一类黄酮类化合物及制备和在制备抗糖尿病药物中的应用

1.本发明属于生物医药技术领域，特别涉及一类黄酮类化合物及其制备方法和在制备抗糖尿病药物中的应用。


背景技术：

2.糖尿病是一种长期的慢性疾病，随着人口老龄化、生活习惯改变等，糖尿病等慢病患者人数不断增多。根据idf数据显示，2021年全球糖尿病成人患者人数高达5.37亿，约占全球总人口的10.5％。糖尿病患者中，ii型糖尿病患者约占总人数的90％，其主要病理特征是肝脏和外周组织中的胰岛素抵抗，因此，通过改善胰岛素抵抗是治疗ii型糖尿病的关键所在。
3.过氧化物酶增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator activated receptorγ，pparγ)是重要的细胞分化转录因子，在哺乳动物的脂肪组织、血管平滑肌组织、心肌组织中均有表达。目前有利用噻唑烷二酮类pparγ完全激动剂如罗格列酮(rosiglitazone)、吡格列酮(pioglitazone)等药物，通过af-2(activation function 2)参与的“锁定”机制来改善胰岛素敏感性，从而实现高效降糖的目的；但这些激动剂会导致pparγ完全激动，产生肥胖、心脏肥大等副作用，因此极大地限制了该类药物在临床中的应用。因此，需要开发一种新型的化合物用于制备抗糖尿病药物，使其能够兼具“高效降糖、低副作用”的双重特征。


技术实现要素：

4.为了克服上述现有技术的缺点与不足，本发明的首要目的在于提供一类黄酮类化合物。
5.本发明另一目的在于提供上述黄酮类化合物的制备方法。
6.本发明再一目的在于提供上述黄酮类化合物在制备抗糖尿病药物或其先导化合物中的应用。
7.本发明的黄酮类化合物具有显著降低血糖的效果，且不会引起体重的增加，不会引起类似噻唑烷二酮类药物的副作用，可应用于制备抗糖尿病药物中。
8.本发明的黄酮类化合物可作为pparγ选择性调控剂发挥抗ii型糖尿病效应，在不引起诸如脂肪细胞分化、体重增加、肝毒性等pparγ完全激动剂所造成的副作用的基础上，能够明显改善血糖水平，是具有“高效安全”降糖作用的潜力药物先导化合物。
9.本发明再一目的在于提供上述黄酮类化合物在制备治疗和/或预防受pparγ核受体调节的疾病的药物中的应用。
10.本发明的黄酮类化合物与pparγ具有较强的结合能力，其ic
50
和ki分别低至1.72μm和0.62μm，且该黄酮类化合物仅微弱的激活pparγ及诱导脂肪细胞分化，有望开发成pparγ选择性调控剂，作为pparγ小分子调控剂。
11.本发明的目的通过下述方案实现：
12.一类黄酮类化合物，结构式如下式(i)所示：
[0013][0014]
其中，r为取代i/未取代的c1-c10的直链/支链/环状烷基、取代i/未取代的苯基、取代i/未取代的苄基、或取代i/未取代的乙羧基。
[0015]
进一步的，所述的黄酮类化合物结构式如式(i)所示，r为甲基、乙基、取代i/未取代的c3-c10的直链/支链/环状烷基、取代i/未取代的苯基、取代i/未取代的苄基，或取代i/未取代的乙羧基。
[0016]
在本发明的一些实施例中，所述的取代i相同或不同的分别指基团中的一个或一个以上氢原子可被卤素原子、c1-c10的直链/支链/环状烷基、c1-c10的卤代烷基、取代ⅱ/未取代的c2-c10的烯基、取代ⅱ/未取代的c2-c10的炔基、取代ⅱ/未取代的c1-c10的烷氧基、羟基、取代ⅱ/未取代的c1-c10的烷羟基、羧基、氰基、硝基、氨基、取代ⅱ/未取代的c3-c20的含n、o和s中的一种或一种以上的杂烷基等取代。
[0017]
更进一步的，所述的取代i相同或不同的指基团中的一个或一个以上氢原子可被-f、-cl、-br、-i、甲基、乙基、c3-c10的直链/支链/环状烷基、卤代甲基、甲氧基、羟基、氰基、取代ⅱ/未取代的羟甲基、取代ⅱ/未取代的c3-c20的含n、o和s中的一种或一种以上的杂烷基等取代；
[0018]
所述的取代ⅱ/未取代的c3-c20的含n、o和s中的一种或一种以上的杂烷基可包括-(ch2)2sch3、-(ch2)4nh(co)och2c6h5等。
[0019]
更进一步的，所述的取代i相同或不同的指基团中的一个或一个以上氢原子可被-f、-cl、-br、-i、甲基、乙基、c3-c10的直链/支链/环状烷基、卤代甲基、甲氧基、羟基、氰基、-ch2oh、-ch(ch3)oh、-(ch2)2sch3、-(ch2)4nh(co)och2c6h5等取代。
[0020]
所述的取代ⅱ相同或不同的指基团中的一个或一个以上氢原子可被-f、-cl、-br、-i、氧原子、甲基、乙基、丙基、丁基、烯基、炔基、苯基、芳基、羟基、氨基、羰基、羧基、酯基、甲氧基、氰基、硝基等取代。
[0021]
本发明还提供一种上述黄酮类化合物(ygt)的制备方法，具体以7-o-羧烷基化白杨素衍生物与胺或氨基酸衍生物反应得到。
[0022]
所述的氨基酸衍生物可为氨基酸甲酯盐酸盐；反应后再水解得到目标产物。
[0023]
所述7-o-羧烷基化白杨素衍生物的结构式如下所示：
[0024][0025]
在本发明的一些实施例中，所述反应可在edci/dmap催化体系下进行。
[0026]
具体反应方程式如下所示：
[0027][0028]
本发明还提供上述黄酮类化合物在制备抗糖尿病药物或其先导化合物中的应用。本发明的黄酮类化合物具有显著降低血糖的效果，且不会引起体重的增加，不会引起类似噻唑烷二酮类药物的副作用，可应用于制备抗糖尿病药物中。
[0029]
本发明的黄酮类化合物可作为pparγ选择性调控剂发挥抗ii型糖尿病效应，在不引起诸如脂肪细胞分化、体重增加、肝毒性等pparγ完全激动剂所造成的副作用的基础上，能够明显改善血糖水平，是具有“高效安全”降糖作用的潜力药物先导化合物。
[0030]
