使用荧光和化学发光标记两者的检测方法与流程

本发明涉及使用荧光和化学发光标记两者来检测液体样品中的分析物的方法。双标记提供对高浓度和低浓度两种样品的准确定量。

背景技术：

1、抗原抗体对、受体配体对和互补核苷酸对通常用作诊断测试中的检测基础。固定在基底上以捕获样品中的靶标的抗体、互补核酸或受体通常称为捕获分子。在捕获分子与样品中的靶标分析物结合后，使用检测抗体、核酸或受体来检测所捕获的靶标分析物。检测抗体、核酸或受体可在其上具有荧光、化学发光或电化学发光标记，以提供检测信号。

2、在这些标记中，通常使用荧光分子。然而，在诊断检测中，样品中靶标分子的数目变化很大，并且它们的浓度变化至少5,000倍；对于某些特定靶标，浓度变化甚至超过300,000倍。尽管荧光标记可有效地检测具有低端浓度的靶标，但是当靶标浓度较高时，荧光标记的浓度可增加若干数量级。当荧光分子彼此靠近时，将发生自淬灭，这导致荧光信号与靶标浓度之间的非线性关系，并且导致定量不准确。

3、化学发光标记无需外部辐射能就能进行检测。能量来自于化学反应打破化学键之后释放的光子。然而，化学发光标记的能量转换效率不是1 00％。大量能量通过热耗散而不是产生光子。当分析物浓度低时，化学发光免疫测定通常显示出测定变异。

4、仍然需要改进的检测方法来解决免疫测定中遇到的问题。

技术实现思路

技术特征：

1.一种检测液体样品中的分析物的方法，所述方法包括以下步骤：

2.一种检测液体样品中的分析物的方法，所述方法包括以下步骤：

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述结合对是生物素和链霉亲和素、生物素和亲和素、生物素和中性亲和素、荧光素和抗荧光素、地高辛/抗地高辛或dnp(二硝基苯酚)/抗dnp。

4.根据权利要求3所述的方法，其中所述结合对的所述第一成员是生物素，并且所述结合对的所述第二成员是链霉亲和素。

5.根据权利要求1或2所述的方法，还包括在步骤(d)之前读取所述探头尖端的背景荧光信号，其中通过从步骤(e)的所述荧光信号中减去所述背景荧光信号来计算步骤(f)的所述荧光信号。

6.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述探头尖端的表面≤约5mm。

7.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述荧光标记是花青染料。

8.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述化学发光标记是钌(ii)三联吡啶或吖啶酯。

9.根据权利要求4所述的方法，其中所述链霉亲和素与蔗糖和表氯醇的共聚物缀合。

10.根据权利要求9所述的方法，其中每个共聚物携带约20至30个链霉亲和素。

11.根据权利要求10所述的方法，其中每个共聚物还携带每个链霉亲和素2至3个cy5分子或每个链霉亲和素2至3个吖啶酯分子。

技术总结
本发明涉及一种用于检测液体样品中的分析物的免疫测定方法；并为高浓度和低浓度两种样品提供准确性和再现性。该方法使用荧光标记和化学发光标记两者，并读取荧光信号和化学发光信号两者。使用预先建立的分析物浓度值，基于荧光信号的校准曲线或化学发光信号的校准曲线来确定分析物浓度。

技术研发人员：陈浩德,吴衡,谭洪,罗伯特·F·祖克
受保护的技术使用者：万迈医疗仪器有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/14