特异识别CD8α分子的高亲和力核酸适配体

本发明属于生物，涉及特异识别cd8α分子的高亲和力核酸适配体。

背景技术：

1、cd8(clusters of differentiation 8)分子，又名t淋巴细胞分化抗原8，是一类主要表达在细胞毒性t淋巴细胞和部分自然杀伤(nk)细胞表面的糖蛋白，是调控淋巴细胞发育、成熟和活化的关键分子之一。cd8+细胞毒性t淋巴细胞是机体细胞免疫系统中对抗肿瘤、慢性感染等疾病的重要细胞亚群，cd8+淋巴细胞的功能紊乱也会导致自身免疫疾病。

2、天然的cd8分子是双聚体，可由α亚基(分子量约为34-37kda)和β亚基(分子量约为32kda)组成同源二聚体(cd8αα)或异源二聚体(cd8αβ)。除作为淋巴细胞分型的标志物之外，cd8分子的重要生物学功能是，在t淋巴细胞表面的tcr识别mhc-ⅰ:肽复合体(pmhc)时，其作为共受体(co-receptor)与mhc分子的α3亚基结合，增强tcr与mhc-ⅰ:肽复合体(pmhc)结合的亲和力和稳定性，同时，cd8分子的α亚基胞内区可招募p56lck酪氨酸激酶，通过tcr/cd3复合体的酪氨酸磷酸化途径诱导t细胞激活和增殖，这一过程是cd8+细胞毒性t淋巴细胞活化、增殖、进而发挥特异性杀伤功能的分子生物学基础。

3、目前cd8分子在应用上主要集中在以下几个方面：(1)cd8+淋巴细胞计数(通常结合cd4+淋巴细胞)来评估机体的免疫状态、以及抗肿瘤或抗感染药物或治疗方法的效果；(2)自身免疫性疾病或移植排斥反应；以及目前的研究热点之一，(3)利用cd8抗体免疫磁珠分离人外周血cd8+淋巴细胞，并通过体外基因工程的方法构建car-t(chimeric antigenreceptor t-cell)细胞，用于肿瘤或相关疾病的治疗，这一疗法已经在血液肿瘤中取得了显著成绩。

4、在技术层面，目前对cd8分子及其阳性表达细胞的研究主要利用抗体技术。尽管抗体作为分子靶向技术领域的明星产品已经在众多领域得到了广泛的应用，但抗体技术本身存在一些固有缺点，如具有免疫原性、理化性质稳定性差、化学修饰困难、产品批次间的差异性高、生产成本高等。因此，寻找能够替代抗体的新型靶向分子(技术)仍然在生物学和医学应用上具有迫切的需求。

5、核酸适配体(aptamer)通常指一段可以和靶点高亲和力和高特异性结合的、具有3d结构的ssdna或rna序列。核酸适配体是利用一项体外筛选技术，即指数富集的配体系统进化(systematic evolution of ligands by exponential enrichment，selex)，从大容量随机核酸分子文库中得到的寡核苷酸片段。相比于抗体，核酸适配体具有许多应用上的优点，如，和靶点结合同样具有高亲和力与高特异性；核酸适配体的分子量小，易于穿透组织并快速被内化进入细胞；筛选获得的适配体易于体外大量合成，重复性好、稳定性高、易于贮存且生产成本低；同时，适配体易于化学修饰且活性不受影响等特点。综上，核酸适配体是一类极具临床应用价值的靶向分子。

技术实现思路

1、本发明一个目的是提供一种核酸适配体。

2、本发明提供的核酸适配体，为如下1)或2)：

3、1)序列1所示的单链dna分子；

4、2)将1)所示的单链dna分子的一端或中间接上信号分子和/或活性分子和/或功能基团和/放射性核素，得到与所述核酸适配体具有相同功能的核酸适配体。

5、上述核酸适配体中，2)所示的核酸适配体为在序列1所示的单链dna分子的5’端或3’端标记荧光基团、生物素基团或放射性核素。

6、上述核酸适配体在如下任一种或在制备具有如下任一种功能的产品中的应用也是本发明保护的范围：

7、1)检测或捕获cd8α蛋白；

8、2)特异结合cd8α蛋白；

9、3)检测或捕获cd8阳性表达的细胞；

10、4)特异结合cd8阳性表达的细胞；

11、5)检测或捕获淋巴细胞中cd8阳性表达的细胞；

12、6)检测或捕获待测样本中cd8阳性表达的细胞。

13、上述应用中，所述待测样本为外周血或来自于外周血的淋巴细胞。

14、本发明另一个目的是提供一种试剂盒。

15、本发明提供的试剂盒，其包括上述核酸适配体，还可以包括cd8蛋白抗体。

16、上述试剂盒具有如下任一种功能：

17、1)检测或捕获cd8α蛋白；

18、2)特异结合cd8α蛋白；

19、3)检测或捕获cd8阳性表达的细胞；

20、4)特异结合cd8阳性表达的细胞；

21、5)检测或捕获淋巴细胞中cd8阳性表达的细胞；

22、6)检测或捕获待测样本中cd8阳性表达的细胞。

23、上述试剂盒中，所述待测样本为外周血或来自于外周血的淋巴细胞。

24、本发明以人cd8α分子为靶点，利用selex技术筛选出一条可与cd8α分子高亲和力和特异性结合的核酸适配体序列(命名为序列1(seq 1)，其序列信息和二级结构特征见图1)，该序列能和人cd8α分子或cd8+表达细胞高亲和力、高特异性地结合。在实际应用中，可替代现有抗体技术，用于cd8+淋巴细胞计数(免疫状态评估)、靶向cd8+淋巴瘤的药物递送系统构建、以及从外周血分离高纯度cd8+淋巴细胞并用于构建car-t细胞治疗等应用。

技术特征：

1.一种核酸适配体，为如下1)或2)：

2.根据权利要求1所述的核酸适配体，其特征在于：

3.权利要求1或2所述的核酸适配体在如下任一种或在制备具有如下任一种功能的产品中的应用：

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：

5.一种试剂盒，其包括权利要求1或2所述的核酸适配体。

6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括cd8蛋白抗体。

7.根据权利要求5或6所述的试剂盒，其特征在于：

8.根据权利要求5-7中任一所述的试剂盒，其特征在于：所述待测样本为外周血或来自于外周血的淋巴细胞。

技术总结
本发明公开了特异识别CD8α分子的高亲和力核酸适配体。本发明提供了一种核酸适配体，为如下1)或2)：1)序列1所示的单链DNA分子；2)将1)所示的单链DNA分子的一端或中间接上信号分子和/或活性分子和/或功能基团和/放射性核素，得到与所述核酸适配体具有相同功能的核酸适配体。本发明筛选出一条可与CD8α分子高亲和力和特异性结合的核酸适配体序列，该序列能和人CD8α分子或CD8+表达细胞高亲和力、高特异性地结合。在实际应用中，可替代现有抗体技术，用于CD8+淋巴细胞计数、靶向CD8+淋巴瘤的药物递送系统构建、以及从外周血分离高纯度CD8+淋巴细胞并用于构建CAR‑T细胞治疗等应用。

技术研发人员：孙红光,马艳,孟阳
受保护的技术使用者：新疆医科大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13