本发明还提供上述黄酮类化合物在制备治疗和/或预防受pparγ核受体调节的疾病的药物中的应用。本发明的黄酮类化合物与pparγ具有较强结合能力，其ic
50
和ki分别低至1.72μm和0.62μm，且该黄酮类化合物仅微弱的激活pparγ及诱导脂肪细胞分化，有望开发成为新型的pparγ选择性调控剂，作为pparγ小分子调控剂，从而发挥降糖等作用，并且不会引起类似噻唑烷二酮类药物的副作用。
附图说明
[0031]
为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
[0032]
图1为本发明黄酮类化合物与pparγ的竞争性结合曲线。
[0033]
图2为本发明黄酮类化合物的荧光素酶活性图。
[0034]
图3为本发明黄酮类化合物的油红o染色图。
[0035]
图4为本发明黄酮类化合物的激活成脂基因及胰岛素敏感性相关基因表达图。
[0036]
图5为小鼠降糖实验效果图。
具体实施方式
[0037]
下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。下列实施例中涉及的物料若无特殊说明均可从商业渠道获得。所述方法若无特别说明均为常规方法。
[0038]
实施例1：黄酮类化合物的制备
[0039]
一类黄酮类化合物(ygt)，结构式如下式(i)所示：
[0040]
[0041]
其中，r为取代i/未取代的c1-c10的直链/支链/环状烷基、取代i/未取代的苯基、取代i/未取代的苄基、或取代i/未取代的乙羧基。
[0042]
其制备方法具体以7-o-羧烷基化白杨素衍生物与胺或氨基酸衍生物反应得到。所述的氨基酸衍生物可为氨基酸甲酯盐酸盐，反应后再水解得到目标产物。
[0043]
所述7-o-羧烷基化白杨素衍生物的结构式如下所示：
[0044][0045]
具体反应方程式如下所示：
[0046][0047]
(一)7-o-羧烷基化白杨素衍生物可参照[j].合成化学.2015,(2).93-97.制备得到，具体步骤如下：
[0048]
(1)将摩尔当量为1：1.1的白杨素和溴代乙酸乙酯在碳酸钾碱性条件和n,n-二甲基甲酰胺(dmf)溶剂环境下，室温搅拌反应，得到相应的醚类化合物。可通过薄层色谱监控是否反应完全，pe/ea＝3/1。反应结束后可通过加入水，使产物析出，分离、水洗涤、干燥，得到固体产物。
[0049]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.08(d,j＝7.2hz,2h),7.65-7.52(m,3h),7.03(s,1h),6.83(s,1h),6.42(s,1h),4.94(s,2h),4.20(s,2h),1.23(t,j＝7.0hz,3h).
[0050]
(2)将步骤(1)制备得到的醚类化合物加入水和甲醇(1:1，v/v)的混合溶剂中，碱性条件下(如naoh)室温搅拌反应，水解得到7-o-羧烷基化白杨素衍生物。可通过薄层色谱监控是否反应完全，pe/ea＝3/1。反应结束后可加入酸(如2m盐酸溶液)调节体系ph为5，使产物析出，分离、水洗涤、干燥，得到固体产物。
[0051]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.11(d,j＝7.2hz,2h),7.60-7.53(m,3h),7.07(s,1h),6.84(s,1h),6.41(s,1h),4.86(s,2h).
13
c nmr(100mhz,dmso-d6)δ182.1,169.4,163.8,163.6,161.1,157.2,132.2,130.5,129.1,126.5,105.4,105.2,98.6,93.5,64.9.hrms(esi)m/z:[m-h]
+
:311.0561；found:311.0560.
[0052]
(二)黄酮类化合物ygt-1的制备
[0053]
将1.2摩尔当量的苯胺加入含4-二甲氨基吡啶(dmap，1.5eq)/1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(edci，1.5eq)催化体系的dmf溶剂中，搅拌均匀后，再加入1摩尔当量的7-o-羧烷基化白杨素衍生物，室温反应12-24h，得到化合物ygt-1。
[0054]
可通过薄层色谱监控是否反应完全。反应结束后可通过加入酸(如0.5m盐酸溶液)调节体系ph为5，乙酸乙酯萃取，有机相水洗涤、干燥，薄层层析纯化，得到目标产物。
[0055]
(三)其他黄酮类化合物ygt-2至ygt-49的制备方法同上，通过采用不同的胺或氨基酸衍生物与7-o-羧烷基化白杨素衍生物反应得到，具体采用的试剂可参见表1。
[0056]
其中，当采用氨基酸衍生物与7-o-羧烷基化白杨素衍生物反应制备化合物ygt-18至ygt-25时，反应结束后可得到粗产物；将粗产物再次加入含碱(如氢氧化钠)的水和甲醇(1:1，v/v)的混合溶剂中，室温反应，水解得到目标产物；水解反应结束后，可加入酸(如0.5m盐酸溶液)调节体系ph为5，使产物析出，分离、水洗涤、干燥，得到固体产物。
[0057]
表1
[0058]
[0059]
[0060][0061]
化合物ygt-1至化合物ygt-49的结构式及表征数据如下：
[0062]
[0063]
[0064][0065]
ygt-1：1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ10.09(s,1h),8.09(d,j＝6.9hz,2h),7.67-7.56(m,5h),7.33(t,j＝7.4hz,2h),7.09(t,j＝6.9hz,1h),7.03(s,1h),6.88(s,1h),6.51(s,1h),4.87(s,2h).
