抗体-NKG2D配体结构域融合蛋白的制作方法

本发明涉及与非天然nkg2d配体的a1-a2结构域融合的抗体，所述非天然nkg2d配体与非天然nkg2d受体选择性地结合。

背景技术：

1、将患者源性t细胞工程化为表达嵌合抗原受体(car)已经改变了过继性细胞疗法的前景，使得科学家和临床医师能够利用t细胞的强大细胞溶解能力并且将所述t细胞以mhc非依赖性方式定向到具体抗原表达性靶标。所述t细胞最初用于治疗血液系统恶性病的应用引起了惊人反响，并且激发了大量的研究工作，以推动其在非血液系统适应症中的有效使用。然而，car-t细胞疗法因其利用单一目的靶向性结构域、可能归因于细胞因子释放综合征的剂量控制的缺乏、无法解决导致疾病复发的肿瘤抗原损失以及导致缺乏持续性的非人靶向性结构域的免疫原性而受到限制。本领域需要经改进的基于car的细胞疗法以解决当前疗法选项的这些局限性。

技术实现思路

1、本公开提供了一种抗体融合蛋白，其包括：(i)重链，所述重链包括包含seq idno:1的氨基酸序列的可变区序列；以及(ii)轻链，所述轻链包括包含seq id no:8的氨基酸序列的可变区序列，其中所述轻链在c末端处与a1-a2结构域融合，所述a1-a2结构域包括seq id no:11的氨基酸序列。在各个方面，所述重链包括恒定结构域，所述恒定结构域包括seq id no:3的氨基酸序列。任选地，所述a1-a2结构域通过接头与所述轻链融合，所述接头包括seq id no:10的氨基酸序列。在此方面，所述轻链在各个方面包括seq id no:13的氨基酸序列。在各个方面，所述重链，其包括seq id no:7的氨基酸序列。

2、本公开进一步提供了一种核酸分子，其包括编码所述抗体融合蛋白的轻链(例如，包括可变区序列的轻链，所述可变区序列包括seq id no:8的氨基酸序列，其中所述轻链在c末端处与a1-a2结构域融合，所述a1-a2结构域包括seq id no:11的氨基酸序列)的核苷酸序列。本公开进一步提供了一种组合物，其包括编码所述抗体融合蛋白的轻链的所述核酸分子和包含编码本文所述的抗体融合蛋白的重链(例如，包括包含seq id no:1的氨基酸序列的可变区序列的重链)的核苷酸序列的核酸分子。还提供了一种表达载体，其包括编码本文所述的抗体融合蛋白的轻链的所述核酸分子，所述表达载体任选地进一步包括包含编码本文所述的抗体融合蛋白的重链的核苷酸序列的核酸分子。进一步提供了一种宿主细胞，其包括本文所述的表达载体。本公开提供了一种宿主细胞，其包括包含编码所述抗体融合蛋白的轻链的核苷酸序列的核酸分子以及包含编码所述抗体融合蛋白的重链的核苷酸序列的核酸分子。还提供了一种产生抗体融合蛋白的方法，所述方法包括：培养宿主细胞，所述宿主细胞包括包含编码所述抗体融合蛋白的轻链的核苷酸序列的核酸分子以及包含编码所述抗体融合蛋白的重链的核苷酸序列的核酸分子；以及回收所述抗体融合蛋白。

3、还提供了一种试剂盒，其包括一个或多个容器，所述一个或多个容器包括本文所述的抗体融合蛋白。任选地，所述试剂盒进一步包括一个或多个容器，所述一个或多个容器包括哺乳动物细胞(例如，人淋巴细胞或人巨噬细胞)，所述哺乳动物细胞包括嵌合抗原受体，所述嵌合抗原受体包括seq id no:15。在各个方面，所述嵌合抗原受体进一步包括seqid no:16-18。

4、本公开进一步提供了一种治疗患有cd20阳性癌症的受试者的方法，所述方法包括向所述受试者施用本文所述的抗体融合蛋白以及哺乳动物细胞(例如，人淋巴细胞或人巨噬细胞)，所述哺乳动物细胞包括嵌合抗原受体，所述嵌合抗原受体包括seq id no:15。任选地，所述嵌合抗原受体进一步包括seq id no:16-18。提供了一种抗体融合蛋白和哺乳动物细胞用于治疗cd20阳性癌症的用途，以及抗体融合蛋白和哺乳动物细胞在制备用于治疗cd20阳性癌症的药物中的用途。

5、应当理解，虽然说明书中的各个实施例是使用“包括”语言来呈现的，但是在各种情况下，也可以使用“由...组成”或“基本上由...组成”语言来描述相关实施例。本公开设想了被描述为“包括(comprising)”特征的实施例以包含“由所述特征组成(consistingof)”或“基本上由所述特征组成(consisting essentially of)”的实施例。术语“一个或一种(a/an)”是指一个/种或多个/种。因而，术语“一个(a)”(或“一种(an)”)、“一个/种或多个/种”和“至少一个/种”在本文中可互换地使用。除非上下文另外明确要求，否则术语“或”应当被理解为涵盖替代或一起的项。

6、除非在本文中另外指示，否则对本文中值范围的叙述仅旨在充当个别提及属于所述范围的每一单独值和每个端点的速记方法，并且每一单独值和端点并入到本说明书中，如同在本文中单独地叙述一般。然而，本说明书还设想了排除较低和/或较高端点的相同范围。当使用术语“约”时，其意指所叙述的数字加上或减去该所叙述数字的5％、10％或更多。预期的实际变化可从上下文中确定。

