一种灭活BK病毒及其用途的制作方法

本发明涉及生物领域，具体地，本发明涉及一种灭活bk病毒及其用途。

背景技术：

1、bk病毒是指bk virus，简称bkv，bk病毒(bkv)属多瘤病毒家族成员。bkv是一种潜伏感染的机会性病毒，成人血浆bkv抗体阳性率达90％以上，儿童感染率高达60％以上。bkv在健康人群中不致病，多为潜伏感染，但在免疫低下人群中(器官移植术后免疫抑制剂服用者、hiv感染者、孕妇和老人、白血病、化疗患者等)易活化且造成严重后果，例如引起1-10％的肾移植患者发生bkv相关肾病，若未能及时治疗易引起肾失功；引起50-100％的造血干细胞移植患者发生bkv尿症，并增加患出血性膀胱炎的概率；bkv增加一些肿瘤(膀胱癌、肾癌等)的发生率。目前，临床上尚无有效的预防或治疗bkv的药物，降低免疫抑制强度作为唯一可行的疗法又带来很大的器官排斥风险。因此，开发bkv疫苗对于预防bkv的感染和活化具有重要意义。

2、因此，本领域需要开发一种能够有效预防bk病毒的疫苗。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种能够有效治疗和预防bk病毒的疫苗。

2、本发明第一方面提供一种灭活bk病毒。

3、优选地，所述的灭活bk病毒的bk病毒来源包括：从临床bk病毒阳性患者的尿液获得bk病毒。

4、优选地，所述的灭活bk病毒包括经β-丙内酯处理bk病毒得到的灭活bk病毒。

5、本发明第二方面提供一种制备如本发明第一方面所述的灭活bk病毒的方法，所述的方法包括：

6、(1)制备bk病毒原液；

7、(2)向所述bk病毒原液中加入β-丙内酯处理，得到灭活bk病毒。

8、优选地，所述的步骤(1)包括：

9、(1.1)将bk病毒基因转染到tccsup细胞中，在培养基中培养，收集上清液，得到bk病毒原液。

10、优选地，所述的步骤(1)包括：

11、(1.1)将bk病毒基因转染到tccsup细胞中，在培养基中培养，收集上清液后，再将所述上清液加入到vero-e6细胞中，在培养基中扩大培养，收集上清液，得到bk病毒原液。

12、优选地，所述的bk病毒基因的制备方法包括：

13、采用正向引物和反向引物对bk病毒基因组进行扩增，得到bk病毒基因。

14、优选地，所述的bk病毒基因包括环状基因。

15、优选地，所述的bk病毒基因的制备方法包括：

16、采用正向引物和反向引物对bk病毒基因组进行扩增后，对得到的线性化bk病毒基因连成环状基因，得到bk病毒基因。

17、优选例，所述的正向引物的核苷酸序列如seq id no:1所示。

18、优选例，所述的反向引物的核苷酸序列如seq id no:2所示。

19、优选地，所述的bk病毒基因的制备方法包括：

20、在bk病毒基因组中单一bamhi限制性内切酶位点区域设计扩增bk病毒全长的正向引物和反向引物，通过pcr扩增获得两端均含bamhi酶切位点的bk病毒线性基因组全长，然后将线性化基因组连接至pblunt载体质粒(pblunt-bkv)上，转化至dh5a大肠杆菌感受态中，培养，收集菌液，抽提pblunt-bkv质粒，抽取得到的pblunt-bkv质粒用bamhi酶切后，经电泳分离，得到线性化bk病毒基因组，经t4连接酶进行连接后，线性化bk病毒基因组连成环状基因组，得到bk病毒基因。

