一种靶向CD137的多肽及其应用

本发明涉及分子生物学和医药，具体涉及一种靶向cd137的多肽及其应用。

背景技术：

1、急性冠脉综合征是冠心病患者死亡的主要原因，病理基础为冠状动脉粥样硬化易损斑块的破裂或糜烂继发血栓形成致冠脉完全或不完全闭塞。易损斑块(vulnerableplaque,不稳定斑块、高危斑块、软斑块)尚无公认的定义，主要特点包括斑块脂核比例较大(超过40％)，成分主要为液态胆固醇酯，纤维帽薄(＜150μm)，内部炎症反应和新生血管形成。“冠心病事件”风险主要取决于冠脉斑块的稳定性，而不是冠脉斑块所导致的狭窄程度，因此易损斑块的影像学评价以及如何逆转易损斑块是当今冠心病研究的热点之一。目前临床上对冠状动脉粥样硬化高风险斑块的影像学评价手段存在不足，目前临床上对易损斑块的诊断手段包括血管内超声、光学相干断层成像、冠脉增强ct、冠脉增强核磁等，但各有不足。具体如下：血管内超声(ivus)：目前临床上评价斑块的金标准，为有创检查，病人接受率低；存在局限性和安全性：导管本身直径1mm，且推送能力差，在病变狭窄程度严重或血管扭曲明显的情况下，导管无法通过病变；可产生环晕伪像、不均匀伪像、导丝伪像、图像的几何扭曲、血液回声；不能可靠的识别血栓，不能分辨较小的斑块的破裂等。光学相干断层成像(oct)：分辨率是ivus的10倍，达到10微米，可检出细微的斑块破裂，但做检查时需要暂时阻断血流，可加重或诱发心肌缺血，且难以应用于开口病变。冠脉增强ct：敏感性和特异性相对较低，具体说来表现在：(1)不能发现冠脉远段或细小分支的病变；(2)很难区分富含脂质的斑块与富含纤维组织的斑块，因其ct密度值有重叠；(3)迄今为止空间分辨率不足以满足对冠脉斑块细微组织结构的评估，对斑块纤维帽的形态结构和厚度的评价有限，对于较小的斑块来说，其ct密度测量的准确性受部分容积效应的影响。冠脉增强mra：仍处于临床前研究阶段，扫描时间长，运动伪影多，未广泛应用于临床。最重要的是这几项检查并不是早期诊断，亦不能反映高风险斑块的病理生理情况。磁共振软突出的优点为软组织和对比度分辨率高，可以清楚的区分软组织结构；可多参数，多平面成像，因此可以清楚地显示病变的位置和程度以及周围组织与器官之间的关系，可以准确判断病变，四氧化三铁已被批准应用于临床。荧光成像敏感性高，icg已经应用于临床眼底荧光血管造影等。因此，在许多病变的定性，定位和量化在诊断方面上是有优越性的。

2、绝大多数医学工作者和科研人员对肿瘤免疫和靶向治疗较为熟知，然而心血管免疫和靶向示踪、治疗也是近年来心血管领域新兴的观念和发展方向。近年来一些欧美发达国家冠心病发病率和死亡率有所下降，但发现存在一部分特殊群体，虽给予了各种最优干预措施(包括他汀类药物)，仍反复发生心血管意外，nilsson j指出这是由动脉粥样硬化高风险斑块的其他机制决定的，如斑块阻塞管腔引起血流动力学改变从而使抗炎因子分泌减少、胆固醇等脂类导致的血管炎症及血管对斑块成分的自身免疫性应答，并指出需要新方法去检测、验证上述病理生理学机制。antoniades c等人指出血管壁炎症也是心血管病的高危因素，它使血管壁异常表达的分子促进动脉粥样硬化进展，是非常有潜力的新治疗靶点，但是目前检测冠状动脉炎症的方法缺乏特异性(如血浆生物标志物)或者昂贵而不实用(pet)。saba l等人则明确指出炎症标志物是检测易损斑块的影像学示踪靶标。炎症在斑块失稳中发挥了关键作用，固有免疫和适应性免疫均参与，血管内皮细胞、t细胞活化，单核/巨噬细胞释放大量促炎因子，如单核细胞趋化蛋白(mcp-1)、inf-γ,tnf-α等，释放的基质降解蛋白酶使纤维帽的胶原纤维降解；促进斑块内新生血管形成。olofsson ps等人证实cd137是表达于高风险斑块活化的血管内皮细胞、斑块内活化的t细胞和单核细胞膜表面的共刺激分子，具有高特异性，当配体与其结合时，促进斑块内白细胞进一步活化和增多、致炎因子分泌，有潜力作为高风险斑块示踪和治疗的靶点。

