本发明涉及分子,具体为一种提高南美白对虾dna提取质量的方法。
背景技术:
1、南美白对虾,学名(penaeus vannamei),属于节肢动物门、对虾科、对虾属,属于广温广盐性热带虾类,是世界上三大养殖对虾优良品种,也是世界上最重要的经济虾类之一。南美白对虾(penaeus vannamei)原产于中、南太平洋海岸水域秘鲁北部至墨西哥桑诺拉,于1988年被引进到我国。
2、随着科学技术的发展,南美白对虾种虾和繁育技术也逐渐成熟,我国能够自主生产大批量虾苗,但是在后续的养殖过程中对虾易受病原的侵害,交叉感染,导致大量对虾发病,严重危害了对虾养殖业的发展。目前,针对这些病毒,我国并没有特效药物治疗,多是借助现代分子生物学检测技术对亲虾或虾苗进行严格检疫,反复筛选,从源头上选取健康的虾苗。
3、现代分子生物学检测技术的基础就是对虾的dna提取技术,目前国标上仅规定了dna的提取方法,未对虾病毒提取前的预处理方式进行说明。传统的dna提取,一般采用直接新鲜组织或-80℃保存后进行提取,同时提取方法也不相同,有试剂盒法、苯酚抽提法、饱和氯化钠法等。在实际情况中发现,未进行预处理的组织直接进行dna提取后,dna质量差、完整性地、纯度低,对后续实验有较大的影响,严重阻碍了对虾行业的有序发展。
4、
技术实现思路
1、本发明的目的在于利用一种预处理的方法来提高南美白对虾的dna质量,获取高纯度的dna,为对虾病毒检测提供高质量的模板。具体来说,一种提高南美白对虾dna提取质量的方法,包括如下步骤:首先利用75%-80%酒精对组织进行预处理,脱去组织中水溶性杂质和部分溶于乙醇的杂质;再利用sds和ste溶液对组织进行破坏消化,释放组织dna;最后通过饱和氯化钠法提取dna。
2、作为优选,预处理步骤如下,取10-20mg的样本组织,置于1ml的75%-80%酒精,时间超过2h,充分脱水;将脱水后的组织置于新的离心管中,置于烘箱中烘干,54℃-56℃,时间0.5-1h,彻底挥发酒精(酒精会影响后续提取dna的质量)。
3、作为优选, ste配方如下,称取0.58-0.6gnacl、0.10-0.20gtris和0.03-0.04gedta定容于100ml的蒸馏水中;sds的浓度为10%;蛋白酶k的浓度为10mg/ml。
4、作为优选,试样消化步骤如下,在试样中加入300-500ul的ste,100-200ul的sds,10-50ul的蛋白酶k进行消化,2-4h,56-58℃水浴中消化,充分释放dna。
5、作为优选,饱和氯化钠提取dna步骤如下:a.在消化液中加入300-500ul的三氯甲烷,轻柔摇匀5-10min,12000rpm离心20min,取上清液;b.重复步骤a,取上清液;c.在上清液中加入75%的预冷乙醇1ml,出现白色沉淀,弃上清;d.重复步骤c,用枪头吸取多余的酒精,室温下静置;e.加入无菌水30-50ul。
6、与现有技术相比,本发明的有益效果是:
7、1、该方法适用范围广,成本低,处理方便、简易;
8、2、该法提出的dna效果质量好、完整度高、纯度高,为后续的实验操作提供了模板,保证实验的可继续性。
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1.一种提高南美白对虾dna提取质量的方法,其特征在于包括如下步骤:首先利用75%-80%酒精对组织进行预处理,脱去组织中的水分和溶于酒精的杂质;再利用sds和ste溶液对组织进行破坏消化,释放组织dna;最后通过饱和氯化钠法提取dna。
2.根据权利要求1所述的一种提高南美白对虾dna提取质量的方法,其特征在于:预处理步骤如下,取10-20mg的样本组织,置于1ml的75%-80%酒精,时间超过2h,充分脱水;将脱水后的组织置于新的离心管中,置于烘箱中烘干,54℃-56℃,时间0.5-1h,彻底挥发酒精(酒精会影响后续提取dna的质量)。
3.根据权利要求1所述的一种提高南美白对虾dna提取质量的方法,其特征在于:ste配方如下,称取0.58-0. 6gnacl、0.10-0.20gtris和0.03-0.04gedta定容于100ml的蒸馏水中;sds的浓度为10%;蛋白酶k的浓度为10mg/ml。
4.根据权利要求1所述的一种提高南美白对虾dna提取质量的方法,其特征在于:试样消化步骤如下,再试样中加入300-500ul的ste,100-200ul的sds,10-50ul的蛋白酶k进行消化,2-4h,56-58℃水浴中消化,充分释放dna。
5.根据权利要求1所述的一种提高南美白对虾dna提取质量的方法,其特征在于:饱和氯化钠提取dna步骤如下:a.在消化液中加入300-500ul的三氯甲烷,轻柔摇匀5-10min,12000rpm离心20min,取上清液;b.重复步骤a,取上清液;c.在上清液中加入75%的预冷乙醇1ml,出现白色沉淀,弃上清;d.重复步骤c,用枪头吸取多余的酒精,室温下静置;e.加入无菌水30-50ul。