一株嗜酸乳杆菌LS001及其培养方法与抑制幽门螺杆菌的应用与流程

本发明涉及微生物的，具体涉及一株嗜酸乳杆菌ls001及其培养方法与抑制幽门螺杆菌的应用。

背景技术：

1、当前社会，生活节奏越来越快，工作压力也越来越大，许多人的作息无规律，饮食不规律，高盐高油高脂食物摄入过多，导致胃部不适症状增加。胃病种类多、成分复杂。胃病的病因主要是由幽门螺杆菌感染、长期受到刺激性物质的伤害、药物的刺激、外部环境改变、生活饮食不规律等因素引起的。

2、早在1994年，国际癌症研究机构(iarc)把幽门螺杆菌纳入了i类人类致癌物，致癌风险确认无误。幽门螺杆菌(hp)是一种革兰氏阴性菌，生存能力极强，它可以寄生在胃黏膜，藏在胃小凹内，既能避免胃酸环境的影响，也不易随着食物排出体外。在生长繁殖过程中会产生毒素，破坏胃黏膜，引发慢性、浅表性胃炎等疾病，逐步发展为胃溃疡甚至胃癌。67-80％的胃溃疡，95％的十二指肠溃疡都与hp有关，且能增加4-6倍的胃癌风险。幽门螺杆菌感染发展到胃癌，还需要经历慢性浅表性胃炎、萎缩性胃炎、肠上皮化生、不典型增生四个阶段。因此，只要我们及时阻断肠上皮化生及之前的病变，同时清除幽门螺杆菌，就能阻止胃癌的发生。随着时间的变迁，hp对常用抗生素的耐药性逐渐增加，因而导致hp的根治率越来越低。

3、以菌治菌的新思路已经成为目前治疗hp的新手段。主要是通过益生菌来抑制、根除体内的幽门螺杆菌，达到缓解胃部问题，养胃护胃的作用。因此开发更多的益生菌菌株对抗幽门螺杆菌是目前微生物领域亟待解决的问题。

技术实现思路

1、针对现有技术中在对抗幽门螺杆菌中存在的上述不足，本发明提供一株嗜酸乳杆菌ls001及其培养方法与抑制幽门螺杆菌的应用，以解决上述技术问题。

2、本发明的技术方案如下：

3、第一方面，本发明提供一株嗜酸乳杆菌(lactobacillus acidophilus)ls001，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为cgmcc no.23649，保藏日期为2021年10月22日，保藏机构地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。

4、所述的嗜酸乳杆菌ls001是利用现代微生物技术内蒙古自治区锡林浩特的牧民自制酸奶中分离纯化所得。

5、所述的嗜酸乳杆菌ls001的dna序列如seq id no.1所示。

6、第二方面，本发明提供一种上述嗜酸乳杆菌ls001的高密度培养方法，具体步骤如下：

7、(1)发酵菌种的活化

8、将嗜酸乳杆菌ls001斜面保藏菌种接种至已灭菌的10-20ml 10％的脱脂乳摇瓶中进行活化，然后按照体积比1％-5％的接种量接种于已灭菌的mrs液体培养基中，以适应菌株在培养基中的生长，活化好的菌株放于4℃冰箱中，备用。

9、(2)种子培养

10、按照体积比1％-10％的接种量将步骤(1)活化好的菌种接种于已灭菌的mrs液体培养基中，37℃静置培养12-36h。

11、(3)发酵培养

12、将步骤(2)培养好的种子液按照1％-10％的接种量转接至已灭菌的改良肉汤培养基中，于30-37℃，50-200rpm，0.01-0.02mpa培养12-36h，培养过程中流加60％-70％葡萄糖溶液，通过流加氨水控制发酵液ph值为5.5-6.0，得到高密度的嗜酸乳杆菌ls001发酵液。

13、优选的，所述步骤(3)中改良肉汤培养基包括以下组分：酵母粉1-10g/l，酵母蛋白胨1-10g/l，葡萄糖5-15g/l，kh2po41-3g/l，mgso4·7h2o 1-2/l，番茄浸出粉1-5g/l，吐温800.5-1.0g/l，硫酸亚铁0.05-0.15g/l，硫酸锰0.05-0.15g/l，生物素0.01-0.1g/l，vb120.01-0.5g/l，烟酰胺0.01-0.5g/l，盐酸硫铵0.01-0.1g/l，ph 5.5-6.0。

14、优选的，所述步骤(3)中培养方法为：按照通气量1：0.01通入无菌空气，保持罐压0.01-0.02mpa。

15、第三方面，本发明提供一种包含上述嗜酸乳杆菌ls001的发酵制品。

16、所述发酵制品的制备方法如下：

17、(1)收集菌体

18、将高密度的嗜酸乳杆菌ls001发酵液通过微滤膜进行过滤处理，当浓缩1-5倍时，加入等体积的纯化水，再进行过滤浓缩；直至滤出液的电导率≤2s/m，浓缩1-5倍后收集菌体。