技术实现思路

1、基于此，有必要提供了一种靶向cd137的多肽及其应用。

2、为实现上述目的，本发明具体技术方案如下：

3、首先，本发明提供一种靶向cd137的多肽，其氨基酸序列为ggacieegqycf。

4、进一步地，提供一种核酸，其编码所述多肽。

5、进一步地，提供所述多肽的偶联物，所述偶联物由权利要求1所述多肽与载体以共价或非共价的方式连接或作用得到。

6、优选的，所述载体包括荧光素、抗体、多聚物、高分子材料、纳米材料、脂质体、油性化合物、无机材料中的任意一种或多种。

7、进一步地，提供所述多肽或所述核酸或所述生物材料或所述偶联物在制备用于cd137介导疾病的预防或治疗的药物、诊断试剂、诊断试剂盒或显影制剂中的应用。

8、优选的，所述cd137介导疾病包括动脉粥样硬化易损斑块。

9、进一步地，提供所述多肽或所述核酸或所述生物材料或所述偶联物在制备用于检测细胞cd137表达水平的试剂中的应用。

10、进一步地，提供一种用于cd137介导疾病的诊断试剂或试剂盒，其包含所述多肽或所述偶联物。

11、进一步地，提供一种显像制剂，包含所述的多肽或所述偶联物。

12、进一步地，提供一种荧光/磁共振双模态分子探针的制备方法，包括如下步骤：

13、(1)将疏水fe3o4纳米颗粒用四氢呋喃稀释后加入dp-peg-mal并溶解，将反应液加热并振荡反应；

14、(2)用环己烷沉淀纳米颗粒，并洗涤，然后除去环己烷；

15、(3)干燥后的纳米颗粒溶于去离子水，进行离心超滤，并用去离子水洗涤；

16、(4)将dp-peg-mal修饰的fe3o4纳米颗粒溶于tris-hcl缓冲液后加入多肽搅拌混匀，再加入icg-sh并搅拌反应。

17、(5)进行离心超滤，并用pbs缓冲液洗涤。

18、基于上述技术方案，本发明具有以下有益效果：

19、目前缺乏敏感性和特异性强、无创且可动态监测动脉粥样硬化易损斑块的方法，本发明在验证cd137表达于患者易损斑块标本及小鼠易损斑块模型标本的基础上，以基于靶向cd137蛋白的多肽偶联四氧化三铁及icg，在动脉粥样硬化易损斑块模型鼠中进行鉴定，提供一种安全性高、敏感性和特异性强、无创且可动态监测易损斑块的分子探针。且该探针为双模态探针，既可以做荧光检测cd137的存在，又可以应用于磁共振检测。

技术特征：

1.一种靶向cd137的多肽，其特征在于，其氨基酸序列为ggacieegqycf。

2.一种核酸，其特征在于，其编码权利要求1所述多肽。

3.权利要求1所述多肽的偶联物，其特征在于，所述偶联物由权利要求1所述多肽与载体以共价或非共价的方式连接或作用得到。

4.根据权利要求3所述的偶联物，其特征在于，所述载体包括荧光素、抗体、多聚物、高分子材料、纳米材料、脂质体、油性化合物、无机材料中的任意一种或多种。

5.权利要求1所述多肽或权利要求2所述核酸或权利要求3或4所述偶联物在制备用于cd137介导疾病的预防或治疗的药物、诊断试剂、诊断试剂盒或显影制剂中的应用。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述cd137介导疾病包括动脉粥样硬化易损斑块。

7.权利要求1所述多肽或权利要求2所述核酸或权利要求3或4所述偶联物在制备用于检测细胞cd137表达水平的试剂中的应用。

8.一种用于cd137介导疾病的诊断试剂或试剂盒，其特征在于，其包含权利要求1所述多肽或权利要求3或4所述偶联物。

9.一种显像制剂，其特征在于，包含权利要求1所述的多肽或权利要求3或4所述偶联物。

10.一种荧光/磁共振双模态分子探针的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

技术总结
本发明涉及分子生物学和医药技术领域，具体涉及一种靶向CD137的多肽及其应用。本发明提供了一种靶向CD137的多肽，为GGACIEEGQYCF。本发明的多肽对CD137具有较高的亲和力和特异性，能够特异高效地靶向CD137阳性细胞，可作为多肽分子探针用于检测动脉粥样硬化易损斑块的情况，以实时监控病情发展；还可作为靶向多肽，用于高表达CD137组织的成像，具有广阔的应用前景。

技术研发人员：王怡宁,曲婵娟,王子华,陈跃鑫
受保护的技术使用者：中国医学科学院北京协和医院
技术研发日：
技术公布日：2024/1/11