检测猴痘病毒的引物探针组合、试剂盒、方法及应用与流程

本发明涉及一种检测猴痘病毒的双靶标引物探针组合、试剂盒、方法及应用，属于生物医药。

背景技术：

1、猴痘(monkeypox，mpv)亦称猴天花，并已被定为人畜共患病，猴痘是一种罕见的病毒性人畜共患病(从动物传播给人的病毒)，病人症状与过去在天花病人身上所观察到的相似，但临床严重程度较轻。随着在1980年消灭了天花和随后停止接种天花疫苗，猴痘成为最严重的正痘病毒。目前，国际上尚无一种通用的、安全快速的对天花和猴痘病毒感染的血清学诊断方法，而生物学鉴别诊断(病毒分离培养、电镜观察等)通常需3-6天，且存在生物安全危害隐患。由于血清学诊断与临床诊断的灵敏度不高，不易鉴别诊断天花、猴痘及其他出皮疹的疾病。目前，pcr是国内外检测猴痘病毒的主要检测方法，但需要依赖设备，且较易产生污染。我国目前尚未建立除pcr检测法外的其他诊断方法。且目前针对猴痘病毒引起的猴痘是以单个病毒基因作为检测靶标，易出现漏检导致的假阴性结果，即针对猴痘病毒单个病毒基因的检出限在日常使用中还存在不准确的缺陷。因此，本技术领域亟需一种可以快速准确的进行猴痘病毒检测的检测体系。获得一种快速准确的猴痘病毒诊断方法，才能制定相关措施政策，控制其可能造成的伤害，为应对可能出现的猴痘疫情提供应急技术储备。

2、环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification，lamp)，其特点是针对靶基因的6个区域设计4种特异引物，在链置换dna聚合酶(bst dna polymerase)的作用下，60～65℃恒温扩增，15～60分钟左右即可实现109～1010倍的核酸扩增，具有操作简单、特异性强、产物易检测等特点。同时为了提高反应速度，还可以通过引入两条环引物加快反应，环引物与合成过程中形成的环状区域互补，增加了在lamp反应中dna合成的起点数量，可大大缩短检测时间，提高检测效率。该技术除了高特异性、高灵敏度外，操作十分简单，对仪器设备要求低，一台水浴锅或恒温箱就能实现反应，结果的检测也很简单，不需要像pcr那样进行凝胶电泳，环介导等温扩增反应的结果通过肉眼观察白色浑浊或绿色荧光的生成来判断，简便快捷，适合基层快速诊断。

技术实现思路

1、本发明的目的在于解决如何获得一种可以快速准确的进行猴痘病毒检测的检测体系的技术问题。

2、为达到解决上述问题的目的，本发明所采取的技术方案是提供一种用于检测猴痘病毒的诊断试剂，所述试剂用于检测猴痘病毒的opg002基因和ati基因。

3、优选地，所述试剂中包括核苷酸序列如seq id no.1至seq id no.52所示的引物和探针。引物和探针如下：

4、

5、

6、优选地，所述探针两端的碱基分别标记有荧光基团和淬灭基团。

7、本发明提供一种用于检测猴痘病毒的lamp试剂盒，所述试剂盒中包括核苷酸序列如seq id no.1至seq id no.52所示的引物和探针。

8、本发明提供一种引物组合在制备检测猴痘病毒检测试剂盒中的应用，所述引物组合包括核苷酸序列如seq id no.1至seq id no.52所示的引物和探针。

9、相比现有技术，本发明具有如下有益效果：

10、通过本发明获得一种可以快速准确的进行猴痘病毒诊断的试剂盒及诊断方法；所提供的试剂盒使用简便快捷，适合基层快速诊断。

技术特征：

1.一种用于检测猴痘病毒的诊断试剂，其特征在于，所述试剂用于检测猴痘病毒的opg002基因和ati基因。

2.根据权利要求1所述的一种用于检测猴痘病毒的诊断试剂，其特征在于，所述试剂中包括核苷酸序列如seq id no.1至seq id no.52所示的引物和探针。

3.根据权利要求2所述的一种用于检测猴痘病毒的诊断试剂，其特征在于，所述探针两端的碱基分别标记有荧光基团和淬灭基团。

4.一种用于检测猴痘病毒的lamp试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中包括核苷酸序列如seq id no.1至seq id no.52所示的引物和探针。

5.一种引物组合在制备检测猴痘病毒检测试剂盒中的应用，其特征在于，所述引物组合包括核苷酸序列如seq id no.1至seq id no.52所示的引物和探针。

技术总结
本发明涉及一种检测猴痘病毒的双靶标引物探针组合、试剂盒、方法及应用，属于生物医药技术领域。通过本发明提供一种用于检测猴痘病毒的诊断试剂，试剂用于检测猴痘病毒的OPG002基因和ATI基因；试剂中包括核苷酸序列如SEQ IDNo.1至SEQ ID No.52所示的引物和探针。探针两端的碱基分别标记有荧光基团和淬灭基团。通过本发明提供一种用于检测猴痘病毒的LAMP试剂盒，以及一种引物组合在制备检测猴痘病毒检测试剂盒中的应用；通过本发明获得一种可以快速准确的进行猴痘病毒诊断的试剂盒及诊断方法；所提供的试剂盒使用简便快捷，适合基层快速诊断。

技术研发人员：张驰宇,曾怡,赵勇娟
受保护的技术使用者：上海市公共卫生临床中心
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13