一种人乳腺恶性叶状肿瘤细胞系SYSH-MPT-03及其应用

本发明涉及动物细胞系模型，尤其是一种人乳腺恶性叶状肿瘤细胞系及其建立方法和应用。

背景技术：

1、人乳腺叶状肿瘤是一种较为罕见的纤维上皮性肿瘤，发病率约为全部乳腺肿瘤的1％。世界卫生组织根据组织病理特征将叶状肿瘤分为良性、交界性和恶性三类。其中恶性叶状肿瘤预后差，复发率高达65％，可通过血行转移，转移率高达43.1％。然而研究发现恶性叶状肿瘤对放疗、化疗、免疫治疗均不敏感，临床主要的治疗方式为手术治疗，因此恶性叶状肿瘤患者常因全身多处转移而死亡。细胞系通常指能在体外传代大于50代的细胞。一些细胞在外界的刺激下可获得无限增殖的能力，而大多数细胞在体外传代次数是有限的，人们可以通过转染外源永生化基因(如hpv、sv40t等病毒基因)使这些细胞获得永生化能力。例如，公布号为cn111019898a、cn114717190a的中国专利申请公开的两种人乳腺恶性叶状肿瘤细胞系均通过转染外源永生化基因获得。然而，构建永生化细胞株的成本高，且由于插入了外源基因，可能对细胞的代谢和通路产生一定的影响。通过非转染常规的方法体外培养细胞系，因原代细胞株的特性不同，大多数细胞在体外传代次数是有限，很难获得生物遗传性状稳定的子代细胞系，且生长速度慢，不适合量产市场化。

2、目前，由于缺乏能持续传代的人乳腺恶性叶状肿瘤细胞系，该肿瘤的研究主要基于原代细胞，然而分离肿瘤的原代细胞耗费大，周期长，使得人乳腺恶性叶状肿瘤的致病机制、发生发展机制、治疗靶点、抗肿瘤药物筛选等方面的研究均受到了限制。造成当今国内外，适宜量产、市场化的人乳腺恶性叶状肿瘤的细胞模型还处于空缺状态，因此，亟需建立一种可靠的人乳腺恶性叶状肿瘤细胞系，以便于在体内外研究人乳腺恶性叶状肿瘤的生物学功能，帮助筛选出特异标志物和有效的治疗靶点。

技术实现思路

1、为克服以上缺陷，本发明提供了一种不需要进行永生化处理，可稳定体外无限传代，特别适宜量产、市场化的人乳腺恶性叶状肿瘤细胞株及其子代细胞系，并进一步公开其子代细胞系的建立方法和相关应用。

2、本发明的人乳腺恶性叶状肿瘤细胞株来源于患有恶性叶状肿瘤的25岁女病人的右乳肿物，将其体外培养的细胞系命名为人乳腺恶性叶状肿瘤细胞系sysh-mpt-03(简称细胞系sysh-mpt-03)，其细胞株则命名为人乳腺恶性叶状肿瘤细胞株sysh-mpt-03(简称细胞株sysh-mpt-03)。所述细胞系sysh-mpt-03已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏日期为2022年6月28日；保藏地址为：中国湖北省武汉市武昌区珞珈山路16号武汉大学，保藏编号为cctcc，no.c2022189。

3、进一步提供本发明人乳腺恶性叶状肿瘤细胞株(或系)sysh-mpt-03及其子代细胞系的建立方法。

4、其建立方法为：取对数生长期的的细胞株sysh-mpt-03在体外培养传代，细胞培养条件为：37℃，5％co2细胞培养箱；所用培养基为dmem/f12培养基，该培养基中含有终浓度为20ng/ml的表皮细胞生长因子,0.5mg/ml的氢化可的松,10ug/ml的胰岛素，以及占所述培养基总体积1％的青链霉素双抗；传代时，用胰酶消化细胞，按1:2的比例传代。

