第1187位点发生突变的人类CMT致病基因SARS1及其应用

本公开涉及基因的，尤其涉及第1187位点发生突变的人类cmt致病基因sars1及其应用。

背景技术：

1、腓骨肌萎缩症(charcot-marie-tooth，cmt)是一组最常见的周围神经单基因遗传病，发病率约为1/2500。该类疾病的具有高度临床异质性和遗传异质性，其典型的临床特点主要表现为青少年期起病，缓慢进展的四肢远端进行性的肌无力和萎缩伴感觉障碍。

2、cmt通常于儿童期或青少年期发病，临床特点表现为进行性、对称性肢体远端肌无力和肌萎缩，足部、小腿肌肉和大腿下1/3以下肌肉无力和萎缩，形成“鹤腿”或倒置的酒瓶样畸形，常出现足内翻畸形和杵状趾，行走和跑步困难，跨阈步态，；手部骨间肌和大、小鱼际肌萎缩，呈现爪形或猿手畸形，肌萎缩一般不超过肘关节以上，手的精细动作不能；四肢呈手套-袜子型分布，区域内痛觉、温觉和振动觉减退，腱反射减弱或消失，踝反射通常消失，可伴自主神经功能障碍和营养障碍体征，常伴高弓足、脊柱侧弯等骨骼畸形。尽管cmt主要累及周围感觉和运动神经，较少一部分以轴索受累为主的患者同时会出现锥体束征的表现，包括轻度肌张力升高、下肢腱反射保留/活跃/亢进，以及病理征阳性，提示存在中枢神经系统的受累。此外，cmt中还可能出现许多其他症状，例如颅神经受累，声带麻痹，瞳孔异常，青光眼，视神经萎缩，听力下降，智能下降等非运动症状。这些特异性的伴随症状，通常可为分子诊断提供重要线索。临床异质性的严重程度也有很大差异，范围从轻度症状形式到导致严重残疾的形式。多数患者疾病进展缓慢，出现轻至中度功能损害，但不影响预期寿命。

3、根据电生理和病理特征，主要分为脱髓鞘型、轴索型以及中间型，其中最常见的cmt亚型为脱髓鞘型，其主要特点为正中神经运动传导速度(mncv)小于25m/s，病理典型改变为有髓神经纤维存在洋葱球样结构。轴索型的特点为mncv大于45m/s，病理典型改变为大量有髓纤维密度减低。中间型的特点为mncv为25～45m/s，病理改变兼具有两型的特点。随着cmt致病基因的日趋细化，目前倾向于将电生理、基因和遗传方式结合进行精确分型。这种方法可以便于患者在病史、电生理分型之后，快速进行个体化基因筛查。

4、近年来关于cmt的分子机制研究越来越深入，它的发生与特定基因变异有着密切关系，现已发现的致病基因高达100多种。此外，其遗传形式也多种多样，有常染色体显性遗传、常染色体隐性遗传、x染色体连锁显性遗传和x染色体连锁隐性遗传，当中以常染色体显性(autosomal dominant，ad)遗传最多见，见于大部分cmt1和cmt2家系患者。通过分子遗传学方面的研究证实致病基因在维持周围神经轴索、髓鞘的结构完整性和功能完整性、蛋白质合成、细胞信号转导、线粒体功能等方面发挥着重要作用。在已经确定在cmt中起作用的途径中，有转录调控，蛋白质更新，雪旺细胞轴突相互作用，轴突运输以及线粒体融合和裂变。

5、sars1是氨酰trna合成酶(aminoacyl-trna synthases，arss)的一种，由trna结合功能域、氨酰化功能域和une-s三个功能域组成，其主要作用是将丝氨酸结合到其对应的trna上，参与机体蛋白合成。在对cmt机制研究发现，arss家族在其中起了重要作用。迄今为止，至少6种arss杂合突变导致cmt，并且大多数突变位于arss的氨酰化功能域。

6、目前，cmt致病基因sars1突变尚未见报道，本申请结合功能实验，可以为该病的解析、筛查、检测和治疗提供潜在的重要价值。

技术实现思路

1、鉴于此，本发明的目的在于提供cmt新致病基因的1种基因突变形式的检测试剂在制备cmt诊断试剂盒中的用途，同时提供基于sanger测序的检测方法，并通过功能学实验验证其致病性。这些可以为未确诊的cmt患者基因筛查、发病机制的解析、药物开发及治疗方案的制定提供依据和奠定基础。