7、除非本文另外指出或与上下文明显矛盾，否则本文描述的所有方法可以以任何合适的顺序执行。除非另外声明，否则本文提供的任何和所有实例或示例性语言(例如，“如”)的使用仅旨在更好地说明本公开，而不对本公开的范围构成限制。仅在本文中被描述为对本发明至关重要的此类限制才应被如此看待；缺少未在本文中被描述为至关重要的限制的本发明的变化旨在作为本发明的各方面。

8、从本申请，包含附图和具体描述整体来看，本发明的另外的特征和变化对于本领域的技术人员来说将是显而易见的，并且所有此类特征均旨在作为本发明的各方面。同样，本文所描述的本发明的特征可以被重新组合到也旨在作为本发明的各方面的另外的实施例中，而不管特征的组合是否被指定为本发明的方面或实施例。整个文档旨在作为统一的公开内容而相关联，并且应当理解，还设想了本文所述的特征的所有组合(即使在单独的章节中进行了描述)，即使特征的组合没有一起存在于本文档的同一句子或段落或章节中。

技术特征：

1.一种抗体融合蛋白，其包括：(i)重链，所述重链包括包含seq id no:1的氨基酸序列的可变区序列；以及(ii)轻链，所述轻链包括包含seq id no:8的氨基酸序列的可变区序列，其中所述轻链在c末端处与a1-a2结构域融合，所述a1-a2结构域包括seq id no:11的氨基酸序列。

2.根据权利要求1所述的抗体融合蛋白，其中所述a1-a2结构域通过接头与所述轻链融合，所述接头包括seq id no:10的氨基酸序列。

3.根据权利要求1或权利要求2所述的抗体融合蛋白，其包括轻链，所述轻链包括seqid no:13的氨基酸序列。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的抗体融合蛋白，其中所述重链包括恒定结构域，所述恒定结构域包括seq id no:3的氨基酸序列。

5.根据权利要求4所述的抗体融合蛋白，其包括重链，所述重链包括seq id no:7的氨基酸序列。

6.根据权利要求1至3中任一项所述的抗体融合蛋白，其中所述重链包括恒定结构域，所述恒定结构域包括seq id no:2的氨基酸序列。

7.根据权利要求6所述的抗体融合蛋白，其包括重链，所述重链包括seq id no:6的氨基酸序列。

8.一种抗体融合蛋白，其包括轻链和重链，所述轻链包括seq id no:13的氨基酸序列，所述重链包括seq id no:7的氨基酸序列。

9.一种抗体融合蛋白，其包括轻链和重链，所述轻链包括seq id no:13的氨基酸序列，所述重链包括seq id no:6的氨基酸序列。

10.一种核酸分子，其包括编码根据权利要求1至9中任一项所述的抗体融合蛋白的轻链的核苷酸序列。

11.一种组合物，其包括根据权利要求10所述的核酸分子以及包含编码根据权利要求1至9中任一项所述的抗体融合蛋白的重链的核苷酸序列的核酸分子。

12.一种表达载体，其包括根据权利要求10所述的核酸分子。

13.根据权利要求12所述的表达载体，其进一步包括包含编码根据权利要求1至9中任一项所述的抗体融合蛋白的重链的核苷酸序列的核酸分子。

14.一种宿主细胞，其包括根据权利要求12或权利要求13所述的表达载体。

15.一种宿主细胞，其包括根据权利要求12所述的表达载体以及包含核酸分子的表达载体，所述核酸分子包括编码根据权利要求1至9中任一项所述的抗体融合蛋白的重链的核苷酸序列。

16.一种产生抗体融合蛋白的方法，所述方法包括：

17.一种试剂盒，其包括一个或多个容器和使用说明书，所述一个或多个容器包括根据权利要求1至9中任一项所述的抗体融合蛋白。

18.根据权利要求17所述的试剂盒，其进一步包括一个或多个容器，所述一个或多个容器包括哺乳动物细胞，所述哺乳动物细胞包括嵌合抗原受体，所述嵌合抗原受体包括seqid no:15。

19.根据权利要求18所述的试剂盒，其中所述哺乳动物细胞是人淋巴细胞或人巨噬细胞。

20.根据权利要求18或权利要求19所述的试剂盒，其中所述嵌合抗原受体进一步包括seq id no:16-18。

21.一种治疗患有cd20阳性癌症的受试者的方法，所述方法包括向所述受试者施用根据权利要求1至9中任一项所述的抗体融合蛋白以及哺乳动物细胞，所述哺乳动物细胞包括嵌合抗原受体，所述嵌合抗原受体包括seq id no:15。

22.根据权利要求21所述的方法，其中所述哺乳动物细胞是人淋巴细胞或人巨噬细胞。

23.根据权利要求21或权利要求22所述的方法，其中所述嵌合抗原受体进一步包括seqid no:16-18。

技术总结
本公开提供了一种抗体融合蛋白，其包括：(i)重链，所述重链包括包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的可变区序列；以及(ii)轻链，所述轻链包括包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列的可变区序列，其中所述轻链在C末端处与A1‑A2结构域融合，所述A1‑A2结构域包括SEQ ID NO:11的氨基酸序列。提供了编码所述抗体融合蛋白的全部或一部分的核酸，以及使用所述抗体融合蛋白治疗例如CD20阳性癌症的方法。

技术研发人员：卡曼·金姆,凯尔·兰德瑞弗
受保护的技术使用者：修普霍斯生物科学有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/22