RIPK1基因突变形式在诊断自身炎症伴阵发发热和淋巴结肿大中的应用

本发明属于分子生物医学领域，涉及ripk1基因突变形式在诊断自身炎症伴阵发发热和淋巴结肿大中的应用。

背景技术：

1、自身炎症性疾病(systemic autoinflammatory diseases,saids)是由固有免疫异常所引起的一组罕见的多系统风湿免疫疾病，主要表现为不明原因的反复发热以及全身多系统自身炎症。过去二十年，由于人类对于基因组学的研究不断深入，以及测序技术的飞速发展，越来越多的基因被鉴定为自身炎症性疾病的致病基因，自身炎症性疾病的疾病谱也在不断扩展。数据库的建立、致病基因研究的深入对自身炎症性疾病患者的诊断和治疗也提供了宝贵的数据基础。

2、自身炎症伴阵发发热和淋巴结肿大(autoinflammation with episodic feverand lymphadenopathy，aiefl)是2019年新定义的一组自身炎症性疾病，被收录于人类孟德尔遗传数据库(https://omim.org/)，omim编号为618852。2019年，两组团队在nature发表背对背研究，详细的描述了aiefl的临床特征以及致病基因ripk1的功能验证，并报道了d324n、d324h、d324y等在蛋白质序列高度保守的324位点上致病杂合突变。aiefl的遗传方式为常染色体显性遗传，并伴有自发的发热和淋巴结病。由于ripk1基因所编码的蛋白质ripk1是凋亡以及坏死性凋亡等细胞程序性死亡的关键调控分子，因此ripk1的保守序列的突变可能会引起先天免疫的异常激活，引起自身炎症性疾病的发生。基因ripk1的突变位点在遗传性自身炎症性疾病基因突变infevers数据库(https://infevers.umai-montpellier.fr/web/)仍在不断增加报道，对于其认识的加深可为临床确定和诊治自身炎症性疾病提供依据。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供自身炎症伴阵发发热和淋巴结肿大相关基因ripk1的突变形式的应用。

2、第一方面，本发明提供了用于检测特异突变的物质在制备试剂盒中的应用；

3、所述特异突变为：人基因组中的ripk1基因中发生的突变，该突变引起形成转录本的cdna发生变化，从而使翻译得到的蛋白质由序列表的序列2所示的蛋白质突变为序列表的序列4所示的蛋白质；

4、所述试剂盒的功能为如下(c1)、(c2)或(c3)：

5、(c1)自身炎症伴阵发发热和淋巴结肿大患者的筛查或辅助筛查；

6、(c2)自身炎症伴阵发发热和淋巴结肿大胚胎的筛查或辅助筛查；

7、(c3)诊断或辅助诊断自身炎症伴阵发发热和淋巴结肿大的患者。

8、具体的，上述形成转录本的cdna发生的变化为：由序列表的序列1所示的dna分子突变为序列表的序列3所示的dna分子。

9、第二个方面，本发明还提供了一种试剂盒，包括用于检测特异突变的物质；

10、所述特异突变为：人基因组中的ripk1基因中发生的突变，该突变引起形成转录本的cdna发生变化，从而使翻译得到的蛋白质由序列表的序列2所示的蛋白质突变为序列表的序列4所示的蛋白质；

11、所述试剂盒的功能为如下(c1)、(c2)或(c3)：

12、(c1)自身炎症伴阵发发热和淋巴结肿大患者的筛查或辅助筛查；

13、(c2)自身炎症伴阵发发热和淋巴结肿大胚胎的筛查或辅助筛查；

14、(c3)诊断或辅助诊断自身炎症伴阵发发热和淋巴结肿大的患者。

15、具体的，形成转录本的cdna发生的变化为：由序列表的序列1所示的dna分子突变为序列表的序列3所示的dna分子。

16、前文中，用于检测特异突变的物质为特异引物对，由序列表的序列5所示的单链dna分子和序列表的序列6所示的单链dna分子组成。

17、上述筛查对象来源于自身炎症性疾病患者或者具有间歇性发热以及发热时淋巴结肿大的临床特征的患者。

18、第三个方面，本发明还提供了一种突变蛋白，是将ripk1蛋白的第646位氨基酸残基由缬氨酸突变为谷氨酸得到的蛋白质。

19、具体的，所述突变蛋白如序列表的序列4所示。

20、第四个方面，本发明还提供了一种突变基因，是将ripk1基因进行突变得到的基因；所述ripk1基因为人基因组中编码ripk1蛋白的基因；所述突变为将编码ripk1蛋白的第646位氨基酸残基的密码子由编码缬氨酸的密码子突变为编码谷氨酸的密码子。

