技术特征：
1.一种脐带华通氏胶收获原代间充质干细胞的方法，其特征在于，脐带华通氏胶组织块依次经过首次培养和二次培养，获得原代间充质干细胞；其中，首次培养和二次培养所用的培养基包括：dmem培养基、13v/v％-17v/v％自体血小板裂解液、1-3mmol/l l-谷氨酰胺和0.5-2mmol/l白血病抑制因子。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，首次培养和二次培养所用的培养基包括：dmem培养基、15v/v％自体血小板裂解液、2mmol/l l-谷氨酰胺和1mmol/l白血病抑制因子。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，首次培养包括：脐带华通氏胶组织块第0天加入培养基静置培养6-8天，此后每隔2-3天换液培养，第13-14天收获原代间充质干细胞；优选地，第0天，脐带华通氏胶组织块与培养基的体积比为1:(1-5)，优选为1:3；优选地，培养至第2天，还包括补加培养基的步骤，所述补加培养基的体积为补加前体积的1-3倍，优选为2倍。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，收集首次培养后的华通氏胶组织块进行二次培养，二次培养包括：第0天将脐带华通氏胶组织块加入培养基静置培养4-5天，然后换液培养，第6-7天收获原代间充质干细胞。5.根据权利要求3或4所述的方法，其特征在于，收获原代间充质干细胞的方法采用胰酶消化收集。6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，还包括对原代间充质干细胞进行检测的步骤。7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，检测指标包括：细胞计数、细胞活力、表面标志物、细胞周期和间充质干细胞三系分化能力。8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，表面标志物包括阳性指标和阴性指标，阳性指标包括cd44、cd73、cd90和cd105，阴性指标包括cd14、cd19、cd34、cd45和hla-dr。9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，脐带华通氏胶组织块的制备方法包括：选取无淤血、无组织损伤的脐带，经消毒后剥离华通氏胶，华通氏胶剪碎得到华通氏胶组织块。10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，消毒包括先用0.9％生理盐水清洗，再用医用碘伏消毒2-3min。
技术总结
本发明涉及生物技术领域，具体而言，提供了一种脐带华通氏胶二次培养收获原代间充质干细胞的方法。脐带华通氏胶组织块依次经过首次培养和二次培养，获得原代间充质干细胞；其中，首次培养和二次培养所用的培养基包括：DMEM培养基、L-谷氨酰胺、自体血小板裂解液和白血病抑制因子。该方法避免了动物血清的使用，同时加快了间充质干细胞爬出的时间和抑制了多次培养造成的细胞分化。了多次培养造成的细胞分化。了多次培养造成的细胞分化。
技术研发人员：韦丹 薛晓锋 王迎耀 朱学义 张云国 徐丹
受保护的技术使用者：河南省组织细胞库有限公司
技术研发日：2022.03.09
技术公布日：2022/7/29