一种人乳头瘤病毒的检测试剂以及检测方法和应用与流程

本发明涉及生物检测，具体而言，涉及一种人乳头瘤病毒的检测试剂以及检测方法和应用。

背景技术：

1、目前，宫颈癌是女性癌症中最常见的恶性肿瘤之一。宫颈癌在全世界范围内每年有570,000新发病例，311,000死亡病例。高危型人乳头瘤病毒(hpv)的持续性感染被认为是宫颈癌的首要病因。

2、人乳头瘤病毒(hpv)属乳头瘤病毒家族，是一种小型无包膜的dna病毒。病毒颗粒由单拷贝dna和蛋白质组成，具有双链闭环dna基因组，大小约8000bp，其基因组由三个基因区组成，包括含有8个早期开放阅读框的早期区(early region，e)，有2个晚期开放阅读框的晚期区(late region，l)和非编码长控区(long control region，lcr)。目前已知的hpv型别有100多种，其中约40种涉及生殖道感染，约20种与肿瘤相关。根据hpv致病力或致癌危险大小的不同，将其分为高危型(致癌型)和低危型两大类。高危型hpv主要包括hpv16和18。

3、宫颈癌的筛查包括宫颈细胞学检测及hpv dna检测。细胞学检测包括巴氏涂片和tct液基细胞压片。tct相较于巴氏涂片更易于发现异常细胞，敏感性较高，但价格相对较高。hpv dna检测相比细胞学检测的灵敏度更高，而且能够对hpv进行分型和定量检测，是目前宫颈癌早期诊断主要发展方向之一。然而，现有用于hpv dna检测的pcr方法也存在一定的局限性，引物和探针的设计难度大，存在扩增效率低、检测灵敏度不高等问题，无法快速有效地实现对高危型hpv的检测。

4、鉴于此，特提出本发明。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种高危型人乳头瘤病毒的检测试剂以及检测方法和应用。

2、本发明是这样实现的：

3、第一方面，本发明实施例提供了一种人乳头瘤病毒的检测试剂，其包括用于检测hpv-16的引物对1和用于检测hpv-18的引物对2中的至少一种；所述引物对1的上游引物的核苷酸序列如seq id no.1所示，下游引物的核苷酸序列如seq id no.2所示；所述引物对2的上游引物的核苷酸序列如seq id no.3所示，下游引物的核苷酸序列如seq id no.4所示。

4、第二方面，本发明实施例提供了如前述实施例所述的人乳头瘤病毒的检测试剂在制备人乳头瘤病毒的检测试剂盒中的应用。

5、第三方面，本发明实施例提供了一种人乳头瘤病毒的检测试剂盒，其包括如前述实施例所述的人乳头瘤病毒的检测试剂。

6、第四方面，本发明实施例提供了一种人乳头瘤病毒的检测方法，其包括采用如前述实施例所述的人乳头瘤病毒的检测试剂或如前述实施例所述的人乳头瘤病毒的检测试剂盒对样本进行pcr检测；所述检测方法不以疾病的诊断或治疗为直接目的。

7、本发明具有以下有益效果：

8、本发明提供了hpv-16和hpv-18的引物对和探针具有很好的扩增效率，避免或减少了非特异性产物生成，检测的灵敏度高、特异性强，hpv-16和18的检测限分别能达到250拷贝/ml和21.7拷贝/ml，为hpv-16和18的分型检测提供了途径。

技术特征：

1.一种人乳头瘤病毒的检测试剂，其特征在于，其包括用于检测hpv-16的引物对1和用于检测hpv-18的引物对2中的至少一种；

2.根据权利要求1所述的人乳头瘤病毒的检测试剂，其特征在于，所述引物对1和/或引物对2中，上游引物和下游引物的摩尔比为(0.1～0.4)：(0.1～0.4)；

3.根据权利要求1或2所述的人乳头瘤病毒的检测试剂，其特征在于，所述检测试剂还包括用于检测hpv-16的探针1和/或hpv-18的探针2；

4.根据权利要求3所述的人乳头瘤病毒的检测试剂，其特征在于，所述探针1和/或所述探针2的5’端连接有荧光报告基团，3’端连接有荧光淬灭基团和/或mgb；

5.如权利要求1～4任一项所述的人乳头瘤病毒的检测试剂在制备人乳头瘤病毒的检测试剂盒中的应用。

6.一种人乳头瘤病毒的检测试剂盒，其特征在于，其包括如权利要求1～4任一项所述的人乳头瘤病毒的检测试剂。

7.根据权利要求6所述的人乳头瘤病毒的检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒还包括：pcr反应液、阴性对照品和阳性对照品中的至少一种；

8.根据权利要求7所述的人乳头瘤病毒的检测试剂盒，其特征在于，mg2+的作用浓度为1～5mm，dntp的作用浓度为0.1～0.4mm，taq酶的终浓度为0.01～1u/μl。

9.一种人乳头瘤病毒的检测方法，其特征在于，其包括采用如权利要求1～4任一项所述的人乳头瘤病毒的检测试剂或如权利要求6～8任一项所述的人乳头瘤病毒的检测试剂盒对样本进行pcr检测；

10.根据权利要求9所述的检测方法，其特征在于，所述pcr的反应条件如下：94～96℃预变性8～12min；94～96℃变性8～12s，49～51℃退火38～42s，收集荧光信号，44～46个循环。

技术总结
本发明公开了一种人乳头瘤病毒的检测试剂以及检测方法和应用，涉及生物检测技术领域，本发明提供了HPV‑16和HPV‑18的引物对和探针具有很好的扩增效率，避免或减少了非特异性产物生成，检测的灵敏度高、特异性强，为HPV‑16和18的分型检测提供了途径。

技术研发人员：黄菁,徐璨,向思瑾
受保护的技术使用者：广东菲鹏生物有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/2/1