喹喔啉类荧光探针、方法及应用

本发明涉及医药，具体是喹喔啉类荧光探针、方法及应用。

背景技术：

1、阿尔茨海默病(alzheimer’s disease,ad)是在老年人群中较为多见的一种致死性神经退行性疾病，尚无有效治疗办法。ad的早期诊断可以为这种毁灭性疾病，提供治疗干预的可能性。由tau蛋白异常聚集，在脑组织中沉积而造成的神经元纤维性缠结(tau-phf)，是ad的重要病理性特征之一，已被证明与疾病的进展和严重程度密切相关。因此，发展以tau蛋白聚集物为靶点的无创荧光成像技术，可能会促进ad及tau蛋白相关疾病的早期诊断。

2、目前，正电子发射断层扫描(positron emission tomography，pet)和单光子发射计算机断层扫描(single photo emission computed tomography，spect)显像的技术手段能够实现对疾病的早期检测、“实时”监测和治疗效果的评估。但pet和spect受限于暴露于放射性、昂贵的设备和高技能的人员，以及相对较差的空间分辨率。

3、荧光检测法是目前公认的最灵敏的光化学信号检测方法之一，在生物分析检测领域应用广泛。近年来，荧光成像技术因其灵敏度高、分辨率高、性价比高、成像实时等优点，也被用于在细胞和组织水平上对tau蛋白聚集进行可视化检测。一些小分子荧光探针已经被用来选择性标记tau蛋白聚集物。然而，他们对tau蛋白聚集物的特异性识别能力普遍不强。因此，迫切需要开发对tau蛋白聚集物具有更高选择性和亲和力的荧光成像探针。

技术实现思路

1、本发明提供了喹喔啉类荧光探针、方法及应用，为包括ad在内的，具有神经纤维缠结特征的神经退行性疾病的，临床诊断带来帮助和突破。

2、为达此目的，本发明提供如下的技术方案：

3、本发明的第一个方面，提供了一种喹喔啉类荧光探针，所述荧光探针具有以下结构式：

4、

5、其中，n为1或2或3。

6、优选的，n为1时，探针为黄色固体；n为2时，探针为暗红色固体；n为3时，探针为黑色固体。

7、本发明的第二个方面，提供了本发明所述的喹喔啉类荧光探针在检测样本中的tau蛋白聚集物中的应用。

8、优选的，所述荧光探针的浓度不小于0.1μm。

9、优选的，所述样本包括细胞、组织。

10、优选的，所述荧光探针的最大激发波长为：400-600nm，最大发射波长为500-750。

11、优选的，所述荧光探针具有以下结构式：

12、

13、其中，n为1或2或3。

14、优选的，n为1时，探针为黄色固体；n为2时，探针为暗红色固体；n为3时，探针为黑色固体。

15、本发明的第三个方面，提供了一种荧光探针试剂盒，包括本发明所述的荧光探针。

16、优选的，所述荧光探针具有以下结构式：

17、

18、其中，n为1或2或3。

19、优选的，n为1时，探针为黄色固体；n为2时，探针为暗红色固体；n为3时，探针为黑色固体。

20、本发明的第四个方面，提供了一种喹喔啉类荧光探针的制备方法，包括以下步骤：

21、s1、将化合物2-甲基喹诺啉溶于甲醇；将4-(二甲氨基)-2,6-二甲氧基苯甲溶于氢氧化钠中；混合溶液；

22、s2、将甲基三辛基氯化铵溶解于2ml甲醇中；滴加入s1的混合溶液中；

23、s3、加热回流，反应完毕后，冷却至室温；

24、s4、用乙酸乙酯萃取，有机层用无水mgso4干燥；

25、s5、充分搅拌后，过滤，滤液减压旋蒸，即得粗产物；

26、s6、分离提取得到喹喔啉类荧光探针。

27、优选的，步骤s3的反应条件为：110℃加热回流15h。

28、优选的，步骤s6包括：用硅胶分离提纯目标产物，洗脱剂为：石油醚、乙酸乙酯混合液。

29、与现有技术相比，本发明有益效果及显著进步在于：本发明设计并合成了三种喹喔啉类靶向tau蛋白聚集物的荧光探针，这些化合物具有对tau蛋白聚集物亲和性强，响应速度快，特异性好，选择性高，细胞毒性低的特点，不但可以有效监测体外tau蛋白聚集的动力学过程，还能够特异性识别活的ad细胞中以及ad模型小鼠脑组织中，由tau蛋白聚集物形成的神经纤维缠结，从而为包括ad在内的，具有神经纤维缠结特征的神经退行性疾病的，临床诊断带来帮助和突破。

技术特征：

1.一种喹喔啉类荧光探针，其特征在于，所述荧光探针具有以下结构式：

2.如权利要求1所述的喹喔啉类荧光探针，其特征在于，n为1时，探针为黄色固体；n为2时，探针为暗红色固体；n为3时，探针为黑色固体。

3.如权利要求1所述的喹喔啉类荧光探针在检测样本中的tau蛋白聚集物中的应用。

4.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述荧光探针的浓度不小于0.1μm。

5.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述样本包括细胞、组织。

6.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述荧光探针的最大激发波长为：400-600nm，最大发射波长为500-750。

7.一种荧光探针试剂盒，其特征在于，包括权利要求1或2所述的荧光探针。

8.一种喹喔啉类荧光探针的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，步骤s3的反应条件为：110℃加热回流15h。

10.如权利要求8所述的方法，其特征在于，步骤s6包括：用硅胶分离提纯目标产物，洗脱剂为：石油醚、乙酸乙酯混合液。

技术总结
本发明公开了喹喔啉类荧光探针、方法及应用，喹喔啉类荧光探针具有对Tau蛋白聚集物亲和性强，响应速度快，特异性好，选择性高，细胞毒性低的特点，可以直接作为检测活细胞及组织样本中神经纤维缠结的荧光探针，从而为包括AD在内的，具有神经纤维缠结特征的神经退行性疾病的，临床诊断带来帮助和突破。

技术研发人员：杨丹静,柴可可,涂英,姚天明
受保护的技术使用者：同济大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/12