一种肝细胞的生物标志物及其应用的制作方法

本发明涉及生物，具体涉及一种肝细胞的生物标志物及其应用。

背景技术：

1、现有技术的研究表明，微小rna(microrna，mirna)在体外及体内调节干细胞的生物学特性间充质干细胞是再生医学细胞治疗的重要来源。在动物模型和人类临床试验中，骨髓间充质干细胞mscs在修复各种退行性疾病中受损组织方面显示出了良好的效果。骨髓间充质干细胞具有归巢能力，这意味着它们可以迁移到损伤部位，并具有分化为损伤部位局部成分的能力，以及分泌有助于组织再生的趋化因子、细胞因子和生长因子的能力。在体外可以分化为骨细胞、软骨细胞、肝细胞、心肌细胞等，在体内可以分化为多巴胺能神经元、骨骼肌细胞、内皮细胞、胰岛细胞等。现有技术中虽然有微笑rna作为肝细胞的生物标志物，但有待提出新的肝细胞的生物标志物以较为明显的促进肝细胞的体外增殖，迁移分化。

技术实现思路

1、本发明的目的在于克服上述技术不足，提供一种肝细胞的生物标志物及其应用，解决现有技术中如何促进肝细胞的体外增殖，迁移分化的技术问题。

2、为达到上述技术目的，本发明的技术方案提供一种肝细胞的生物标志物，包括mirna 720，所述mirna 720的引物序列如seq id no.1和seq id no.2所示。

3、本发明还提出一种mirna 720在诱导脐带间充质干细胞分化为肝细胞中的应用。

4、进一步地，所述mirna 720的引物序列上游为：5′-gcgtgctctcgctgggg-3′，下游为：5′-gtgcagggtccgaggt-3′。

5、进一步地，所述应用包括以下步骤：

6、s1、将脐带间充质干细胞，用α-mem培养；

7、s2、用mirna-720转染步骤s1培养后的脐带间充质干细胞得到转染后的细胞；

8、s3、将转染后的细胞用脐带间充质干细胞肝细胞诱导分化培养基培养得到肝细胞。

9、进一步地，在步骤s3中，所述培养的条件为37℃、5％co2、及饱和湿度下培养。

10、进一步地，在步骤s1中，所述脐带间充质干细胞由以下步骤培养得到：将脐带组织块在完全培养基中培养，之后进行半量换液，当细胞融合达到85％-90％时，由0代传代第1代；之后去除脐带组织块，用胰蛋白酶消化，之后中止消化，重悬后接种至培养皿中培养至第5代以上。

11、与现有技术相比，本发明的有益效果包括：本发明的研究表明，mir-720在干细胞的增殖，迁移和肝细胞分化中扮演着重要角色。mir-720的过表达(mimic)有效促进干细胞的体外增殖，迁移和肝细胞分化，可以通过干预提高间充质干细胞中mir-720表达的方法促进其体外增殖和肝细胞分化。

技术特征：

1.一种肝细胞的生物标志物，其特征在于，包括mirna 720，所述mirna 720的引物序列如seq id no.1和seq id no.2所示。

2.一种mirna 720在诱导脐带间充质干细胞分化为肝细胞中的应用。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述mirna 720的引物序列上游为：5′-gcgtgctctcgctgggg-3′，下游为：5′-gtgcagggtccgaggt-3′。

4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，包括以下步骤：

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，在步骤s3中，所述培养的条件为37℃、5％co2、及饱和湿度下培养。

6.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，在步骤s1中，所述脐带间充质干细胞由以下步骤培养得到：将脐带组织块在完全培养基中培养，之后进行半量换液，当细胞融合达到85％-90％时，由0代传代第1代；之后去除脐带组织块，用胰蛋白酶消化，之后中止消化，重悬后接种至培养皿中培养至第5代以上。

技术总结
本发明公开一种肝细胞的生物标志物及其应用，属于生物技术领域。该肝细胞的生物标志物，包括miRNA 720，所述miRNA 720的引物序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。本发明还提出一种miRNA 720在诱导脐带间充质干细胞分化为肝细胞中的应用。miR‑720的过表达(mimic)有效促进干细胞的体外增殖，迁移和肝细胞分化，可以通过干预提高间充质干细胞中miR‑720表达的方法促进其体外增殖和肝细胞分化。

技术研发人员：谢春霞,伯古,刘招,柯文茜,陈佳
受保护的技术使用者：湖北万海赛康生命科学有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/16