小鼠胚胎卵黄囊血岛体外培养方法

本发明涉及哺乳动物胚胎体外培养领域，具体涉及一种小鼠胚胎从囊胚到卵黄囊血岛的体外培养方法。

背景技术：

1、小鼠胚胎是最为常用的哺乳动物胚胎模型之一，以其哺乳动物的胚胎特性和较短的发育时间等优势，成为了很好的胚胎发育研究的模型。在胚泡植入母体子宫进一步发育之前，小鼠的受精卵在输卵管及子宫中发育到胚泡阶段。植入子宫后，e7.5出现卵黄囊造血细胞，e8.5卵黄囊壁上血岛发育明显。然而，胚胎植入子宫之后，被子宫组织包裹，胚胎卵黄囊形成以及血岛发育很难进行有效的观察和分析。

2、在体外建立小鼠胚胎的类卵黄囊的延时培养体系，这将为直观地研究胚胎植入子宫后的卵黄囊发育机制以及卵黄囊血岛的发育机理，提供有效的研究平台。

3、目前未有文献报道小鼠胚胎体外培养至卵黄囊血岛阶段即e8.5。本发明通过采用改进的3d仿生培养体系以及改良的培养成分，将植入前囊胚连续培养到卵黄囊，并且卵黄囊上发育出明显的血岛成分。

技术实现思路

0、发明概述

1、本发明的目的在于提供一种小鼠胚胎卵黄囊血岛体外培养方法，将小鼠胚胎连续培养阶段推进至卵黄囊血岛发育。

2、本发明提供了小鼠胚胎卵黄囊血岛体外培养方法，包括以下步骤：

3、1)取含matrigel基质胶的培养液，与小鼠囊胚混合，加入培养器皿中，形成微滴；

4、2)加入包含人脐带血清的早期胚胎体外培养液；

5、3)定期更换早期胚胎体外培养液，直至发育出卵黄囊和血岛。

6、在一些实施方案中，早期胚胎体外培养液的配方在培养过程中保持不变。

7、在一些实施方案中，早期胚胎体外培养液的配方在培养过程中发生调整。

8、在一些实施方案中，早期胚胎体外培养液的配方在囊胚贴壁前和贴壁后调整。

9、在一些实施方案中，matrigel基质胶的浓度为20％-60％，例如优选30％-50％。

10、在一些实施方案中，人脐带血清的含量为5％-25％，优选10％-20％，尤其优选10％。

11、在一些实施方案中，早期胚胎体外培养液还包含5-25％的胎牛血清，优选10％-20％。

12、在一些实施方案中，早期胚胎体外培养液中的胎牛血清含量在培养过程中发生调整。

13、在一些实施方案中，早期胚胎体外培养液中的胎牛血清含量在调整前后分别为10％和20％。

14、在一些实施方案中，早期胚胎体外培养液还包含cmrl-1066培养基、丙酮酸钠、谷氨酰胺、青链霉素、n2、b27。

15、在一些实施方案中，小鼠囊胚分离自孕鼠，优选e3.5的囊胚。

16、在一些实施方案中，每24h更换一次早期胚胎体外培养液。

技术特征：

1.小鼠胚胎卵黄囊血岛体外培养方法，包括以下步骤：

2.权利要求1的培养方法，其中早期胚胎体外培养液的配方在培养过程中保持不变。

3.权利要求1的培养方法，其中早期胚胎体外培养液的配方在培养过程中发生调整。

4.权利要求3的培养方法，其中早期胚胎体外培养液的配方在囊胚贴壁前和贴壁后调整。

5.前述任一项权利要求的培养方法，其中matrigel基质胶的浓度为20％-60％，优选30％-50％。

6.前述任一项权利要求的培养方法，其中人脐带血清的含量为5％-25％，优选10％-20％，尤其优选10％。

7.权利要求6的培养方法，其中早期胚胎体外培养液还包含5-25％的胎牛血清，优选10％-20％。

8.权利要求7的培养方法，其中早期胚胎体外培养液中的胎牛血清含量在培养过程中发生调整。

9.权利要求8的培养方法，其中早期胚胎体外培养液中的胎牛血清含量在调整前后分别为10％和20％。

10.前述任一项权利要求的培养方法，其中早期胚胎体外培养液还包含cmrl-1066培养基、丙酮酸钠、谷氨酰胺、青链霉素、n2、b27。

11.前述任一项权利要求的培养方法，其中小鼠囊胚分离自孕鼠，优选e3.5的囊胚。

12.前述任一项权利要求的培养方法，其中每24h更换一次早期胚胎体外培养液。

技术总结
本发明涉及哺乳动物胚胎体外培养领域，具体涉及一种小鼠胚胎从囊胚到卵黄囊血岛的体外培养方法。具体而言，本发明通过采用改进的3D仿生培养体系以及改良的培养成分，将小鼠胚胎连续培养阶段推进至卵黄囊血岛发育，为胚胎卵黄囊造血系统的发育机制提供了有效的研究平台。

技术研发人员：解军,梁宇翔,金姗姗,张潇,陈炳宏,丰子涵,王福成,樊可奕,曹丽敏,李帅,罗传慧,刘志贞,赵虹,侯淑琳,赵陶然,奥瑞芳,帅旗志,王磊,杨丽红
受保护的技术使用者：山西医科大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15