13
cnmr(100mhz,dmso-d6)δ181.9,165.5,163.8,163.6,161.1,157.1,138.2,132.0,130.5,129.0,128.6,126.4,123.7,119.6,105.4,105.2,98.6,93.6,67.3.hrms(esi)m/z:[m+h]
+
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[0066]
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13
c nmr(100mhz,dmso-d6)δ181.9,165.3,163.8,163.6,161.1,157.1,146.1,135.6,132.0,130.5,129.0,126.4,125.2,119.4,105.4,105.2,98.6,93.6,67.3,33.9,31.1.hrms(esi)m/z:[m+h]
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[0067]
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13
c nmr(100mhz,dmso-d6)δ182.0,165.3,163.8,163.6,161.2,157.2,135.7,132.7,132.1,130.5,129.1,126.4,119.7,105.4,105.2,98.7,93.6,67.3,59.6,20.4.hrms(esi)m/z:[m+h]
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[0068]
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13
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[0069]
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13
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19
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13
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–
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13
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[0073]
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13
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–
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13
c nmr(100mhz,dmso-d6)δ182.0,165.5,163.8,163.6,161.1,157.2,138.2,137.9,132.1,130.5,129.1,128.5,126.4,124.4,120.1,116.8,105.4,105.2,98.7,93.6,67.3,21.1.hrms(esi)m/z:[m+h]
+
:402.1336；found:402.1332.
[0078]
ygt-14：1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ10.02(s,1h),8.03(d,j＝7.2hz,2h),7.61-7.51(m,3h),7.32(s,1h),7.16(d,j＝8.5hz,1h),6.97(s,1h),6.89(d,j＝8.6hz,1h),6.83(s,1h),6.47(s,1h),4.81(s,2h),3.70(s,6h).
13
c nmr(100mhz,dmso-d6)δ182.2,165.4,163.9,163.7,161.3,157.3,148.6,145.4,132.3,131.9,130.6,129.3,126.6,112.0,111.9,105.5,105.4,104.9,98.9,93.8,67.4,55.8,55.5.hrms(esi)m/z:[m+h]
+
:448.1391；found:448.1387.
[0079]
ygt-15：1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.81(s,1h),8.10(d,j＝6.8hz,2h),7.76-7.70(m,1h),7.66-7.57(m,4h),7.54(d,j＝8.7hz,1h),7.29-7.22(m,1h),7.06(s,1h),6.90(s,1h),6.52(s,1h),4.94(s,2h).
13
c nmr(100mhz,dmso-d6)δ182.2,169.6,163.9,163.6,161.2,157.3,132.3,130.6,129.2,126.5,115.80,115.76,115.7,115.6,114.8,114.6,105.4,105.2,98.6,93.5,65.1.
19
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+
:440.0696；found:440.0695.
[0080]
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–
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19
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+
:474.0959；found:474.0961.
[0081]
ygt-17：1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ10.18(s,1h),8.12(d,j＝16.6hz,2h),7.78
–
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–
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13
c nmr
(100mhz,dmso-d6)δ182.2,165.6,163.9,163.7,161.2,159.5,157.3,157.1,134.7,132.3,130.6,129.2,126.5,121.6,121.5,115.5,115.3,112.9,105.5,105.3,98.8,93.7,67.2,39.5.
19
f nmr(376mhz,dmso-d6)δ-118.60.hrms(esi)m/z:[m+h]
+
:406.1085；found:406.1080.
[0082]
ygt-18：1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.52(d,j＝6.3hz,1h),7.97(d,j＝6.2hz,2h),7.61
–
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–
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13
c nmr(100mhz,dmso-d6)δ182.1,174.0,166.9,163.7,163.5,161.2,157.2,132.2,130.6,129.2,126.4,105.4,105.3,98.8,93.6,67.0,47.6,17.2.hrms(esi)m/z:[m+h]
+
:384.1078；found:384.1078.
[0083]
ygt-19：1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.47(d,j＝7.9hz,1h),8.07(d,j＝7.2hz,2h),7.65
–
7.54(m,4h),7.02(s,1h),6.77(s,1h),6.43(s,1h),4.73(s,2h),4.47
–
4.37(m,1h),2.48
–
2.39(m,1h),2.08
–
2.03(m,1h),2.01(s,3h),1.26
–
1.17(m,2h).
13
c nmr(100mhz,dmso-d6)δ182.1,173.0,167.1,163.7,163.6,161.1,157.2,132.2,130.6,129.2,126.4,105.4,105.3,98.9,93.6,67.0,50.7,30.4,29.8,14.5.hrms(esi)m/z:[m+h]
+
:444.1111；found:444.1111.
[0084]
ygt-20：1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.49(d,j＝8.2hz,1h),8.06(d,j＝7.5hz,2h),7.64
–
7.53(m,3h),7.01(s,1h),6.75(s,1h),6.40(s,1h),4.77(s,2h),4.31
–
4.24(m,1h),2.17
–
2.07(m,1h),0.91(d,j＝7.2hz,6h).
13
c nmr(100mhz,dmso-d6)δ182.1,171.8,167.3,163.9,163.5,161.2,157.1,132.2,130.6,129.1,126.4,105.4,105.2,98.6,93.6,66.7,57.2,29.9,19.0.hrms(esi)m/z:[m+h]
+
:412.3191；found:412.3191.
[0085]
ygt-21：1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.29(d,j＝8.3hz,1h),8.00(d,j＝7.1hz,2h),7.60
–
7.48(m,3h),6.95(s,1h),6.71(s,1h),6.37(s,1h),4.75(s,2h),4.32
–
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–
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–
1.13(m,1h),0.89(d,j＝6.7hz,3h),0.85(t,j＝7.3hz,3h).
