一种抗人PD-L1人源化抗体或其抗原结合片段及其应用的制作方法

本发明涉及生物医药，更具体地，涉及一种抗人pd-l1人源化抗体或其抗原结合片段及其应用。

背景技术：

1、程序化细胞死亡蛋白1(pd-1，也称为cd279)是一种表达在抗原刺激t细胞表面的共刺激受体。pd-l1(cd274)和pd-l2(cd273)是pd-1的两种配体。pd-l1表达在包括t细胞、b细胞、巨噬细胞、树突细胞、巨大细胞等造血细胞，及血管内皮细胞、角质细胞、胰岛细胞、星形胶质细胞、胎盘合包体滋养层、角膜表皮和内皮细胞在内的非造血细胞。pd-l1和pd-l2在多种肿瘤细胞和肿瘤基质中表达。pd-1和pd-l1均属于免疫超家族蛋白中的i形跨膜蛋白，由ig-v和ig-c样胞外结构域、跨膜结构域和短序列的胞内结构域组成。pd-l1和pd-1胞外区的相互作用能诱导pd-1蛋白构象变化，从而诱导胞内免疫受体酪氨酸抑制基序(itim)和免疫受体酪氨酸转化基序(itsm)被src家族激酶磷酸化。磷酸化的酪氨酸基序随后招募shp-2和shp-1蛋白酪氨酸磷酸酶下调t胞活化信号。除pd-1外，pd-l1与cd80相互作用，从而传递抑制t细胞活性的信号。pd-1和pd-l1相互作用可在多方面下调t细胞活性，包括抑制t细胞增殖，细胞因子的释放和其他效应功能。

2、pd-1和pd-l1相互作用对于免疫系统的稳态至关重要。不同基因型的pd-1缺陷型小鼠倾向于发生狼疮样自体免疫病或致命性自体免疫心肌病。pd-1缺陷型小鼠改变了胸腺t细胞的驯化，pd-l1的阻断能够破坏胎儿和母体之间的耐受性。同时，抑制pd-1和pd-l1的相互作用增强了宿主对病原体的免疫作用。pd-l1表达在多种不良预后的肿瘤(例如，肾癌、胃癌、尿道上皮癌、卵巢癌和黑色素瘤)上，使用pd-l1抗体能杀死肿瘤细胞或抑制杀伤性t细胞ctls的活性。

3、鉴于pd-1、cd80和pd-l1在下调免疫反应方面的重要性，开发阻断pd-l1蛋白与pd-1、cd80相互作用，同时免疫原性风险低的抗pd-l1抗体，从而将其用于肿瘤免疫治疗具有重要意义。

4、鉴于此，特提出本发明。

技术实现思路

1、本发明提供了一种抗人pd-l1人源化抗体或其抗原结合片段，所述抗体包含重链cdr区和轻链cdr区，重链cdr区由hcdr1、hcdr2、hcdr3组成，轻链cdr区由lcdr1、lcdr2、lcdr3组成，hcdr1、hcdr2、hcdr3的氨基酸序列依次选自seq id no:14～16，lcdr1、lcdr2、lcdr3的氨基酸序列依次选自seq id no:17～19，所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如seq id no:3～7任一所示。

2、gdsitsgywn(seq id no:14)

3、yisytgstyqnpslks(seq id no:15)

4、srawirtyfdy(seq id no:16)

5、svsssisssnlh(seq id no:17)

6、gtsnlas(seq id no:18)

7、qqwssyplt(seq id no:19)

8、qvqlqesgpglvkpsetlsltcavygdsitsgywnwirkppgkgleyigyisytgstyqnpslksritmsrdtsknqyylklssvtaadtavyycarsrawirtyfdywgqgtlvtvss(seq id no:3)

9、qvqlqesgpglvkpsetlsltcavygdsitsgywnwirkppgkkleyigyisytgstyqnpslksritmsrdtsknqyylklssvtaadtavyycarsrawirtyfdywgqgtlvtvss(seq id no:4)

10、qvqlqesgpglvkpsetlsltcavygdsitsgywnwirkppgkkleyigyisytgstyqnpslksritfsrdtsknqyylklssvtaadtavyycarsrawirtyfdywgqgtlvtvss(seq id no:5)

