用于生产外泌体的方法及其所制得的外泌体及其应用与流程

本发明是有关于一种用于生产外泌体(exosomes)的方法，其包括：将禽类胚胎间充质干细胞(avian embryo mesenchymal stem cells,amscs)培养于含有2,3,4′,5-四羟基二苯乙烯-2-o-β-d-葡萄糖苷(2,3,4′,5-tetrahydroxystilbene-2-o-β-d-glucoside,thsg)的培养基中，而得到amscs的细胞培养物；以及自该细胞培养物中收取外泌体。本发明也有关于使用该外泌体来改善皮肤病况(skin condition)。

背景技术：

1、外泌体(exosomes)是由细胞所分泌出的一种纳米级囊泡(nanosized vesicles)，属于胞外囊泡(extracellular vesicles,evs)的一种，存在于各种生物液体(biologicalfluids)[包括羊水(amniotic fluid)、尿液(urine)以及血液]中，其中富含蛋白质、脂质、mrnas以及mirnas等成分。

2、尺寸-选择性分离处理(size-selective separation)[例如，过滤(filtration)、透析(dialysis)以及层析法(chromatography)]以及密度-选择性分离处理(density-selective separation)[例如，离心(centrifugation)]皆已被用来将外泌体从干细胞的培养物中分离出，以利外泌体的活性探讨。已有研究指出，不同来源或类型的干细胞所生产出的外泌体分别会具有不同的生物活性。例如，在wang y.et al.(2017),stem cellres.ther.,8:189中，wang y.等人发现衍生自人类胚胎干细胞-诱导的间充质干细胞(human embryonic stem cell-induced mesenchymal stem cells)的外泌体具有缓解骨关节炎(osteoarthritis)的效用。在kim y.j.et al.(2017),biochem.biophys.res.commun.,493：1102-1108中，kim y.j.等人发现衍生自人类脐带血间充质干细胞(human umbilical cord blood mesenchymal stem cells)的外泌体具有促进皮肤回春(skin rejuvenation)的效用。

3、就申请人所知，迄今尚无任何文献或专利前申请曾经将2,3,4′,5-四羟基二苯乙烯-2-o-β-d-葡萄糖苷(2,3,4′,5-tetrahydroxystilbene-2-o-β-d-glucoside,thsg)[其是一种存在于何首乌(polygonum multiflorum)中属于多羟基二苯乙烯类(polyhydroxystilbene group)的活性成分]以及禽类胚胎间充质干细胞(avian embryomesenchymal stem cells,amscs)应用外泌体的生产。

技术实现思路

1、于本发明中，申请人发现，使用2,3,4′,5-四羟基二苯乙烯-2-o-β-d-葡萄糖苷(2,3,4′,5-tetrahydroxystilbene-2-o-β-d-glucoside,thsg)来培养禽类胚胎间充质干细胞(avian embryo mesenchymal stem cells,amscs)能够有效地促进amscs细胞生产出大量且含有较多成分种类(包括蛋白质与rna)的外泌体，且其能够有效地促进皮肤再生(skinregeneration)与伤口愈合(wound healing)、减少皮肤皱纹(skin wrinkles)、改善掉发(hair loss)以及抗皮肤发炎(skin inflammation)，因而被预期能够应用于改善各种皮肤病况(skin condition)。

2、于是，在第一个方面，本发明提供一种用于生产外泌体的方法，其包括：

3、将禽类胚胎间充质干细胞(amscs)培养于含有2,3,4′,5-四羟基二苯乙烯-2-o-β-d-葡萄糖苷(thsg)的培养基中，而得到amscs的细胞培养物；以及

4、自该细胞培养物中收取外泌体。

5、较佳地，该培养基包含有浓度范围落在0.1至50μm内的thsg。

6、较佳地，该培养被进行历时24至96小时。

7、较佳地，该外泌体是通过尺寸-选择性(size-selective)或密度-选择性(density-selective)的分离处理而被收取的。

8、更佳地，该分离处理是切向流过滤以及尺寸-排除层析法的组合。

9、在第二个方面，本发明提供一种外泌体，它是通过如上所述的方法而被制得的。

10、较佳地，该外泌体具有范围落在50至200nm内的粒径。

11、较佳地，该外泌体具有范围落在50至100nm内的平均粒径。

12、在第三个方面，本发明提供一种如上所述的外泌体供应用于制备用来改善皮肤病况的组合物的用途。

13、较佳地，该皮肤病况包括下列至少一者：伤口、老化、掉发以及发炎。

14、较佳地，该组合物是药妆品组合物。

15、较佳地，该组合物是药学组合物。

16、更佳地，该药学组合物呈供非经肠道投药或口服投药的剂型。

17、在第四个方面，本发明提供一种用于改善皮肤病况的方法，其包括对有此需要的个体投予如上所述的外泌体。

技术特征：

1.一种用于生产外泌体的方法，其特征在于：该方法包括：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：该培养基包含有浓度范围落在0.1至50μm内的thsg。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：该培养被进行历时24至96小时。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：该外泌体是通过尺寸-选择性(size-selective)或密度-选择性(density-selective)的分离处理而被收取的。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：该分离处理是切向流过滤以及尺寸-排除层析法的组合。

6.一种外泌体，其特征在于：该外泌体是通过如权利要求1至5中任一项所述的方法而被制得的。

7.根据权利要求6所述的外泌体，其特征在于：该外泌体具有范围落在50至200nm内的粒径。

8.根据权利要求6所述的外泌体，其特征在于：该外泌体具有范围落在50至100nm内的平均粒径。

9.一种如权利要求6至8中任一项所述的外泌体供应用于制备用来改善皮肤病况的组合物的用途。

10.根据权利要求9所述的用途，其特征在于：该皮肤病况包括下列至少一者：伤口、老化、掉发以及发炎。

11.根据权利要求9至10中任一项所述的用途，其特征在于：该组合物是药妆品组合物。

12.根据权利要求9至10中任一项所述的用途，其特征在于：该组合物是药学组合物。

13.根据权利要求12所述的用途，其特征在于：该药学组合物呈供非经肠道投药或口服投药的剂型。

技术总结
本发明涉及用于生产外泌体的方法及其所制得的外泌体及其应用。本发明揭示一种用于生产外泌体的方法，其包括：将禽类胚胎间充质干细胞(AMSCs)培养于含有2,3,4′,5‑四羟基二苯乙烯‑2‑O‑β‑D‑葡萄糖苷(THSG)的培养基中，而得到AMSCs的细胞培养物；以及自该细胞培养物中收取外泌体。本发明也揭示由上述方法所制得的外泌体可被用来改善皮肤病况。

技术研发人员：谢儒生,金玉堂
受保护的技术使用者：升医生物科技股份有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/14