13
c nmr(100mhz,dmso-d6)δ182.0,172.8,167.0,163.8,163.5,161.2,157.1,132.1,130.5,129.1,126.4,105.4,105.2,98.7,93.5,66.9,56.2,36.5,24.8,15.6,11.3.hrms(esi)m/z:[m+h]
+
:426.1547；found:426.1542.
[0086]
ygt-22：1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.18(d,j＝8.6hz,1h),7.98(d,j＝7.1hz,2h),7.60
–
7.47(m,3h),6.92(s,1h),6.73(s,1h),6.37(s,1h),4.79(s,2h),4.30(d,j＝8.6hz,1h),4.28
–
4.18(m,1h),1.11(d,j＝6.0hz,3h).
13
c nmr(100mhz,dmso-d6)δ182.1,172.0,167.6,163.7,163.6,161.3,157.2,132.3,130.6,129.2,126.5,105.4,105.3,98.8,93.7,67.0,66.5,57.7,20.7.hrms(esi)m/z:[m+h]
+
:414.1183；found:414.1183.
[0087]
ygt-23：1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.43(d,j＝8.0hz,1h),8.07(d,j＝7.3hz,2h),7.63-7.53(m,3h),7.03(s,1h),6.77(s,1h),6.43(s,1h),4.71(s,2h),4.36-4.28(m,1h),1.68-1.59(m,2h),1.59-1.50(m,1h),0.87(d,j＝5.6hz,3h),0.82(d,j＝5.7hz,3h).
13
c nmr(100mhz,dmso-d6)δ182.1,173.7,167.0,163.8,162.3,161.1,157.2,132.2,130.6,129.2,126.4,105.4,105.2,98.9,93.6,66.9,50.0,24.3,22.9,21.1.hrms(esi)m/z:[m+h]
+
:426.1547；found:426.1540.
[0088]
ygt-24：1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.12(s,1h),8.08(d,j＝7.7hz,2h),7.65-7.54(m,4h),7.02(s,1h),6.83(s,1h),6.43(s,1h),4.70(s,2h),4.13-4.07(m,1h),3.76-3.70
(m,1h),3.62-3.56(m,1h).
13
c nmr(100mhz,dmso-d6)δ182.1,172.3,166.4,163.6,161.2,157.2,132.2,130.5,129.2,126.5,105.4,105.3,98.7,93.7,67.1,61.8,54.8.hrms(esi)m/z:[m+h]
+
:400.1027；found:400.1025.
[0089]
ygt-25：1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.08(d,j＝7.2hz,2h),7.61-7.55(m,3h),7.35-7.28(m,5h),7.03(s,1h),6.80(s,1h),6.42(s,1h),4.97(s,2h),4.69(s,2h),4.16-4.09(m,1h),2.95-2.90(m,2h),1.80-1.70(m,1h),1.70-1.59(m,1h),1.40-1.34(m,2h),1.28-1.19(m,4h).
13
c nmr(100mhz,dmso-d6)δ182.1,173.6,166.3,163.7,163.6,161.2,157.2,156.1,137.3,132.2,130.6,129.2,128.3,127.7,127.3,126.5,105.4,105.3,98.8,93.7,67.1,65.1,52.6,31.2,29.8,29.2,22.6.hrms(esi)m/z:[m+h]
+
:575.2024；found:575.2020.
[0090]
ygt-26：1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.21(s,1h),8.06(d,j＝6.6hz,2h),7.68
–
7.47(m,3h),7.02(s,1h),6.78(s,1h),6.41(s,1h),4.62(s,2h),3.16
–
3.05(m,2h),1.58
–
1.37(m,2h),0.84(t,j＝7.0hz,3h).
13
c nmr(100mhz,dmso-d6)δ182.1,166.6,163.7,163.5,161.3,157.2,132.2,130.6,129.2,126.4,105.4,105.3,98.8,93.5,67.2,42.5,22.4,11.4.hrms(esi)m/z:[m+h]
+
:354.1336；found:354.1333.
[0091]
ygt-27：1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.18(s,1h),8.07(d,j＝7.2hz,2h),7.65
–
7.52(m,3h),7.03(s,1h),6.79(s,1h),6.42(s,1h),4.62(s,2h),3.17
–
3.10(m,2h),1.46
–
1.38(m,2h),1.30
–
1.23(m,2h),0.85(t,j＝7.2hz,3h).
13
c nmr(100mhz,dmso-d6)δ182.1,166.6,163.7,163.5,161.1,157.2,132.2,130.6,129.2,126.4,105.4,105.3,98.9,93.6,67.2,38.0,31.2,19.5,13.7.hrms(esi)m/z:[m+h]
+
:368.1492；found:368.1490.
[0092]
ygt-28：1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.16(s,1h),8.08(d,j＝7.5hz,2h),7.65
–
7.54(m,3h),7.05(s,1h),6.80(s,1h),6.43(s,1h),4.63(s,2h),3.16
–
3.07(m,2h),1.48
–
1.38(m,2h),1.21(s,4h),0.81(t,j＝6.7hz,3h).
13
c nmr(100mhz,dmso-d6)δ182.1,166.6,163.7,163.6,161.1,157.2,132.2,130.6,129.2,126.5,105.4,105.3,98.9,93.6,67.3,38.3,28.8,28.6,21.9,13.9.hrms(esi)m/z:[m+h]
+
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[0093]
ygt-29：1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.28(s,1h),8.08(d,j＝7.4hz,2h),7.64
–
7.53(m,3h),7.04(s,1h),6.81(s,1h),6.44(s,1h),4.64(s,2h),3.07
–
3.00(m,2h),0.96(s,1h),0.40(d,j＝7.5hz,2h),0.19(d,j＝4.2hz,2h).
13
c nmr(100mhz,dmso-d6)δ182.1,166.6,163.7,163.5,161.2,157.2,132.2,130.6,129.2,126.5,105.4,105.3,98.8,93.6,67.2,42.7,10.9,3.3.hrms(esi)m/z:[m+h]
+
:366.1336；found:366.1332.