21、具体的，所述突变基因如序列表的序列3所示。

22、第五个方面，本发明还提供了如下应用：

23、前文中的突变蛋白或前文中的突变基因作为靶标物在开发用于诊断或辅助诊断自身炎症伴阵发发热和淋巴结肿大的患者的试剂或试剂盒中的应用。

24、前文中的突变蛋白或前文中的突变基因作为靶标物在开发用于治疗自身炎症伴阵发发热和淋巴结肿大的患者的试剂或试剂盒中的应用。

25、本发明通过对先证者进行全外显子组高通量测序，发现了自身炎症伴阵发发热和淋巴结肿大致病基因新的突变形式，该突变可以作为自身炎症伴阵发发热和淋巴结肿大临床诊断的分子标志物和新型药物研发的靶标。本发明的发现为解析自身炎症性疾病的致病机制提供了依据，也为自身炎症性疾病临床诊断和治疗提供了新的方向。

技术特征：

1.用于检测特异突变的物质在制备试剂盒中的应用；所述特异突变为：人基因组中的ripk1基因中发生的突变，该突变引起形成转录本的cdna发生变化，从而使翻译得到的蛋白质由序列表的序列2所示的蛋白质突变为序列表的序列4所示的蛋白质；

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于：所述形成转录本的cdna发生的变化为：由序列表的序列1所示的dna分子突变为序列表的序列3所示的dna分子。

3.如权利要求1或2所述的应用，其特征在于：所述用于检测特异突变的物质为特异引物对，其由序列表的序列5所示的单链dna分子和序列表的序列6所示的单链dna分子组成。

4.一种试剂盒，包括用于检测特异突变的物质；所述特异突变为：人基因组中的ripk1基因中发生的突变，该突变引起形成转录本的cdna发生变化，从而使翻译得到的蛋白质由序列表的序列2所示的蛋白质突变为序列表的序列4所示的蛋白质；

5.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于：所述形成转录本的cdna发生的变化为：由序列表的序列1所示的dna分子突变为序列表的序列3所示的dna分子。

6.如权利要求4或5所述的应试剂盒，其特征在于：所述用于检测特异突变的物质为特异引物对，其由序列表的序列5所示的单链dna分子和序列表的序列6所示的单链dna分子组成。

7.一种突变蛋白，是将ripk1蛋白的第646位氨基酸残基由缬氨酸突变为谷氨酸得到的蛋白质。

8.一种突变基因，是将ripk1基因进行突变得到的基因；所述突变为将编码ripk1蛋白的第646位氨基酸残基的密码子由编码缬氨酸的密码子突变为谷氨酸的密码子；所述ripk1基因为人基因组中编码ripk1蛋白的基因。

9.权利要求7所述突变蛋白或权利要求8所述突变基因作为靶标物在开发用于诊断、辅助诊断、筛查或辅助筛查自身炎症伴阵发发热和淋巴结肿大患者的试剂或试剂盒中的应用。

10.权利要求7所述突变蛋白或权利要求8所述突变基因作为靶标物在开发用于治疗自身炎症伴阵发发热和淋巴结肿大患者的试剂或试剂盒中的应用。

技术总结
本发明公开了RIPK1基因突变形式在诊断自身炎症伴阵发发热和淋巴结肿大中的应用。本发明提供了一种突变蛋白，是将人RIPK1蛋白的第646位氨基酸残基由缬氨酸突变为谷氨酸得到的蛋白质。本发明还提供了一种突变基因，是将RIPK1基因进行突变得到的基因；所述RIPK1基因为人基因组中编码RIPK1蛋白的基因；所述突变为将编码RIPK1蛋白的第646位氨基酸残基的密码子由编码缬氨酸的密码子突变为编码谷氨酸的密码子。所述突变蛋白或所述突变基因可以作为靶标物开发用于诊断自身炎症伴阵发发热和淋巴结肿大的试剂或试剂盒，为自身炎症性疾病临床诊断和治疗提供了新的方向。

技术研发人员：沈敏,黄欣,吴冰璇,兀娜
受保护的技术使用者：中国医学科学院北京协和医院
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13