非洲猪瘟病毒pA104R蛋白免疫优势性B细胞抗原表位及其单克隆抗体与应用

本发明属于分子免疫学，具体涉及一种非洲猪瘟病毒pa104r蛋白优势性b细胞抗原表位多肽及其单克隆抗体与应用。

背景技术：

1、非洲猪瘟(asf)是一种具有高度传染性的出血性疾病，以高热、毒血症、出血性素质和高死亡率为特点。非洲猪瘟病毒(asfv)是非洲猪瘟病毒科非洲猪瘟病毒属的唯一成员，也是唯一的大型虫媒dna病毒。这种疾病由于发病率和死亡率高，常常给受影响国家的养猪业造成毁灭性的经济损失，因此被世界动物卫生组织(oie)列为法定报告疾病，我国也将其列为重点防范的一类动物疫病。

2、

3、尽管疫苗接种是控制大多数动物疾病的理想方法。但由于病毒基因组和病毒组成的复杂性，免疫与感染机理不清阻碍了疫苗的研发。迄今为止，还没有可用于预防和控制asfv感染的商品疫苗和有效的抗病毒药物。为了促进该病防控技术研究，迫切需要开展asfv重要抗原蛋白免疫学功能研究，解析鉴定具有免疫保护功能及血清学诊断价值的病毒蛋白抗原。

技术实现思路

1、pa104r是非洲猪瘟病毒编码的一种具有组蛋白样特征的结构蛋白，参与病毒的dna复制、转录、及基因组包装，是一种asfv复制所必须的蛋白。pa104r免疫原性强能够在病毒感染的动物体诱导较高的抗体水平，被认为是一种极具价值的疫苗候选基因。已有研究表明pa104r能够抑制天然免疫，其发挥生物学功能的dna结合功能区位于蛋白中后端区域(中国专利cn114989266a，一种非洲猪瘟病毒pa104r蛋白免疫抑制相关氨基酸位点及其应用)。

2、本发明的目的在于提供一种非洲猪瘟病毒pa104r蛋白的单克隆抗体与其应用，以及提供一株分泌所述单克隆抗体的杂交瘤细胞。

3、本发明的目的还在于提供非洲猪瘟病毒pa104r蛋白的优势性b细胞抗原表位肽与其应用。

4、本发明的目的通过下述技术方案实现：

5、一种非洲猪瘟病毒pa104r蛋白的单克隆抗体ah7，由杂交瘤细胞株ah7产生。所述的单克隆抗体ah7的识别表位位于pa104r蛋白的mstkkkptitkqelysl(seq id no.1) 区，该区域氨基酸序列在所有基因型非洲猪瘟病毒中高度保守，且不包含该蛋白免疫抑制区。

6、所述的杂交瘤细胞株ah7，于2022年10月25日保藏于中国典型培养物保藏中心(地址：中国武汉武汉大学)，其分类命名为杂交瘤细胞株ah7，保藏编号为cctcc no：c2022334。

7、所述的非洲猪瘟病毒pa104r蛋白免疫优势性b细胞抗原表位，其位于pa104r蛋白的 mstkkkptitkqelysl区。

8、一种非洲猪瘟病毒pa104r蛋白免疫优势性b细胞抗原表位肽，其氨基酸序列为mstkkkptitkqelysl的全部或部分。

9、所述的非洲猪瘟病毒pa104r蛋白的单克隆抗体ah7或其免疫优势性b细胞抗原表位肽可用于制备如下产品：asfv的病原学诊断产品，asfv的血清学诊断产品，asfv的免疫学检测产品，防治asfv的产品。

10、所述的非洲猪瘟病毒pa104r蛋白免疫优势性b细胞抗原表位肽还具有如下应用：可用于特异性地检测机体免疫或感染后产生的抗pa104r蛋白抗体，可用于asfv感染诊断，疫苗免疫效果评价以及作为各类疫苗组份诱导免疫猪产生特异性抗体。