[0094]
ygt-30：1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.22(s,1h),8.09(d,j＝7.0hz,2h),7.67
–
7.54(m,3h),7.05(s,1h),6.80(s,1h),6.43(s,1h),4.59(s,2h),2.77
–
2.64(m,1h),0.71
–
0.60(m,2h),0.57
–
0.44(m,2h).
13
c nmr(100mhz,dmso-d6)δ182.2,167.9,163.8,163.6,161.1,157.2,132.3,130.6,129.2,126.5,105.5,105.3,98.8,93.6,67.2,22.2,5.6.hrms(esi)m/z:[m+h]
+
:352.1179；found:352.1177.
[0095]
ygt-31：1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.85(t,j＝5.6hz,1h),8.09(d,j＝7.6hz,2h),7.67
–
7.56(m,5h),7.49(d,j＝7.9hz,2h),7.07(s,1h),6.84(s,1h),6.47(s,1h),4.75(s,2h),4.44(d,j＝5.6hz,2h).
13
c nmr(100mhz,dmso-d6)δ182.1,167.2,163.6,161.1,157.2,144.1,132.2,130.6,129.2,127.9,126.5,125.12,125.08,125.04,105.5,105.3,99.0,
93.6,67.2,41.6.
19
f nmr(376mhz,dmso-d6)δ-60.74.hrms(esi)m/z:[m+h]
+
:470.1210；found:470.1207.
[0096]
ygt-32：1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.81(t,j＝4.9hz,1h),8.12
–
8.05(m,2h),7.71(d,j＝7.6hz,1h),7.61(t,j＝7.0hz,4h),7.50(d,j＝7.8hz,1h),7.46(t,j＝7.4hz,1h),7.06(s,1h),6.85(s,1h),6.48(s,1h),4.80(s,2h),4.55(d,j＝4.9hz,2h).
13
c nmr(100mhz,dmso-d6)δ182.1,167.3,163.7,161.1,157.2,137.2,132.6,132.2,130.6,129.2,128.4,127.4,126.5,126.3,126.0,125.80,125.75,125.69,125.64,105.5,105.3,98.9,93.6,67.1,38.5.
19
f nmr(376mhz,dmso-d6)δ-58.96.hrms(esi)m/z:[m+h]
+
:470.1210；found:470.1207.
[0097]
ygt-33：1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.84(s,1h),8.07(d,j＝7.1hz,2h),7.75(s,1h),7.68(d,j＝8.4hz,1h),7.65
–
7.50(m,4h),7.03(s,1h),6.82(s,1h),6.46(s,1h),4.78(s,2h),4.51(d,j＝4.8hz,2h).
13
c nmr(100mhz,dmso-d6)δ182.1,167.4,163.6,161.1,157.2,136.4,132.5,132.2,132.0,130.7,130.5,129.1,128.3,128.0,127.7,127.4,126.4,125.8,125.7,125.64,125.58,124.8,122.1,105.4,105.3,98.9,93.6,67.1,38.2.
19
f nmr(376mhz,dmso-d6)δ-59.35.hrms(esi)m/z:[m+h]
+
:504.0820；found:504.0817.
[0098]
ygt-34：1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.80(t,j＝5.6hz,1h),8.09(d,j＝7.8hz,2h),7.67
–
7.56(m,3h),7.50(t,j＝8.0hz,1h),7.25(d,j＝10.5hz,1h),7.14(d,j＝8.2hz,1h),7.08(s,1h),6.83(s,1h),6.47(s,1h),4.75(s,2h),4.36(d,j＝5.8hz,2h).
[0099]
ygt-35：1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.75(s,1h),8.08(d,j＝7.1hz,2h),7.67
–
7.55(m,3h),7.36(t,j＝9.2hz,2h),7.22(d,j＝8.2hz,1h),7.05(s,1h),6.81(s,1h),6.45(s,1h),4.72(s,2h),4.37(d,j＝5.4hz,2h).
13
c nmr(100mhz,dmso-d6)δ182.1,167.2,163.6,161.1,158.6,157.2,132.4,132.3,132.2,130.93,130.88,130.6,129.2,126.5,125.1,125.0,124.49,124.46,115.8,115.6,105.5,105.3,98.9,93.6,67.2,35.4.
19
f nmr(376mhz,dmso-d6)δ-115.60.hrms(esi)m/z:[m+h]
+
:454.0852；found:454.0849.
[0100]
ygt-36：1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.72(s,1h),8.06(d,j＝7.0hz,2h),7.64
–
7.53(m,3h),7.34(t,j＝7.9hz,1h),7.28(t,j＝6.3hz,1h),7.19
–
7.09(m,2h),7.03(s,1h),6.80(s,1h),6.44(s,1h),4.73(s,2h),4.41(d,j＝5.4hz,2h).
13
c nmr(100mhz,dmso-d6)δ182.1,167.1,163.7,163.5,161.2,161.1,158.8,157.2,132.2,130.5,129.6,129.5,129.1,129.0,128.9,126.4,125.8,125.6,124.3,115.2,114.9,105.4,105.3,98.9,93.6,67.2,35.7,35.7.
19
f nmr(376mhz,dmso-d6)δ-118.78.hrms(esi)m/z:[m+h]
+
:420.1237；found:420.1238.
[0101]
ygt-37：1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.77(t,j＝6.8hz,1h),8.07(d,j＝7.0hz,2h),7.71(s,1h),7.67
–
7.54(m,5h),7.03(s,1h),6.80(s,1h),6.45(s,1h),4.74(s,2h),4.42(d,j＝6.1hz,2h).
13
c nmr(100mhz,dmso-d6)δ182.0,167.2,163.6,163.5,161.0,157.1,139.3,133.0,132.0,131.3,130.5,129.0,128.9,126.54,126.48,126.3,126.2,105.4,105.3,98.8,93.4,67.1,40.9.hrms(esi)m/z:[m+h]
+
:504.0820；found:504.0820.