11、qvqlqesgpglvkpsetlsltcsvygdsitsgywnwirkppgkkleymgyisytgstyqnpslksritfsrdtsknqyylklssvtaadtavyycarsrawirtyfdywgqgtlvtvss(seq id no:6)

12、evqlqesgpglvkpsetlsltcavygdsitsgywnwirkppgkgleymgyisytgstyqnpslksritfsrdtsknqyylklssvtaadtatyycarsrawirtyfdywgqgtlvtvss(seq id no:7)

13、本发明还提供了所述抗体或其抗原结合片段相关的核酸、载体、细胞。

14、本发明还提供了一种生产所述抗体或其抗原结合片段的方法。

15、本发明还提供了所述抗体或其抗原结合片段相关的药物组合物。

16、本发明还提供了所述抗体或其抗原结合片段、所述核酸、所述载体、所述细胞、所述药物组合物在制备用于预防或治疗免疫性疾病、或肿瘤相关疾病的药物中的应用。

技术特征：

1.一种抗人pd-l1人源化抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体包含重链cdr区和轻链cdr区，重链cdr区由hcdr1、hcdr2、hcdr3组成，轻链cdr区由lcdr1、lcdr2、lcdr3组成，hcdr1、hcdr2、hcdr3的氨基酸序列依次选自seq id no:14～16，lcdr1、lcdr2、lcdr3的氨基酸序列依次选自seq id no:17～19，所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如seq idno:3～7任一所示。

2.根据权利要求1所述抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如seq id no:8～13任一所示。

3.根据权利要求1或2所述抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体的重链可变区和轻链可变区的氨基酸序列如下表任一项所示：

4.根据权利要求1或2所述抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如seq id no.3～6任一所示、轻链可变区的氨基酸序列如seq id no.11所示，或所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如seq id no.4、轻链可变区的氨基酸序列如seq id no.12所示，或所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如seq id no.7、轻链可变区的氨基酸序列如seq id no.13所示。

5.根据权利要求1或2所述抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如seq id no.3、轻链可变区的氨基酸序列如seq id no.11所示，或所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如seq id no.4、轻链可变区的氨基酸序列如seq id no.12所示，或所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如seq id no.7、轻链可变区的氨基酸序列如seq id no.13所示。

6.根据权利要求1或2所述抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体含有重链恒定区和轻链恒定区，所述重链恒定区序列选自igg1、igg2、igg3、igg4、iga、igm、ige、igd中的任一种的恒定区序列；

7.根据权利要求1或2任一项所述抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体为双特异性抗体、cdr移植抗体或多聚体抗体中的任一种或几种；所述抗原结合片段为scfv、fab、fab’、f(ab’)2及fv中的任一种或几种。

8.核酸，其特征在于，所述核酸编码权利要求1-7任一项所述抗体或其抗原结合片段。

9.载体，其特征在于，所述载体包含权利要求8所述核酸。

10.细胞，其特征在于，所述细胞携带权利要求8所述核酸、含有权利要求8所述载体或表达权利要求1-7任一项所述抗体或其抗原结合片段。

11.一种生产权利要求1-7任一项所述抗体或其抗原结合片段的方法，包括：在培养基中培养权利要求10所述细胞；以及从培养基中或从所培养的细胞中回收如此产生的抗体或其抗原结合片段。

12.药物组合物，其特征在于，所述组合物含有权利要求1-7任一项所述抗体或其抗原结合片段、或权利要求8所述核酸、或权利要求9所述载体或权利要求10所述细胞。

13.权利要求1-7任一项所述抗体或其抗原结合片段、权利要求8所述核酸、权利要求9所述载体、权利要求10所述细胞、权利要求12所述药物组合物在制备用于预防或治疗免疫性疾病、或肿瘤相关疾病的药物中的应用。

技术总结
本发明涉及生物医药技术领域，更具体地，涉及一种抗人PD‑L1人源化抗体或其抗原结合片段及其应用。本发明中的抗体或其抗原结合片段与PD‑L1的亲和力高，结合特异性强，能有效阻断PD‑L1与PD‑1、CD80的结合，并刺激细胞因子产生，且抗肿瘤作用显著，能够与单独或与其它试剂组合用于预防或治疗免疫性疾病、或肿瘤相关疾病。

技术研发人员：霍永庭,芦迪,欧颖烨,张婵,路力生,罗甜
受保护的技术使用者：广东菲鹏制药股份有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/12