一种半滑舌鳎雌性特异蛋白的表达及应用的制作方法

本发明涉及生物，具体涉及一种半滑舌鳎雌性特异蛋白的表达及应用方法。

背景技术：

1、半滑舌鳎(cynoglossus semilaevis)是比目鱼的一种，属于舌鳎科，舌鳎属，是东北亚地区重要的海水养殖鱼类。半滑舌鳎以其肉质鲜美，口感爽滑而深受消费者喜爱，成为海水养殖鱼类中的名贵品种。半滑舌鳎存在明显的雌、雄生长差异，雌鱼生长可比雄鱼大2-4倍，因此养殖中提高雌鱼比例对于产量提升具有重要意义。半滑舌鳎属于zw性别决定类型，即理论上讲，zw基因型将发育为雌鱼，zz型发育成雄鱼。然而在实际生产中，有相当一部分的zw个体会性逆转为“伪雄鱼”，伪雄鱼生长和雄鱼相似，这极大限制了舌鳎产业的发展。

2、我们通过转录组分析分析，筛选了一个与雌鱼分化密切相关的基因模块，其核心网络由50个基因组成，大多位于w染色体上，对其中一个位于w染色体上的基因pitpβ_w进行了进一步的功能研究，发现其在雄鱼中不表达，只在雌鱼中特异表达，在卵巢中主要定位于i-iii期卵细胞，在半滑舌鳎卵巢细胞系中进行rna干扰会导致sox9a下降(xu et al.,2021；sun et al.,2022)。以上结果表明pitpβ_w在雌性分化中发挥重要作用，然而其在体内的作用尚不明确。其在雄鱼中表达后对性别分化是否有影响，具有重要的应用意义，通过表达重组蛋白并进行注射，从而研究相关基因表达模式和表型，是研究性别分化和生长关系的有效途径。

技术实现思路

1、本发明提供了半滑舌鳎雌性特异蛋白的表达及应用，具体而言，所述半滑舌鳎雌性特异蛋白为pitpβ_w蛋白，将其在雄性半滑舌鳎(雄鱼)中进行表达，可以调控雄性半滑舌鳎(雄鱼)中的基因表达。

2、本发明中，pitpβ_w蛋白，为phosphatidylinositol transfer protein(磷脂酰肌醇转移蛋白)；在一个实施方式中，本发明的pitpβ_w蛋白的基因序列如seq id no.1所示，其编码的蛋白氨基酸序列如seq id no.2所示。pitpβ_w蛋白为雌性半滑舌鳎所特有的，在雄性半滑舌鳎中未发现。

3、在一个实施方式中，本发明提供了pitpβ_w蛋白在调控雄性半滑舌鳎中的生长相关基因和/或性别分化相关基因的表达水平中的用途。

4、在优选的实施方式中，在雄性半滑舌鳎中引入pitpβ_w蛋白从而可以降低生长相关基因和/或性别分化相关基因的表达水平。

5、所述降低生长相关基因和性别分化相关基因的表达水平，是指，与没有引入pitpβ_w蛋白的对照相比，引入pitpβ_w蛋白可以降低雄性半滑舌鳎的生长相关基因和性别分化相关基因的表达水平；例如，与对照相比，基因表达水平至少降低50％、60％、70％或80％。

6、在一个实施方式中，所述“引入pitpβ_w蛋白”可以通过蛋白注射的方式，将pitpβ_w蛋白注射至雄性半滑舌鳎。在其他的实施方式中，所述“引入pitpβ_w蛋白”还可以通过在雄性半滑舌鳎中表达或者过表达pitpβ_w蛋白来实现。

7、在一个实施方式中，所述生长相关基因为igf1，所述性别分化相关基因为cyp19a；优选的，所述igf1的核酸序列如seq id no.3所示，所述cyp19a的核酸序列如seq id no.4所示。

8、另一方面，本发明还提供了一种调控雄性半滑舌鳎(雄鱼)中的基因表达水平的方法，所述方法包括在雄性半滑舌鳎中引入pitpβ_w蛋白的步骤。

9、在一个实施方式中，所述“引入pitpβ_w蛋白”可以通过蛋白注射的方式，将pitpβ_w蛋白注射至雄性半滑舌鳎。在其他的实施方式中，所述“引入pitpβ_w蛋白”还可以通过在雄性半滑舌鳎中表达或者过表达pitpβ_w蛋白来实现。

10、在一个实施方式中，所述调控雄性半滑舌鳎(雄鱼)中的基因表达的方法为降低雄性半滑舌鳎中的生长相关基因和/或性别分化相关基因的表达水平。

11、在一个实施方式中，所述生长相关基因为igf1，所述性别分化相关基因为cyp19a；优选的，所述igf1的核酸序列如seq id no.3所示，所述cyp19a的核酸序列如seq id no.4所示。

12、本发明利用pitpβ_w蛋白，成功在雄性半滑舌鳎中调控了生长相关基因和性别分化相关基因，对研究相关基因表达模式和表型，以及对雄性半滑舌鳎的生长和分化提供了良好的研究基础，具有广阔的应用前景。

技术特征：

1.pitpβ_w蛋白在调控雄性半滑舌鳎中的生长相关基因和/或性别分化相关基因的表达水平中的用途。

2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述生长相关基因为igf1，所述性别分化相关基因为cyp19a。

3.根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于，所述用途为在雄性半滑舌鳎中引入pitpβ_w蛋白从而降低生长相关基因和/或性别分化相关基因的表达水平。

4.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述pitpβ_w蛋白的氨基酸序列如seq idno.2所示。

5.一种调控雄性半滑舌鳎中的生长相关基因和/或性别分化相关基因的表达水平的方法，所述方法包括在雄性半滑舌鳎中引入pitpβ_w蛋白的步骤。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述pitpβ_w蛋白的氨基酸序列如seq idno.2所示。

7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述生长相关基因为igf1，所述性别分化相关基因为cyp19a。

8.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述方法包括在雄性半滑舌鳎中表达pitpβ_w蛋白的步骤。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述表达为过表达。

10.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述方法为降低控雄性半滑舌鳎中的生长相关基因和/或性别分化相关基因的表达水平的方法。

技术总结
本发明提供了pitpβ_w蛋白在调控雄性半滑舌鳎中的生长相关基因和性别分化相关基因的表达中的用途；本发明利用pitpβ_w蛋白成功在雄性半滑舌鳎中调控了生长相关基因和性别分化相关基因，对研究相关基因表达模式和表型，以及对雄性半滑舌鳎的生长和分化提供了良好的研究基础，具有广阔的应用前景。

技术研发人员：徐文腾,崔忠凯,孙宇轩,陈亚东,徐晓东,李文龙
受保护的技术使用者：中国水产科学研究院黄海水产研究所
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13