[0102]
ygt-38：1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.27(s,1h),8.60(s,1h),8.09(d,j＝6.6hz,2h),7.68
–
7.55(m,3h),7.09(s,1h),7.07
–
7.04(m,2h),6.82(s,1h),6.68(d,j＝8.3hz,
2h),6.46(s,1h),4.69(s,2h),4.24(d,j＝5.6hz,2h).
13
c nmr(100mhz,dmso-d6)δ182.1,166.7,163.7,163.6,161.2,157.3,156.4,132.2,130.6,129.3,129.2,128.7,126.5,115.0,105.5,105.3,98.9,93.6,67.2,41.6.hrms(esi)m/z:[m+h]
+
:418.1285；found:418.1285.
[0103]
ygt-39：1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.68(s,1h),8.06(d,j＝7.3hz,2h),7.64
–
7.52(m,3h),7.27(d,j＝8.1hz,2h),7.18(d,j＝8.1hz,2h),7.02(s,1h),6.80(s,1h),6.44(s,1h),4.71(s,2h),4.32(d,j＝5.6hz,2h),1.19(s,9h).
13
c nmr(100mhz,dmso-d6)δ182.1,166.8,163.6,163.5,161.1,157.2,149.2,136.1,132.2,130.5,129.1,127.1,126.4,124.9,105.4,105.3,99.0,93.5,67.2,41.6,34.1,31.1.hrms(esi)m/z:[m+h]
+
:458.1962；found:458.1967.
[0104]
ygt-40：1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.59(s,1h),8.06(d,j＝7.4hz,2h),7.65
–
7.53(m,3h),7.15(d,j＝7.8hz,2h),7.08(d,j＝7.8hz,2h),7.00(s,1h),6.78(s,1h),6.45(s,1h),4.70(s,2h),4.31(d,j＝5.9hz,2h),2.22(s,3h).
13
c nmr(100mhz,dmso-d6)δ181.9,166.6,163.6,163.5,161.0,157.1,136.0,135.7,132.0,130.5,129.0,128.6,127.1,126.3,105.4,105.2,98.8,93.5,67.2,41.6,20.4.hrms(esi)m/z:[m+h]
+
:416.1492；found:416.1490.
[0105]
ygt-41：1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.61(s,1h),8.05(d,j＝7.7hz,2h),7.65
–
7.53(m,3h),7.20
–
7.12(m,1h),7.08
–
6.98(m,4h),6.79(s,1h),6.46(s,1h),4.72(s,2h),4.33(d,j＝5.5hz,2h),2.23(s,3h).
13
c nmr(100mhz,dmso-d6)δ181.9,166.7,163.6,163.5,161.0,157.1,138.9,137.2,132.0,130.5,129.0,128.0,127.7,127.3,126.3,124.2,105.3,105.2,98.8,93.5,67.2,41.7,20.7.hrms(esi)m/z:[m+h]
+
:416.1492；found:416.1491.
[0106]
ygt-42：1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.65(t,j＝6.6hz,1h),8.07(d,j＝7.5hz,2h),7.66
–
7.56(m,3h),7.33
–
7.19(m,5h),7.02(s,1h),6.81(s,1h),6.47(s,1h),4.73(s,2h),4.37(d,j＝5.5hz,2h).
13
c nmr(100mhz,dmso-d6)δ181.9,166.7,163.6,163.5,161.0,157.1,139.0,132.0,130.5,129.0,128.1,127.1,126.7,126.3,105.4,105.2,98.8,93.5,67.2,41.8.hrms(esi)m/z:[m+h]
+
:402.1336；found:402.1333.
[0107]
ygt-43：1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.76(s,1h),8.04(d,j＝6.9hz,2h),7.66
–
7.49(m,7h),6.99(s,1h),6.78(s,1h),6.45(s,1h),4.74(s,2h),4.46(d,j＝5.2hz,2h).
13
c nmr(100mhz,dmso-d6)δ181.9,167.1,163.5,161.1,157.1,140.6,132.0,131.3,130.5,129.1,129.0,128.8,126.3,125.4,123.60,123.57,123.41,123.37,122.7,105.3,98.8,93.4,67.2,41.4.
19
f nmr(376mhz,dmso-d6)δ-61.09.hrms(esi)m/z:[m+h]
+
:470.1210；found:470.1207.
[0108]
ygt-44：1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.57(s,1h),8.07(d,j＝7.0hz,2h),7.64
–
7.56(m,3h),7.20(d,j＝8.4hz,2h),7.02(s,1h),6.84(d,j＝8.5hz,2h),6.80(s,1h),6.45(s,1h),4.70(s,2h),4.29(d,j＝5.9hz,2h),3.68(s,3h).
13
c nmr(100mhz,dmso-d6)δ181.9,166.6,163.6,163.5,161.0,158.2,157.1,132.0,131.0,130.5,129.0,128.5,126.3,113.5,105.4,105.2,98.8,93.5,67.2,54.9,41.3.hrms(esi)m/z:[m+h]
+
:432.1442；found:432.1437.
[0109]
ygt-45：1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.74(s,1h),8.12(d,j＝7.6hz,2h),7.71
–
7.59(m,3h),7.43
–
7.33(m,1h),7.17(d,j＝7.5hz,1h),7.13
–
7.03(m,3h),6.86(s,1h),6.52(s,1h),4.80(s,2h),4.43(d,j＝5.9hz,2h).
13
c nmr(100mhz,dmso-d6)δ181.9,167.0,163.6,163.3,161.0,160.9,157.1,142.0,132.0,130.5,130.0,129.9,129.0,126.3,123.1,113.8,113.6,113.5,113.3,105.4,105.2,98.9,93.5,67.2,41.3.
19
f nmr(376mhz,dmso-d6)δ-113.47.hrms(esi)m/z:[m+h]
+
:420.1242；found:420.1242.