11、所述的非洲猪瘟病毒pa104r蛋白免疫优势性b细胞抗原表位肽还具有制备猪瘟疫苗的应用。

12、所述的疫苗包含亚单位疫苗、多表位嵌合疫苗、dna疫苗、mrna疫苗、病毒载体疫苗等。

13、本发明的单克隆抗体具有如下优点和有益效果：

14、(1)该抗体识别抗原表位在所有基因型asfv中高度保守。

15、(2)易于大量生产；效价高，纯化后抗体效价大于1/32,768,000。

16、(3)可广泛应用于非洲猪瘟病毒的病原学诊断、血清学诊断、免疫学检测、疾病防治，及致病机理研究等。为制备非洲猪瘟病毒诊断试剂和疫苗提供了新的材料，为制备抗非洲猪瘟病毒药物提供了新的方向。

17、本发明的pa104r优势b细胞抗原表位具有如下优点和有益效果：

18、(1)保守性高、通用性好，在所有基因型asfv中高度保守。

19、(2)该优势b细胞抗原表位序列精短，不包含天然免疫抑制区，该b细胞抗原表位多肽，或与其他蛋白抗原优势区的组合，在制备非洲猪瘟疫苗中具有高度应用价值，所述的疫苗包含亚单位疫苗、多表位嵌合疫苗、dna疫苗、mrna疫苗、病毒载体疫苗等。该b细胞抗原表位多肽，可以发挥该蛋白的免疫保护功能，不具有的免疫抑制特性，可以实现多抗原的嵌合使用，实现更好的保护效果。

20、(3)可广泛应用于非洲猪瘟病毒的病原学诊断、血清学诊断、免疫学检测、疾病防治，应用于非洲猪瘟疫苗的制备(所述的疫苗包含亚单位疫苗、多表位嵌合疫苗、dna疫苗、mrna疫苗、病毒载体疫苗等)，及致病机理研究等。为制备非洲猪瘟疫苗和诊断试剂提供了新的材料，为制备抗非洲猪瘟病毒药物提供了新的方向。

技术特征：

1.一种非洲猪瘟病毒pa104r蛋白的单克隆抗体，其特征在于：由保藏编号为cctcc no：c2022334的杂交瘤细胞株产生。

2.产生权利要求1所述的单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其特征在于：保藏编号为cctccno：c2022334。

3.权利要求1所述的单克隆抗体的应用，其特征在于：所述的应用为制备如下至少一种产品中的应用：asfv的病原学诊断产品，asfv的血清学诊断产品，asfv的免疫学检测产品，防治asfv的产品。

4.一种非洲猪瘟病毒pa104r优势性b细胞抗原表位，其特征在于：位于pa104r蛋白的mstkkkptitkqelysl区。

5.一种非洲猪瘟病毒pa104r抗原表位肽，其特征在于：其氨基酸序列为mstkkkptitkqelysl的全部或部分。

6.权利要求5所述的抗原表位肽的应用，其特征在于：所述的应用为制备如下至少一种产品中的应用：asfv的病原学诊断产品，asfv的血清学诊断产品，asfv的免疫学检测产品，防治asfv的产品。

7.权利要求5所述的抗原表位肽的应用，其特征在于：所述的应用包括如下中的至少一种：特异性地检测机体免疫或感染后产生的抗pa104r蛋白抗体，asfv感染诊断，疫苗免疫效果评价，作为疫苗组分诱导免疫猪产生特异性抗体。

8.权利要求5所述的抗原表位肽在制备预防或治疗非洲猪瘟疫苗中的应用，其特征在于：所述的疫苗包含亚单位疫苗、dna疫苗、mrna疫苗、病毒载体疫苗。

技术总结
本发明公开了一种非洲猪瘟病毒pA104R蛋白免疫优势性B细胞抗原表位及其单克隆抗体与应用，属于分子免疫学技术领域。本发明的非洲猪瘟病毒pA104R蛋白的单克隆抗体由保藏编号为CCTCC NO：C2022334的杂交瘤细胞株产生，该单克隆抗体识别表位位于pA104R蛋白的MSTKKKPTITKQELYSL区，其为pA104R蛋白免疫优势性B细胞抗原表位区。本发明可广泛应用于非洲猪瘟病毒的病原学诊断、血清学诊断、免疫学检测、疾病防治，应用于非洲猪瘟疫苗的制备，及致病机理研究等。本发明为制备非洲猪瘟疫苗和诊断试剂提供了新的材料，为制备抗非洲猪瘟病毒药物提供了新的方向。

技术研发人员：王湘如,陈启超,余怡丰,刘李鑫杰,李亮,国师榜,刘占悝,陈焕春
受保护的技术使用者：华中农业大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13