，其中所述抗原结合蛋白包含第一抗原结合多肽和第二抗原结合多肽，所述第一抗原结合多肽从n端至c端包含：抗原结合片段、铰链区和fc结构域亚基或其部分，并且第一细胞因子或其变体位于铰链区；所述第二抗原结合多肽从n端至c端包含：抗原结合片段、铰链区和fc结构域亚基或其部分，并且其中第二细胞因子或其变体位于铰链区。

20、本文还提供了一种免疫细胞因子，其包含：a)特异性识别靶抗原的抗原结合蛋白；b)第一细胞因子(例如，il-2或ifn-γ)或其变体，和c)第二细胞因子(例如，il-12)或其变体，其中所述抗原结合蛋白包含第一抗原结合多肽和第二抗原结合多肽，所述第一抗原结合多肽从n端至c端包含：抗原结合片段、铰链区和fc结构域亚基或其部分，并且其中第一细胞因子或其变体位于铰链区；所述第二抗原结合多肽从n端至c端包含：抗原结合片段、铰链区和fc结构域亚基或其部分，并且其中第二细胞因子或其变体位于fc结构域的c’。

21、本技术的另一个方面提供了一种选择性激活细胞因子或其变体对个体中表达靶抗原的细胞的活性的方法，其包括向所述个体施用有效量的免疫细胞因子，所述免疫细胞因子包含：a)特异性识别所述靶抗原的抗原结合蛋白(例如，抗体，或配体/受体-fc融合蛋白)；和b)细胞因子或其变体，所述抗原结合蛋白包含抗原结合多肽(例如，重链或配体/受体-fc融合多肽)，所述抗原结合多肽从n端至c端包含：抗原结合片段(例如，抗体片段、配体或受体)、铰链区和fc结构域亚基或其部分，并且所述细胞因子或其变体位于所述铰链区(例如，n-末端，c-末端，或之内)，以及所述细胞因子或其变体的活性在所述抗原结合蛋白与所述靶抗原结合时被选择性激活。在一些实施方案中，本技术提供了一种选择性激活细胞因子或其变体对在个体中表达靶抗原的细胞的活性的方法，其包括向个体施用有效量的任一种上述免疫细胞因子，并且所述细胞因子或其变体的活性在抗原结合蛋白与靶抗原结合时被选择性地激活。在一些实施方案中，与不存在所述抗原结合蛋白与所述靶抗原结合的情况相比，在所述抗原结合蛋白与所述靶抗原结合的情况下，所述细胞因子或其变体的活性增加至少约20％(如至少约30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、200％、300％、400％、500％或更多中的任一个)。在一些实施方案中，在不存在所述抗原结合蛋白与所述靶抗原结合的情况下，位于所述铰链区的细胞因子或其变体的活性不超过相应的细胞因子或其变体在游离状态下的活性的约70％(如不超过约60％、50％、40％、30％、20％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％、0.9％、0.8％、0.7％、0.6％、0.5％、0.4％、0.3％、0.2％、0.1％或0％中的任一个)。在一些实施方案中，所述细胞因子或其变体是细胞因子变体，并且所述细胞因子变体在游离状态下的活性不超过相应野生型细胞因子在游离状态下的活性的约80％(如不超过约70％、60％、50％、40％、30％、20％、10％或5％中的任一个)。在一些实施方案中，所述抗原结合蛋白是特异性识别所述靶抗原的抗体，包含所述铰链区的抗原结合多肽是抗体的重链，并且所述细胞因子或其变体位于所述重链的铰链区。在一些实施方案中，(i)所述抗原结合片段是配体，并且所述靶抗原是被所述配体特异性识别的受体；或(ii)所述抗原结合片段是受体，并且所述靶抗原是被所述受体特异性识别的配体。

22、还提供了编码本文所述的任一种免疫细胞因子的分离的核酸、包含这样的核酸的载体(例如，慢病毒载体)、包含这样的核酸或载体的宿主细胞(例如，cho细胞)，以及产生本文所述的任一种免疫细胞因子的方法。

23、还提供了包含本文所述的任一种免疫细胞因子的组合物(例如，药物组合物)、试剂盒和制品。还提供了使用有效量的本文描述的任一种免疫细胞因子或组合物(例如，药物组合物)治疗个体的疾病或病症(例如，癌症、感染、自身免疫病、过敏、移植物排斥或移植物抗宿主病(gvhd))的方法。