[0110]
ygt-46：1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.66(s,1h),8.07(d,j＝6.6hz,2h),7.76
–
7.55(m,3h),7.45
–
7.27(m,2h),7.21
–
7.05(m,2h),7.01(s,1h),6.80(s,1h),6.46(s,1h),4.71(s,2h),4.35(d,j＝7.9hz,2h).
13
c nmr(100mhz,dmso-d6)δ181.9,166.8,163.6,162.4,161.0,159.9,157.1,135.3,132.0,130.5,129.2,129.0,126.3,114.9,114.7,105.4,105.2,98.8,93.5,67.2,41.1.
19
f nmr(376mhz,dmso-d6)δ-115.98.hrms(esi)m/z:[m+h]
+
:420.1242；found:420.1242.
[0111]
ygt-47：1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.77(s,1h),8.13
–
8.00(m,2h),7.82
–
7.69(m,2h),7.66
–
7.54(m,3h),7.52
–
7.40(m,2h),7.01(s,1h),6.81(s,1h),6.46(s,1h),4.74(s,2h),4.44(d,j＝5.9hz,2h).
13
c nmr(100mhz,dmso-d6)δ181.9,167.1,163.5,161.1,157.1,144.9,132.0,130.5,129.0,128.0,126.3,118.6,109.6,105.4,105.3,98.8,93.5,67.2,41.6.hrms(esi)m/z:[m+h]
+
:427.1288；found:427.1288.
[0112]
ygt-48：1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.62(s,1h),8.04(d,j＝7.3hz,2h),7.64
–
7.53(m,3h),7.19(t,j＝7.8hz,1h),6.99(s,1h),6.85(d,j＝7.6hz,1h),6.82(s,1h),6.80
–
6.74(m,2h),6.45(s,1h),4.72(s,2h),4.35(d,j＝6.0hz,2h),3.68(s,3h).
13
c nmr(100mhz,dmso-d6)δ181.9,166.8,163.6,163.5,161.0,159.2,157.1,140.6,132.0,130.5,129.1,129.0,126.3,119.3,112.9,112.1,105.3,105.2,98.8,93.4,67.2,54.8,41.7.hrms(esi)m/z:[m+h]
+
:432.1442；found:432.1430.
[0113]
ygt-49：1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.82(s,1h),8.06(d,j＝7.5hz,2h),7.94
–
7.87(m,3h),7.66
–
7.54(m,3h),7.02(s,1h),6.80(s,1h),6.45(s,1h),4.77(s,2h),4.54(d,j＝5.7hz,2h).
13
c nmr(100mhz,dmso-d6)δ182.0,167.4,163.6,163.5,161.1,157.2,142.8,132.0,130.6,130.5,130.2,129.9,129.6,129.0,127.9,126.3,124.5,121.8,120.4,105.3,98.8,93.3,67.2,41.1.
19
f nmr(376mhz,dmso-d6)δ-61.36.hrms(esi)m/z:[m+h]
+
:538.1084；found:538.1084.
[0114]
实施例2：黄酮类化合物的活性
[0115]
(1)tr-fret实验检测本发明黄酮类化合物与pparγ的结合能力
[0116]
具体步骤包括：
[0117]
a.将本发明黄酮类化合物分别用dmso稀释到1mmol/l；dmso作为阴性对照，罗格列酮(rosi)作为阳性对照。
[0118]
b.将稀释好的溶液，用tr-fret buffer再次稀释到200μmol/l。
[0119]
c.以tr-fret buffer为溶剂准备fluormone tm pan-ppar green solution(20nmol/l)。
[0120]
d.以tr-fret buffer为溶剂准备20nmol/l的tb anti-gst antibody和2nmol/l的pparl-lbd protein。
[0121]
e.将20μl步骤b的溶液，10μl步骤c的溶液和10μl步骤d的溶液混合在384孔板中，震荡6小时。
[0122]
f.在酶标仪上读数，结果见表2。
[0123]
g.以化合物ygt-31为例，观察其在不同浓度下与pparγ结合能力，结果见图1。
[0124]
表2
[0125]
化合物100μm化合物100μm化合物100μmygt-10.33ygt-180.55ygt-350.44ygt-20.28ygt-190.64ygt-360.31ygt-30.64ygt-200.51ygt-370.31ygt-40.34ygt-210.54ygt-380.38ygt-50.65ygt-220.62ygt-390.38ygt-60.26ygt-230.63ygt-400.55ygt-70.58ygt-240.55ygt-410.30ygt-80.58ygt-250.36ygt-420.47ygt-90.28ygt-260.41ygt-430.34ygt-100.69ygt-270.29ygt-440.29ygt-110.59ygt-280.27ygt-450.26ygt-120.38ygt-290.27ygt-460.29ygt-130.52ygt-300.59ygt-470.26ygt-140.23ygt-310.22ygt-480.28ygt-150.48ygt-320.21ygt-490.24ygt-160.56ygt-330.18dmso1.02ygt-170.32ygt-340.30rosi0.16
[0126]
由表2和图1可见，本发明的黄酮类化合物与pparγ有较强的结合能力，其中化合物ygt-31与pparγ的ic
50
和ki分别为1.72μm和0.62μm。
[0127]
(2)荧光素酶活性测定法检测本发明黄酮类化合物对pparγ的激活能力
[0128]