5、本发明的细胞系sysh-mpt-03可用于建立人乳腺恶性叶状肿瘤细胞模型，或人乳腺恶性叶状肿瘤动物模型。所述的应用范围包括：用于人乳腺恶性叶状肿瘤的致病、发生、发展、转移和耐药机制，相关信号通路和药物靶点等方面研究。亦可应用于制备人乳腺恶性叶状肿瘤诊断或检测试剂，或应用于制备、筛选和评估抗肿瘤药物的研究中。

6、本发明相对于现有技术具有以下优点：

7、1.本发明的细胞系sysh-mpt-03的原代细胞恶性程度较一般临床的恶性叶状肿瘤细胞高，其来源于多次复发以及转移的患者,侵袭迁移性更强更快。在作为细胞模型中具有更强的代表性。

8、2.不需要进行永生化处理，在常规培养条件下能在体外无限传代，生长速度快，易于培养，生物遗传性状稳定，保留了其原代细胞的增殖、克隆形成、迁移、侵袭和克隆形成能力，α-sma和fap的表达水平与原代细胞相似，在21个str位点的拷贝数也与原代细胞相同。因此本发明建立的细胞系能代表原代细胞，可用于人乳腺恶性叶状肿瘤体外生物学功能的研究。

9、3.因本发明细胞系的建立不需要永生化处理，所以培养工艺简单，成本低，特别适宜量产市场化，可填补目前市面上缺乏人乳腺恶性叶状肿瘤细胞系模型的空白。对研究人乳腺恶性叶状肿瘤生物学特性及治疗药物具有很大的帮助。

技术特征：

1.一种人乳腺恶性叶状肿瘤细胞株，其特征在于：所述细胞株命名为人乳腺恶性叶状肿瘤细胞株sysh-mpt-03，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为cctcc,no.c2022189。

2.如权利要求1所述的细胞株的子代细胞系。

3.如权利要求2所述的子代细胞系的建立方法，包括以下步骤：取对数生长期的人乳腺恶性叶状肿瘤细胞株sysh-mpt-03在体外培养传代，细胞培养条件为：37℃，5％co2细胞培养箱；所用培养基为dmem/f12培养基，该培养基中含有终浓度为20ng/ml的表皮细胞生长因子,0.5mg/ml的氢化可的松,10ug/ml的胰岛素，以及占所述培养基总体积1％的青链霉素双抗；传代时，用胰酶消化细胞，按1:2的比例传代。

4.如权利要求1所述的细胞株或权利要求2所述的细胞系在作为人乳腺恶性叶状肿瘤细胞模型中的应用。

5.如权利要求1所述的细胞株或权利要求2所述的细胞系在建立人乳腺恶性叶状肿瘤动物模型中的应用。

6.如权利要求4或5所述的应用，其特征在于：所述的应用范围包括在研究人乳腺恶性叶状肿瘤致病、发生、发展、转移和耐药机制，相关信号通路和药物靶点方面的应用。

7.如权利要求1所述的细胞株或权利要求2所述的细胞系在筛选和评估人乳腺恶性叶状肿瘤诊断或检测试剂中的应用。

8.如权利要求1所述的细胞株或权利要求2所述的细胞系在筛选和评估抗人乳腺恶性叶状肿瘤药物中的应用。

技术总结
本发明涉及动物细胞系模型技术领域，公开了一种人乳腺恶性叶状肿瘤细胞株及其子代细胞系和应用。该细胞系命名为人乳腺恶性叶状肿瘤细胞系SYSH‑MPT‑03，已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC，NO.C2022189。该细胞系不需要进行永生化处理，可稳定体外无限传代，培养工艺简单，成本低，特别适宜量产市场化。可作为细胞模型对研究人乳腺恶性叶状肿瘤生物学特性及治疗药物具有很大的帮助。有望填补目前缺乏人乳腺恶性叶状肿瘤细胞模型的空白。

技术研发人员：聂燕,贺诗施,雷蓉,艾力菲热·伊力哈木
受保护的技术使用者：中山大学孙逸仙纪念医院
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13