特异于转铁蛋白受体1（TfR1）的双环肽配体的制作方法

本发明涉及与分子支架共价结合的多肽，使得两个或更多个肽环在与支架的连接点之间对向存在(subtend)。具体地，本发明描述与tfr1结合的肽。本发明还涉及包含至少两个所述双环肽配体的多聚结合复合物。本发明还包括含有所述肽配体和多聚结合复合物的药物组合物，以及所述肽配体和多聚结合复合物和药物组合物在通过tfr1介导的治疗剂递送以预防、抑制或治疗疾病或病症中的用途。

背景技术：

1、环肽能够以高亲和力和特异性结合于蛋白质靶标，因此是对于治疗剂开发有吸引力的分子类型。事实上，临床上已经成功使用了几种环肽，例如抗菌肽万古霉素、免疫抑制剂药物环孢菌素或抗癌药奥曲肽(driggers等人(2008)，nat rev drug discov 7(7)，608-24)。良好的结合特性是由肽和靶标之间形成的相对较大的相互作用表面以及环状结构的构象柔韧性降低导致的。通常，大环结合至数百平方埃的表面，例如环肽cxcr4拮抗剂cvx15(wu等人(2007)，science330，1066-71)，一种具有与整合素αvb3结合的arg-gly-asp基序的环肽(xiong等人(2002)，science 296(5565),151-5)，或与尿激酶型纤溶酶原活化剂结合的环肽抑制剂upain-1(zhao等人(2007)，j.struct.biol.160(1),1-10)。

2、由于其环状构型，大环肽比线性肽柔性低，导致了在结合靶标时熵损失较少，得到了较高的结合亲和性。降低的柔性还导致锁定靶标特异性构象，与线性肽相比增加结合特异性。这种作用已经通过一种有效的、选择性的基质金属蛋白酶8(mmp-8)抑制剂来例证，当其环被打开时该抑制剂丧失对其他mmp的选择性(cherney等人(1998)，j med chem 41(11)，1749-51)。通过大环化获得的有利的结合性质在具有多于一个肽环的多环肽(例如在万古霉素、乳链菌肽和放线菌素中)更为显著。

3、不同的研究团队以前已经将具有半胱氨酸残基的多肽连接到合成分子结构上(kemp和mcnamara(1985),j.org.chem；timmerman等人(2005)，chembiochem)。meloen及其同事已经使用三(溴甲基)苯和相关分子将多个肽环快速和定量地环化到合成支架上，用于蛋白质表面的结构模拟(timmerman等人(2005)，chembiochem)。产生候选药物化合物的方法，其中通过将含半胱氨酸的多肽连接至分子支架(例如，1,1',1”-(1,3,5-三嗪烷-1,3,5-三基)三丙-2-烯-1-酮(tata))，产生所述化合物(heinis等人(2014)，angewandte chemie，国际版，53(6)1602-1606)。

4、已经开发了基于噬菌体展示的组合方法以产生并筛选出针对目标靶标的双环肽的大型文库(heinis等人(2009)，nat chem biol 5(7)，502-7和wo 2009/098450)。简而言之，在噬菌体上展示含有三个半胱氨酸残基和两个区域的六个随机氨基酸的线性肽(cys-(xaa)6-cys-(xaa)6-cys)的组合文库，并通过将半胱氨酸侧链共价连接至一个小分子支架而环化。

技术实现思路

1、根据本发明的第一方面，提供特异于转铁蛋白受体(tfr1)的肽配体，其包含多肽和分子支架，所述多肽含有被至少两个环序列隔开的至少三个反应性基团，所述分子支架与所述多肽的反应性基团形成共价键，使得在分子支架上形成至少两个多肽环。

2、根据本发明的另一方面，提供了包含至少两个双环肽配体的多聚结合复合物，其中所述肽配体可以相同或不同，其中每个包含特异于转铁蛋白受体(tfr1)的肽配体，所述肽配体包含多肽和分子支架，所述多肽含有被至少两个环序列隔开的至少三个反应性基团，所述分子支架与所述多肽的反应性基团形成共价键，使得在分子支架上形成至少两个多肽环。

