一种NK细胞无血清培养基的制作方法

本发明涉及医药生物领域，具体涉及一种nk细胞无血清培养基。

背景技术：

1、nk细胞(自然杀伤细胞)是主要的先天性淋巴细胞亚群，其具有固有和先天抗肿瘤抗病毒等特性，从而在未来的免疫治疗上具有更广阔的临床应用前景。

2、nk细胞存在于人外周血中和多种淋巴以及非淋巴组织中。

3、细胞培养技术也叫细胞克隆技术，是指在体外条件下，通过加入特定营养物质，同时对环境温度、ph值、渗透压等进行控制，使细胞在合适的器皿中保持活性、正常生长。根据细胞在器皿中贴壁方式的不同，可以将培养方式分为贴壁培养和悬浮培养。细胞培养基是细胞吸取营养物质的源泉，是细胞培养成功的关键所在。按照来源不同，细胞培养基可以分为天然培养基与人工合成培养基。天然培养基仅由天然生成的生物液体组成。天然培养基非常有用和方便，适用于多种不同的动物细胞培养。但是，由于缺乏对这些天然培养基确切成分的认识，使用天然培养基的主要缺点是可重复性差。人工合成培养基即人为地加入特定组分营养物质，进行适当配比形成的适合细胞生长的培养基。随着合成培养基不断地发展，其分类也逐渐细化，可以分为含血清培养基、含血清替代物培养基，到无血清培养基。无血清培养基的使用提高了细胞培养的可重复性，避免了血清批次之间差异的影响，减少了由血清带来病毒、真菌和支原体等微生物污染的危险，同时，得到的细胞产品也易于纯化。以上诸多优势使得无血清培养基得到越来越广泛的应用。

4、目前现有技术领域专利cn113652400a公开了一种用于nk细胞的无血清培养基，但其扩增能力明显不足，细胞活力和细胞毒性较低，这方面技术有待提高。因此市面上急需一款nk细胞无血清培养基，可以使nk细胞扩增倍数和活性较高。

技术实现思路

1、目前已知的nk细胞体外培养存在细胞扩增速度慢、扩增倍数低、需要严格的补液流程等可操作性困难的难点。本发明的的培养基体外培养nk细胞扩增速度快，扩增倍数高并且可操作性强。

2、根据本发明的一个方面，本发明涉及一种nk细胞无血清培养基，其包括：

3、

4、

5、

6、优选地，上述培养基的ph为7.0-7.2，需要时用盐酸和/或氢氧化钠水溶液将上述培养基的ph调节至7.0-7.2。优选地，使用4m盐酸和/或氢氧化钠水溶液。

7、优选地，本发明的nk细胞无血清培养基由以上物质组成。

8、优选地，上述各组分的含量为：

9、

10、

11、更优选地，上述各组分的含量为：

12、

13、

14、

15、根据本发明的另一个方面，本发明提供上述nk无血清培养基的制备方法，其中，将各成分溶于水中，需要时用盐酸和/或氢氧化钠水溶液调节ph至7.0-7.2， 0.22μm滤芯过滤，即得。优选地，使用4m盐酸和/或氢氧化钠水溶液。

16、根据本发明的另一个方面，本发明提供上述nk细胞无血清培养基在培养nk 细胞中的用途。本发明的用途不涉及疾病的诊断和治疗方法。

17、本领域技术人员可以理解，本发明的nk细胞无血清培养基在使用时与nk 诱导扩增试剂盒配合使用，各种nk诱导扩增试剂盒都可以用于本发明，例如友康生物科技(北京)股份有限公司的nk诱导扩增试剂盒。

18、本发明的体外nk细胞无血清培养基的优势在于在较短的培养时间内，能够大量扩增nk细胞1000倍以上，甚至超过3000倍，且培养的nk细胞具有优异的活性。

1.一种nk细胞无血清培养基，其特征在于，包括：

2.如权利要求1所述的nk细胞无血清培养基，其特征在于，所述培养基的ph为7.0-7.2，需要时用盐酸和/或氢氧化钠水溶液将其ph调节至7.0-7.2。

3.如权利要求2所述的nk细胞无血清培养基，其特征在于，所述盐酸和/或氢氧化钠水溶液为4m盐酸和/或氢氧化钠水溶液。

4.如权利要求1-3中任一项所述的nk细胞无血清培养基，其特征在于，由所述物质组成。

5.如权利要求1-3中任一项所述的nk细胞无血清培养基，其特征在于，所述各成分的含量为：

6.如权利要求5所述的nk细胞无血清培养基，其特征在于，所述各成分的含量为：

7.如权利要求1-6中任一项所述的nk细胞无血清培养基的制备方法，其特征在于，将各成分溶于水中，需要时用盐酸和/或氢氧化钠水溶液调节ph至7.0-7.2，0.22μm滤芯过滤，即得。

8.如权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述盐酸和/或氢氧化钠水溶液为4m盐酸和/或氢氧化钠水溶液。

9.如权利要求1-6中任一项所述的nk细胞无血清培养基在培养nk细胞中的用途。