一种胶原结合域融合CCL14重组蛋白及其应用

本发明属于生物医药，具体涉及一种胶原结合域融合ccl14重组蛋白及其应用。

背景技术：

1、肿瘤是目前人类健康的首要威胁，2021年全球新发癌症病例1929万例，其中男性1006万例，女性923万例；2021年全球癌症死亡病例996万例，其中男性553万例，女性443万例。由于对肿瘤的机制了解尚不充分，肿瘤患者的生存率不容乐观，因此肿瘤的治疗是当今科学界关注的重点问题之一。

2、相较于传统治疗方法，肿瘤的免疫治疗是近年来兴起的针对肿瘤的有效治疗手段，比如通过靶向免疫检查点pd-1(programmed cell death protein-1，程序性细胞死亡蛋白-1)作为治疗策略对肿瘤进行治疗，取得了显著的进展。但是由于不同患者的肿瘤表型不同，肿瘤免疫治疗不能对所有患者都有作用，因此寻找新的免疫治疗靶点是非常重要的。

3、趋化因子是可以引起肿瘤微环境改变的一类重要细胞因子，同时也是细胞因子中最庞大的亚族，因为其具备的定向趋化细胞的能力，所以成为了调节肿瘤微环境的关键因子。肿瘤微环境是肿瘤细胞和宿主免疫系统相互作用的主要场所，多种免疫细胞通过趋化因子和趋化因子受体之间的相互作用迁移到肿瘤微环境中，这些免疫细胞和趋化因子在肿瘤微环境中发挥的作用对肿瘤的发生发展和治疗结果有重要的影响。针对趋化因子展开的肿瘤免疫治疗已经取得较大进展，具有光明的发展前景。

4、ccl14是一种cc型趋化因子，在多种肿瘤数据库中它的高表达与肿瘤患者预后良好有关，这提示了ccl14可能具有抑癌功能。虽然ccl14被认为具有抑癌功能，但关于ccl14通过免疫系统发挥抑癌作用的研究尚不深入，只有寥寥几篇论文初步提及，如何将ccl14应该于肿瘤免疫治疗尚没有有效的技术。

技术实现思路

1、为解决上述技术问题，本发明提供了一种胶原结合域融合ccl14重组蛋白及其应用。

2、第一方面，本发明提供一种胶原结合域融合ccl14重组蛋白，氨基酸序列如seq idno.1所示。

3、第二方面，本发明提供所述重组蛋白的编码基因，核苷酸序列如seq id no.2所示。

4、第三方面，本发明提供含有所述基因的重组表达载体。

5、第四方面，本发明提供所述重组表达载体的构建方法包括以下步骤：

6、将seq id no.2所示基因序列用无缝克隆方法插入pcdna3.1质粒的多克隆位点ecor i和xho i之间。

7、第五方面，本发明提供所述重组蛋白的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

8、s1、将所述的重组表达载体转染至293f细胞，并进行培养；

9、s2、将培养七天的细胞离心，收集上清；将上清与his标签蛋白纯化试剂盒中的镍离子珠在4℃摇床共孵育3h，孵育后将上清加入层析柱，进行洗涤和洗脱，洗脱的蛋白用5kda孔径的透析袋透析，所得液体即胶原结合域融合ccl14重组蛋白。

10、第六方面，本发明提供所述重组蛋白、所述基因或所述重组表达载体在制备用于肿瘤免疫治疗的药物中的应用。

11、进一步的，所述所述肿瘤包括黑色素瘤。

12、本发明具有如下有益效果：

13、本发明创新性的将胶原结合域与趋化因子ccl14融合，使用重组蛋白对肿瘤进行治疗，取得了比单纯ccl14蛋白治疗更为显著的效果。因此，本发明为肿瘤免疫治疗提供了一种可行的，创新的，科学的方案。

技术特征：

1.一种胶原结合域融合ccl14重组蛋白，其特征在于，氨基酸序列如seq id no.1所示。

2.权利要求1所述重组蛋白的编码基因，其特征在于，核苷酸序列如seq id no.2所示。

3.含有权利要求2所述基因的重组表达载体。

4.权利要求3所述重组表达载体的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

5.权利要求1所述重组蛋白的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

6.权利要求1所述重组蛋白、权利要求2所述基因或权利要求3所述重组表达载体在制备用于肿瘤免疫治疗的药物中的应用。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述肿瘤包括黑色素瘤。

技术总结
本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种胶原结合域融合CCL14重组蛋白及其应用。所述重组蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，其编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明创新性的将趋化因子CCL14应用于肿瘤免疫治疗中。比起单纯的CCL14蛋白，小鼠经过重组蛋白治疗后，肿瘤重量更轻，肿瘤体积更小。因此，使用胶原结合域融合CCL14重组蛋白对肿瘤进行免疫治疗是一种可行的，创新的，科学的方案。

技术研发人员：张瑞,彭映然,杨安钢,张晓,王煜洲
受保护的技术使用者：中国人民解放军空军军医大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13