3、根据本发明的另一方面，提供了一种药物组合物，其包含本文限定的肽配体或多聚结合复合物与一种或多种药学上可接受的赋形剂组合。

4、根据本发明的另一方面，提供了本文限定的肽配体或多聚结合复合物或药物组合物，其用于通过tfr1介导的治疗剂递送以预防、抑制或治疗疾病或病症的用途。

技术特征：

1.一种特异于转铁蛋白受体1(tfr1)的肽配体，其包含多肽和分子支架，所述多肽含有被至少两个环序列隔开的至少三个反应性基团，所述分子支架与所述多肽的反应性基团形成共价键，使得在所述分子支架上形成至少两个多肽环。

2.根据权利要求1限定的肽配体，其中所述反应性基团包含半胱氨酸残基。

3.根据利要求1或权利要求2限定的肽配体，其中所述肽配体抑制转铁蛋白与tfr1的结合。

4.根据权利要求1至3中任一项限定的肽配体，其中所述环序列包含2、3、6、8或9个氨基酸。

5.根据权利要求4限定的肽配体，其中所述环序列包含被两个环序列隔开的三个半胱氨酸残基，所述两个环序列中的第一环序列由2个氨基酸组成，第二环序列由9个氨基酸组成。

6.根据权利要求4限定的肽配体，其中所述环序列包含被两个环序列隔开的三个半胱氨酸残基，所述两个环序列均由6个氨基酸组成。

7.根据权利要求4限定的肽配体，其中所述环序列包含被两个环序列隔开的三个半胱氨酸残基，所述两个环序列中的第一环序列由3个氨基酸组成，第二环序列由8个氨基酸组成。

8.根据权利要求4限定的肽配体，其中所述肽配体包含以下氨基酸序列：

9.根据利要求1或权利要求2限定的肽配体，其中所述肽配体不抑制转铁蛋白与tfr1的结合。

10.根据权利要求9限定的肽配体，其中所述环序列包含3或7个氨基酸。

11.根据权利要求10限定的肽配体，其中所述环序列包含被两个环序列隔开的三个半胱氨酸残基，所述两个环序列中的第一环序列由7个氨基酸组成，第二环序列由3个氨基酸组成。

12.根据权利要求9至11中任一项限定的肽配体，其中所述肽配体包含以下氨基酸序列：

13.根据权利要求1至12中任一项限定的肽配体，其中所述药学上可接受的盐选自游离酸或钠盐、钾盐、钙盐或铵盐。

14.一种多聚结合复合物，其包含权利要求1至13中任一项限定的肽配体中的至少两个。

15.根据权利要求14所述的多聚结合复合物，其包含式(i)的化合物：

16.根据权利要求15所述的多聚结合复合物，其中m代表2以及chm是式(a)的基序：

17.一种药物组合物，其包含权利要求1至13中任一项限定的肽配体或权利要求14至16中任一项限定的多聚结合复合物与一种或多种药学上可接受的赋形剂的组合。

18.权利要求1至13中任一项限定的肽配体或权利要求14至16中任一项限定的多聚结合复合物、或权利要求17限定的药物组合物用于通过tfr1介导的治疗剂递送以预防、抑制或治疗疾病或病症的用途。

19.一种组织递送复合物，其包含结合tfr1的权利要求1至13中任一项限定的肽配体或权利要求14至16中任一项限定的多聚结合复合物与有效载荷的组合，如寡核苷酸，特别是sirna。

20.根据权利要求19限定的组织递送复合物，其是肌肉组织递送复合物。

21.根据权利要求19或权利要求20限定的组织递送复合物用于治疗肌肉骨骼病症的用途。

技术总结
本发明涉及与分子支架共价结合的多肽，使得两个或更多个肽环在与支架的连接点之间对向存在。具体地，本发明描述与TfR1结合的肽。本发明还涉及包含至少两个所述双环肽配体的多聚结合复合物。本发明还包括包含所述肽配体和多聚结合复合物的药物组合物、以及所述肽配体和多聚结合复合物和药物组合物在通过TfR1介导的治疗剂递送在预防、抑制或治疗疾病或病症中的用途。

技术研发人员：E·高恩斯,G·穆德,M·里格比,P·赛斯,M·斯凯纳,S·斯坦威,L·乌尔博纳斯,K·范里茨霍滕
受保护的技术使用者：拜斯科技术开发有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15