用于诱导父本UBE3A表达的寡核苷酸的制作方法

发明领域本发明涉及与snord109b下游的snhg14互补并杂交的寡核苷酸(寡聚物)，其导致诱导动物或人中泛素-蛋白连接酶e3a(ube3a)的父本表达。本发明还涉及用于治疗安吉尔曼综合征(angelman syndrome)的药物组合物和方法。

背景技术：

1、安吉尔曼综合征是由母本遗传染色体15q11.2上的ube3a基因的缺失或失活引起的神经遗传病。ube3a基因的父本拷贝通过称为snhg14(也称为ube3a-ats)的ube3a内源性反义转录物在神经元中经受基因组印记和沉默(meng等人2012hum molgenet.vol.21pp.3001-12)。除神经元之外的其它细胞类型似乎表达来自母本和父本等位基因的ube3a基因。

2、安吉尔曼综合征的特征在于严重的智力和发育障碍、睡眠障碍、发作(seizures)、急动性运动、脑电图(eeg)异常、频繁的笑声或微笑、以及深度的语言障碍。

3、wo 2012/064806公开了通过使用拓扑异构酶抑制剂在细胞中诱导ube3a表达的方法。该方法可以用于治疗安吉尔曼综合征。其并未公开反义寡核苷酸。

4、wo 2014/004572公开了具有靶向小鼠ube3a-ats的2’-o-甲氧基乙基-rna(moe)修饰的寡核苷酸。所述寡核苷酸仅在小鼠相关测定中进行测试。在mbii-52snorna(也称为snord115)下游和ube3a前-mrna上游的区域，小鼠和人之间不存在保守性。因此，靶向小鼠ube3a-ats的寡核苷酸不能转换成将在人中起作用的寡核苷酸。其并未公开靶向人ube3a-ats的寡核苷酸。

5、发明目的

6、本发明鉴定了新型寡核苷酸，其在神经元中诱导人类父本ube3a表达而不显著影响父本snord115、snord116和snrpn转录物的表达。

技术实现思路

1、本发明涉及寡核苷酸，其靶向能够抑制ube3a表达的核酸并且治疗或预防与ube3a活性降低有关的疾病(特别是在神经元细胞中)。

2、因此，在本发明的第一个方面提供了这样的寡核苷酸，所述寡核苷酸包含长度为10至30个核苷酸的连续核苷酸序列，其与人15号染色体版本grch38.p2上对应于位置25278410至25419462的人snhg14长非编码rna部分具有至少98％互补性。该区域也类似于seq id no:1。寡核苷酸可以是反义寡核苷酸，优选具有间隔聚体(gapmer)设计。优选地，寡核苷酸能够通过降解、减少或除去ube3a抑制物(suppressor)(特别是通过减少snord109b下游的snhg14长非编码rna转录物)来诱导ube3a的表达(特别是神经元中的父本ube3a表达)。ube3a再表达是在不显著影响snord115表达的情况下实现的。靶核酸的降解优选通过核酸酶募集实现。

3、在另外的方面，本发明提供了包含本发明的寡核苷酸和药用稀释剂、载体、盐和/或辅剂的药物组合物。

4、在另外的方面，本发明提供了通过将本发明的寡核苷酸或组合物以有效量施用至所述细胞以在体内或体外诱导其中父本ube3a的表达被抑制的靶细胞中的ube3a表达的方法。

5、在另外的方面，本发明提供了用于治疗或预防与ube3a的体内活性相关的疾病、病症或功能障碍的方法，所述方法包括将治疗或预防有效量的本发明的寡核苷酸施用至患有或易感于所述疾病、病症或功能障碍的受试者。

6、在另外的方面，本发明的寡核苷酸或组合物用于治疗或预防安吉尔曼综合征。

技术特征：

1.反义寡核苷酸，其中所述寡核苷酸是寡核苷酸化合物aattatttatacaccatcat(cmpid no:585_1)，其中核苷酸中由大写字母表示的核苷是β-d-氧基lna核苷，核苷酸中由小写字母表示的核苷是dna核苷，全部的lna修饰的c是5-甲基胞嘧啶，全部的核苷间连接是硫代磷酸酯核苷间连接。

2.缀合物，其包含根据权利要求1所述的寡核苷酸和与所述寡核苷酸共价连接的至少一个缀合部分。

3.药物组合物，其包含根据权利要求1所述的寡核苷酸或根据权利要求2所述的缀合物，以及药用稀释剂、溶剂、载体、盐和/或辅剂。

4.根据权利要求3所述的药物组合物，其中所述要用稀释剂包括磷酸盐缓冲液(pbs)。

5.根据权利要求3或4所述的药物组合物，其中所述药用盐是钠盐。

6.根据权利要求3或4所述的药物组合物，其中所述药用盐是钾盐。

7.根据权利要求1所述的反义寡核苷酸或根据权利要求2所述的缀合物或根据权利要求3-6任一项所述的药物组合物，其用作药物。

8.一种用于诱导其中父本ube3a的表达被抑制的靶细胞中的ube3a表达的体外方法，所述方法包括将根据权利要求1所述的寡核苷酸或根据权利要求2所述的缀合物或根据权利要求3-6任一项所述的药物组合物以有效量施用至所述细胞。

9.根据权利要求8所述的方法，其中与对照相比，ube3a的表达增加至少40％。

10.根据权利要求8或9所述的方法，其中与对照相比，snord109b下游的snhg14转录物的水平降低至少30％。

11.根据权利要求8-10中任一项所述的方法，其中所述靶细胞是神经元细胞。

12.根据权利要求8-11中任一项所述的方法，其中与对照相比，snord115的表达未受到显著影响。

13.根据权利要求1所述的寡核苷酸或根据权利要求2所述的缀合物或根据权利要求3-6任一项所述的药物组合物用于制备治疗或预防安吉尔曼综合征的药物中的应用。

14.根据权利要求1所述的反义寡核苷酸或根据权利要求2所述的缀合物的药用盐。

15.权利要求1所述的反义寡核苷酸或根据权利要求2所述的缀合物的药用钠盐。

16.权利要求1所述的反义寡核苷酸或根据权利要求2所述的缀合物的药用钾盐。

技术总结
本发明涉及能够在动物或人神经元中诱导由父本等位基因表达泛素‑蛋白连接酶E3A(UBE3A)的寡核苷酸。寡核苷酸通过与SNORD109B下游的SNHG14长非编码RNA杂交来靶向UBE3A父本等位基因的抑制物。本发明还涉及用于治疗安吉尔曼综合征(Angelman syndrome)的药物组合物和方法。

技术研发人员：韦罗妮卡·科斯塔,马伊·黑特耶恩,马里乌斯·赫纳,拉维·姚高希亚,马斯·奥波尔·詹森,克里斯托弗·帕奇,吕克·彼泽森,索伦·韦斯特高·拉斯穆森
受保护的技术使用者：豪夫迈·罗氏有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/12