一种具有抗过敏活性的miRNA及其应用

本发明属于分子生物学，具体涉及一种具有抗过敏活性的mirna及其应用，所述mirna为let-7d-5p。

背景技术：

1、食物过敏是一种由免疫系统介导对机体不利性的全身性免疫反应。ige介导的食物过敏反应是最常见的过敏反应，患者会腹痛、腹泻、恶心、呕吐，严重时甚至会产生过敏性休克，有一定的致命风险。每年食物过敏的人数逐年上升，其在给人们造成严重的经济负担的同时严重影响人们的生活质量。姜黄素（curcumin，cur）作为一种疏水多酚类化合物，是具有抗炎抗氧化等多种功能的食品功能因子。有研究发现，姜黄素能够抑制过敏介质如组胺、β-hex、tnf-α和il-4释放，但目前早期如何快速准确评价姜黄素抑制过敏反应有待建立。

2、microrna（mirna）是在真核生物中发现的一类内源性的具有调控功能的非编码小rna，其大小约18~24个核苷酸。作为重要的转录后调控因子，主要通过结合靶基因 mrna 的3′utr 来抑制基因表达或使其发生降解，从而发挥其负向调节的功能。本团队前期研究表明let-7d-5p介导姜黄素的抗氧化作用，但是let-7d-5p是否可以作为姜黄素降低过敏反应的分子诊断标志物尚未报道。

3、rbl-2h3细胞是常用于体外实验研究的细胞系，性状稳定单一，易于体外培养，其表面表达ige高亲和力受体，可用于过敏原鉴定、诊断和潜在免疫治疗分析。当机体第一次接触过敏原时，rbl-2h3细胞表面的 fcεrⅰ受体结合ige而使机体致敏，当过敏原再次进入机体，fcεrⅰ受体与ige-抗原复合物交联后，诱导rbl-2h3细胞活化脱颗粒，释放β-氨基己糖苷酶（β-hexosaminidase，β-hex）、组胺和细胞趋化因子等炎性介质进而引起过敏症状。

技术实现思路

1、本发明的目的在于针对上述问题，提供了一种抗过敏的mirna及其应用。

2、为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

3、本发明首先提供了一种mirna，所述mirna为let-7d-5p，其核苷酸序列为5′-agagguaguagguugcauaguu-3′（u表示尿嘧啶uracil）。

4、本发明还提供了上述let-7d-5p在制备抗过敏药物中的应用；

5、其中，所述的抗过敏药物是指提高let-7d-5p表达量的试剂；

6、所述的试剂中包含有效剂量的let-7d-5p模拟物。

7、本发明还提供了一种评估let-7d-5p模拟物抗过敏能力的方法，所述方法包括以下步骤：

8、1）构建dnp-ige/bsa诱导的rbl-2h3细胞过敏模型，转染nc mimic，检测β-hex释放量，记为a；

9、2）在dnp-ige/bsa诱导的rbl-2h3细胞过敏模型中转染let-7d-5p模拟物，检测β-hex释放量，记为a；

10、3）将未经诱导的正常rbl-2h3细胞中的β-hex释放量设为1.0，根据如下公式计算let-7d-5p模拟物的抗过敏能力：

11、抗过敏能力r＝|a-a|/1.0×100%。

12、本发明还提供了上述let-7d-5p在评估姜黄素类化合物抗过敏能力中的应用，所述应用具体为：用候选姜黄素类化合物处理表达let-7d-5p的体系；检测所述体系中let-7d-5p的表达；若let-7d-5p的表达增加，则表明该候选姜黄素类化合物是具有抗过敏能力的潜在物质。

13、本发明还提供了一种评估姜黄素类化合物抗过敏能力的试剂盒，所述的试剂盒中包含对let-7d-5p的表达量进行检测的试剂。

14、本发明的有益效果是：

15、本发明通过建立dnp-ige/bsa诱导的rbl-2h3细胞过敏模型，检测姜黄素处理前后细胞模型中let-7d-5p的表达量，首次证实了let-7d-5p参与姜黄素的抗过敏调节作用；此外，转染let-7d-5p模拟物可显著降低dnp-ige/bsa诱导的rbl-2h3细胞过敏模型中β-hex的释放，而转染let-7d-5p抑制物可逆转姜黄素导致的dnp-ige/bsa诱导的rbl-2h3细胞过敏模型中β-hex释放量的下降。因此，let-7d-5p能够用于制备抗过敏药物，还可用于评估姜黄素类化合物的抗过敏能力。本发明在拓展let-7d-5p应用方向的同时也为姜黄素类化合物抗过敏能力评估方法的建立提供了依据。

技术特征：

1.let-7d-5p在制备抗过敏药物中的应用，其特征在于：所述let-7d-5p的核苷酸序列为5′-agagguaguagguugcauaguu-3′。

2.根据权利要求1所述的let-7d-5p在制备抗过敏药物中的应用，其特征在于：所述的抗过敏药物是指提高let-7d-5p表达量的试剂。

3.根据权利要求2所述的let-7d-5p在制备抗过敏药物中的应用，其特征在于：所述的试剂中包含有效剂量的let-7d-5p模拟物。

4.一种评估let-7d-5p模拟物抗过敏能力的方法，其特征在于：包括以下步骤：

5.let-7d-5p在评估姜黄素类化合物抗过敏能力中的应用，其特征在于：所述let-7d-5p的核苷酸序列为5′-agagguaguagguugcauaguu-3′。

6.根据权利要求5所述的let-7d-5p在评估姜黄素类化合物抗过敏能力中的应用，其特征在于：用候选姜黄素类化合物处理表达let-7d-5p的体系；检测所述体系中let-7d-5p的表达；若let-7d-5p的表达增加，则表明该候选姜黄素类化合物是具有抗过敏能力的潜在物质。

7.一种评估姜黄素类化合物抗过敏能力的试剂盒，其特征在于：所述的试剂盒中包含对let-7d-5p的表达量进行检测的试剂。

技术总结
本发明公开了一种具有抗过敏活性的miRNA及其应用，所述miRNA为let‑7d‑5p。本发明通过建立DNP‑IgE/BSA诱导的RBL‑2H3细胞过敏模型，检测姜黄素处理前后细胞模型中let‑7d‑5p的表达量，首次证实了let‑7d‑5p参与姜黄素的抗过敏作用；此外，转染let‑7d‑5p模拟物可显著降低DNP‑IgE/BSA诱导的RBL‑2H3细胞过敏模型中β‑HEX的释放，而转染let‑7d‑5p抑制物可逆转姜黄素导致的DNP‑IgE/BSA诱导的RBL‑2H3细胞过敏模型中β‑HEX释放量的下降。因此，let‑7d‑5p能够用于制备抗过敏药物，还可用于评估姜黄素类化合物的抗过敏能力。

技术研发人员：李桂玲,王梦凡,刘静雯,黄世英,李健,何国鼎
受保护的技术使用者：集美大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/11