19、(2)配料

20、根据步骤(1)浓缩液中嗜酸乳杆菌ls001的菌体数量，添加等量的其他类型的益生菌和干燥保护剂，搅拌均匀，使物料维持10-15℃。

21、(3)干燥

22、将复配液均匀的平铺在真空低温连续带式干燥机的干燥带上，控制温度25℃-30℃进行真空干燥。

23、(4)粉碎、包装

24、收集干燥后的物料，用粉碎机进行粉碎，粉碎过程控制温度≤30℃。按照产品类型进行无菌包装。

25、所述步骤(2)中的益生菌为鼠李糖乳杆菌gs014；所述鼠李糖乳杆菌(lactobacillus rhamnosus)gs014，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为cgmcc no.23646，保藏日期为2021年10月22日，保藏机构地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。

26、所述步骤(2)中，干燥保护剂为：10％-15％低聚半乳糖、10％-15％低聚果糖、5％-10％脱脂乳粉、5％-10％异麦芽糊精、0.5％-1％硅酸钙。

27、第四方面，本发明提供一种嗜酸乳杆菌ls001在抑制幽门螺杆菌中的应用。

28、本发明的有益效果为：

29、(1)本发明中的嗜酸乳杆菌ls001高密度发酵工艺能够使各批次之间菌体差异最小化，提高菌体的稳定性。

30、(2)本发明中的制品在生产过程中添加了同类型的乳酸菌，使各益生菌之间起到了互助作用，更利于预防和抑制幽门螺杆菌。

31、(3)本发明提供的嗜酸乳杆菌ls001制品可以作为日常膳食食用，也可以进行日常的身体调理食用，又可以作为药品用于治疗疾病，能够很好的预防和抑制幽门螺杆菌，从而维护胃肠道内的微生态平衡。

技术特征：

1.一株嗜酸乳杆菌ls001，其特征在于，所述嗜酸乳杆菌(lactobacillusacidophilus)ls001，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为cgmccno.23649，保藏日期为2021年10月22日，保藏机构地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。

2.一种如权利要求1所述的嗜酸乳杆菌ls001的高密度培养方法，其特征在于，具体步骤如下：

3.如权利要求2所述的高密度培养方法，其特征在于，所述步骤(3)中改良肉汤培养基包括以下组分：酵母粉1-10g/l，酵母蛋白胨1-10g/l，葡萄糖5-15g/l，kh2po41-3g/l，mgso4·7h2o1-2/l，番茄浸出粉1-5g/l，吐温80 0.5-1.0g/l，硫酸亚铁0.05-0.15g/l，硫酸锰0.05-0.15g/l，生物素0.01-0.1g/l，vb120.01-0.5g/l，烟酰胺0.01-0.5g/l，盐酸硫铵0.01-0.1g/l，ph＝5.5-6.0。

4.如权利要求2所述的高密度培养方法，其特征在于，所述步骤(3)中培养方法为：按照通气量1：0.01通入无菌空气，保持罐压0.01-0.02mpa。

5.一种包含如权利要求1所述的嗜酸乳杆菌ls001的发酵制品。

6.一种如权利要求5所述的发酵制品的制备方法，其特征在于，制备步骤如下：

7.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中的益生菌为鼠李糖乳杆菌gs014；所述鼠李糖乳杆菌(lactobacillusrhamnosus)gs014，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为cgmccno.23646，保藏日期为2021年10月22日，保藏机构地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。

8.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中，干燥保护剂为：10％-15％低聚半乳糖、10％-15％低聚果糖、5％-10％脱脂乳粉、5％-10％异麦芽糊精、0.5％-1％硅酸钙。

9.一种如权利要求1所述的嗜酸乳杆菌ls001在制备抑制幽门螺杆菌产品中的应用。

技术总结
本发明涉及一株嗜酸乳杆菌LS001及其培养方法与抑制幽门螺杆菌的应用，属于微生物的技术领域。所述嗜酸乳杆菌(lactobacillusacidophilus)LS001，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为CGMCCNo.23649，保藏日期为2021年10月22日，保藏机构地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。本发明提供的嗜酸乳杆菌LS001制品可以作为日常膳食食用，也可以进行日常的身体调理食用，又可以作为药品用于治疗疾病，能够很好的预防和抑制幽门螺杆菌，从而维护胃肠道内的微生态平衡。

技术研发人员：李云旭,李华文,马乐辉,刘瑞峰,韩清波
受保护的技术使用者：天津小薇生物科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/11