21、优选地，所述的(1.1)中，所述培养的时间为5-7d。

22、优选地，所述的(1.1)中，收集上清液经纯化处理得到bk病毒原液。

23、优选地，所述的纯化处理包括离心、过滤和/或超滤。

24、优选地，所述的步骤(2)中，所述处理的温度为30-37℃，较佳地37℃。

25、优选地，所述的步骤(2)中，所述处理的时间为1-3h，较佳地1.5-2.5h，更佳地1.8-2.2h，最佳地2h。

26、优选地，所述的步骤(2)中，得到灭活bk病毒经超离浓缩、纯化得到灭活bk病毒。

27、本发明第三方面提供一种组合物，所述的组合物包括如本发明第一方面所述的灭活bk病毒。

28、优选地，所述的组合物为药物组合物或疫苗组合物。

29、优选地，所述的组合物还包括药学上或疫苗上可接受的载体。

30、优选地，所述的组合物还包括免疫佐剂。

31、优选地，所述的免疫佐剂包括铝佐剂和/或cpg佐剂。

32、优选地，所述的组合物中，所述灭活bk病毒的蛋白量与所述cpg佐剂的量的质量比例为1:0.5-5，较佳地1:1-2，更佳地1:1.3-1.7，最佳地1:1.5。

33、优选地，所述的组合物的剂型为固体制剂、液体制剂或半固体制剂。

34、优选地，所述的组合物的剂型为口服制剂、外用制剂或注射制剂。

35、优选地，所述的注射制剂为肌肉注射制剂或皮下注射制剂。

36、本发明第四方面提供一种如本发明第一方面所述的灭活bk病毒或如本发明第三方面提供所述的组合物的用途，用于制备预防和/或治疗bk病毒感染的制剂。

37、优选地，所述的制剂为药物制剂或疫苗制剂。

38、优选地，所述的制剂还包括药学上或疫苗上可接受的载体。

39、优选地，所述的制剂的剂型为固体制剂、液体制剂或半固体制剂。

40、优选地，所述的制剂的剂型为口服制剂、外用制剂或注射制剂。

41、优选地，所述的注射制剂为肌肉注射制剂或皮下注射制剂。

42、本发明第五方面提供一种预防和/或治疗bk病毒感染的方法，所述的方法包括给所需对象施用如本发明第一方面所述的灭活bk病毒或如本发明第三方面提供所述的组合物，从而预防和/或治疗bk病毒感染。

43、优选地，所述的对象为人或非人哺乳动物。

44、优选地，所述的非人哺乳动物细胞包括灵长类动物、狗、猫、猪、养、牛、马、大象、熊猫。

45、在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。

技术特征：

1.一种灭活bk病毒。

2.如权利要求1所述的灭活bk病毒，其特征在于，所述的灭活bk病毒的bk病毒来源包括：从临床bk病毒阳性患者的尿液获得bk病毒。

3.一种制备如权利要求1所述的灭活bk病毒的方法，其特征在于，所述的方法包括：

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述的步骤(1)包括：

5.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述的步骤(1)包括：

6.如权利要求4或5所述的方法，其特征在于，所述的bk病毒基因的制备方法包括：

7.一种组合物，其特征在于，所述的组合物包括如权利要求1所述的灭活bk病毒。

8.一种如权利要求1所述的灭活bk病毒或如权利要求7所述的组合物的用途，其特征在于，用于制备预防和/或治疗bk病毒感染的制剂。

9.如权利要求8所述的用途，其特征在于，所述的制剂的剂型为口服制剂、外用制剂或注射制剂；

10.一种预防和/或治疗bk病毒感染的方法，其特征在于，所述的方法包括给所需对象施用如权利要求1所述的灭活bk病毒或如权利要求7所述的组合物，从而预防和/或治疗bk病毒感染。

技术总结
本发明涉及一种灭活BK病毒及其用途。具体地，本发明提供一种灭活BK病毒。本发明所述的灭活BK病毒能够用于制备有效预防和治疗BK病毒感染的疫苗，所述的灭活BK病毒疫苗可以引起高效的免疫应答，产生具有功能的BKV特异性CD4+T细胞、BKV壳蛋白特异性的结合抗体以及具有中和BKV病毒效果的中和抗体，从而能够有效地预防和治疗BK病毒感染。

技术研发人员：曹婧,李兰兰
受保护的技术使用者：非凡生命科学技术（昆山）有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/12