2、本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

3、第1187位点发生突变的人类cmt致病基因sars1的检测试剂在制备cmt诊断试剂盒中的用途，所述第1187位点发生突变的人类cmt致病基因sars1的核苷酸序列如seq idno.1所示，所述第1187位点位于exon 9中，具体是野生型基因第11 87位的c突变为t。

4、作为实施例的优选方式，所述cmt诊断试剂盒至少包括一对引物序列，上游引物碱基序列如seq id no.2所示，下游引物碱基序列如seq idno.3所示。

5、作为实施例的优选方式，所述cmt诊断试剂盒至少包括一扩增体系，扩增体系包括：kod one mix 12.5μl，nuclease-free water 10μl，上游引物1μl，下游引物1μl，浓度＞20μg/μl的样本基因组dna 0.5μl。

6、作为实施例的优选方式，所述扩增体系进行扩增时，扩增条件为：预变性98℃1min；变性98℃ 5s，退火延伸68℃ 30s，30个循环。

7、作为实施例的优选方式，所述用途包括对cmt致病机理的解析及其药物开发。

8、sars1作为检测靶标在制备cmt诊断试剂盒中的应用，所述sars1的核苷酸序列如seq id no.1所示，其突变为第1187位的c突变为t。

9、一种cmt诊断试剂盒，包括能够检测如seq id no.1所示的sars1的第1187位的c突变为t的试剂。

10、作为实施例的优选方式，所述试剂包括pcr检测sars1是否突变的试剂。

11、作为实施例的优选方式，所述pcr所用的引物至少包括一对引物序列，上游引物碱基序列如seq id no.2所示，下游引物碱基序列如seq id no.3所示。

12、作为实施例的优选方式，所述pcr的扩增体系包括：kod one mix12.5μl，nuclease-free water 10μl，上游引物1μl，下游引物1μl，浓度＞20μg/μl的样本基因组dna0.5μl。

技术特征：

1.第1187位点发生突变的人类cmt致病基因sars1的检测试剂在制备cmt诊断试剂盒中的用途，其特征在于，所述第1187位点发生突变的人类cmt致病基因sars1的核苷酸序列如seq id no.1所示，所述第1187位点位于exon9中，具体是野生型基因第1187位的c突变为t。

2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述cmt诊断试剂盒至少包括一对引物序列，上游引物碱基序列如seq id no.2所示，下游引物碱基序列如seq id no.3所示。

3.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述cmt诊断试剂盒至少包括一扩增体系，扩增体系包括：kod one mix 12.5μl，nuclease-free water 10μl，上游引物1μl，下游引物1μl，浓度＞20μg/μl的样本基因组dna 0.5μl。

4.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述扩增体系进行扩增时，扩增条件为：预变性98℃1min；变性98℃5s，退火延伸68℃30s，30个循环。

5.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述用途包括对cmt致病机理的解析及其药物开发。

6.sars1作为检测靶标在制备cmt诊断试剂盒中的应用，其特征在于：所述sars1的核苷酸序列如seq id no.1所示，其突变为第1187位的c突变为t。

7.一种cmt诊断试剂盒，其特征在于：包括能够检测如seq id no.1所示的sars1的第1187位的c突变为t的试剂。

8.如权利要求7所述的诊断试剂盒，其特征在于：所述试剂包括pcr检测sars1是否突变的试剂。

9.如权利要求8所述的诊断试剂盒，其特征在于：所述pcr所用的引物至少包括一对引物序列，上游引物碱基序列如seq id no.2所示，下游引物碱基序列如seq id no.3所示。

10.如权利要求9所述的诊断试剂盒，其特征在于：所述pcr的扩增体系包括：kod onemix 12.5μl，nuclease-free water 10μl，上游引物1μl，下游引物1μl，浓度＞20μg/μl的样本基因组dna 0.5μl。

技术总结
本发明提供了第1187位点发生突变的人类CMT致病基因SARS1的检测试剂在制备CMT诊断试剂盒中的用途，所述第1187位点发生突变的人类CMT致病基因SARS1的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述第1187位点位于Exon 9中，具体是野生型基因第1187位的C突变为T。本发明可以为未确诊的CMT患者基因筛查、发病机制的解析、药物开发及治疗方案的制定提供依据和奠定基础。

技术研发人员：何瑾,陈万金,王柠
受保护的技术使用者：福建医科大学附属第一医院
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13