cos-7细胞购自atcc(crl-1651)，培养于10％fbs无抗生素dmem，37℃，5％co2孵育箱中。待细胞进入对数生长期接种于24孔板中，细胞融合约70％时，按照lipofectamine2000(invitrogen)操作说明进行质粒共转染(50ng全长hpparγ，100ng pparγ，5ng海肾荧光素酶质粒)。细胞转染24h后分别用1μmol/l、10μmol/l的本发明黄酮类化合物进行干预，其中1μmol/l、10μmol/l罗格列酮作为阳性对照，dmso作为阴性对照。干预24h后按reporter luciferase assay kits(promega)操作说明测定荧光素酶活性，每组设定3个独立测试孔。结果见表3和图2。
[0129]
表3
[0130]
化合物10μm(％)化合物10μm(％)dmso0ygt-2822.39rosi100ygt-2917.01ygt-114.51ygt-3121.86ygt-417.56ygt-3217.25
ygt-2135.43ygt-4125.56ygt-2520.95ygt-4338.20ygt-2621.02
ꢀꢀ
[0131]
如表3和图2所示，与罗格列酮完全激活pparγ(100％)功能不同，本发明的黄酮类化合物仅微弱的激活pparγ(低至14.51％)。
[0132]
(3)油红染色检测本发明黄酮类化合物诱导脂肪细胞分化能力
[0133]
3t3-l1前脂肪细胞购自atcc(crl-1651)，培养于含青霉素-链霉素双抗的10％fbs dmem，37℃，5％co2孵育箱中。接种于培养板，汇合后2d加入诱导液(10％fbs dmem含0.5μmol/l ibmx(3-异丁基-1-甲基黄嘌呤)，1μmol/l dex(地塞米松)，850nmol/l胰岛素)。72h后换成含850nmol/l胰岛素及10％胎牛血清的dmem培养基，每2d换一次。10μmol/l罗格列酮作为阳性对照，dmso作为阴性对照，样品组为10μmol/l本发明黄酮类化合物。诱导开始第八天进行油红o染色，显微镜(olympus)拍照，并计算脂肪细胞分化率，结果见表4和图3。由表4和图3可知，与罗格列酮较强的诱导脂肪细胞分化作用(脂肪细胞分化率89.21％)相比，本发明黄酮类化合物并不显著诱导脂肪细胞的分化(脂肪细胞分化率仅10.81％)。
[0134]
表4
[0135]
化合物脂肪细胞分化率(％)化合物脂肪细胞分化率(％)dmso6.27ygt-2815.39rosi89.21ygt-2919.75ygt-116.54ygt-3110.81ygt-418.83ygt-3220.93ygt-2111.52ygt-4116.63ygt-2511.43ygt-4310.60ygt-2616.37
ꢀꢀ
[0136]
(4)实时荧光定量pcr测定本发明黄酮类化合物诱导成脂基因的表达
[0137]
按照检测方法(3)诱导分化3t3-l1前脂肪细胞，提取细胞总rna，按照试剂盒(takara)的方案进行实时荧光定量pcr，应用δδ-ct的方法，以β-actin为内参，计算mrna的相对表达，结果见表5和图4。由表5和图4可知，与罗格列酮相比，本发明的黄酮类化合物仅微弱的激活pparγ及其下游成脂基因(包括ap2、cd36、c/ebpα)的表达，并且本发明的黄酮类化合物能够促进胰岛素敏感性相关基因如glut4和adiponectin的表达。
[0138]
表5
[0139]
化合物pparγap2cd36c/ebpαglut4adiponectindmso1.001.001.001.001.001.00rosi6.688.593.476.305.335.97ygt-11.431.041.331.391.861.77ygt-41.521.191.121.331.962.31ygt-211.251.581.181.271.882.05ygt-251.361.241.391.262.312.05ygt-281.371.411.541.572.382.16ygt-291.561.631.591.312.662.42
ygt-311.531.251.061.373.464.58ygt-411.211.161.461.291.921.90
[0140]
(5)在db/db模型鼠中检测本发明黄酮类化合物的降糖效果
[0141]
具体步骤如下：购买六周的db/db模型鼠，随机分组。腹腔注射溶剂对照组(vehicle：1.5％dmf+2％吐温80+30％peg300+66.5％磷酸盐缓冲溶液的混合溶剂)，本发明黄酮类化合物给药组(10mg/kg，20mg/kg)，阳性对照组硝酸芬替康唑(fn，20mg/kg，cn 113209091a)。同时设置一组正常的野生小鼠(wt,wild type)作为对照组，给予腹腔注射1.5％dmf+2％吐温80+30％peg300+66.5％磷酸盐缓冲溶液的混合溶剂。按每天给药一次，三周后检测各实验组小鼠空腹血糖，空腹体重以及糖耐量水平，结果见图5。由图5可见，与db小鼠的溶剂对照组vehicle相比，本发明的黄酮类化合物具有与阳性药物fn相当的降糖效果，并且没有引起小鼠体重的增加，而且在20mg/kg的剂量作用下，还具有减轻体重的作用。
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综上，本发明的黄酮类化合物与pparγ具有较强结合力，可改善胰岛素敏感性，从而实现高效降糖的目的；同时，本发明的黄酮类化合物仅微弱的激活pparγ，并不显著诱导脂肪细胞的分化、pparγ下游成脂基因的表达，因此不存在现有的pparγ激动剂存在的会使pparγ完全激动，产生肥胖、心脏肥大等副作用的问题，且由小鼠模型实验也可以证明本发明的黄酮类化合物可有效降低小鼠空腹血糖并且不引起体重的增加。
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因此，本发明黄酮类化合物可应用于制备抗糖尿病药物中，可显著降低血糖，且不会引起体重的增加，不会引起类似噻唑烷二酮类药物的副作用。同时，本发明的黄酮类化合物可作为pparγ选择性调控剂发挥抗ii型糖尿病效应，在不引起诸如脂肪细胞分化、体重增加、肝毒性等pparγ完全激动剂所造成的副作用的基础上，能够明显改善血糖水平，是具有“高效安全”降糖作用的潜力药物先导化合物。
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本发明黄酮类化合物还可以用于制备治疗和/或预防受pparγ核受体调节的疾病的药物中。本发明的黄酮类化合物与pparγ具有较强结合能力，其ic
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和ki分别低至1.72μm和0.62μm，且该黄酮类化合物仅微弱的激活pparγ及诱导脂肪细胞分化，有望开发成为新型的pparγ选择性调控剂，作为pparγ小分子调控剂，从而发挥降糖等作用，并且不会引起类似噻唑烷二酮类药物的副作用。
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上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。