本发明涉及生物,特别涉及一种用于新型冠状病毒核酸检测的标准物质。
背景技术:
1、新冠病毒是一种负链rna病毒,rt-qpcr实时荧光定量是最常用的新冠病毒核酸检测方法。在荧光定量检测过程中,为确保样本采集、核酸提取、rt-qpcr扩增过程准确无误,需要使用核酸检测第三方质控品(属于标准物质种类)来质控荧光定量pcr的整个过程。
2、新城疫(newcastle disease virus,ndv)病毒属于副粘病毒科avulavirus属,是一种负链rna病毒,其基因组包含n、p、m、f、hn和l六大基因以及非编码调控序列,目前,ndv病毒主要是作为重组疫苗的载体进行应用,未见作为质控品的载体的报道。
3、天然病毒能够最真实的模拟核酸提取和rt-qpcr过程,但由于新冠病毒潜在的传染危险性,需要在bsl-iii级以上生物安全实验室获取,目前不会使用新冠病毒作为质控物质。市场上的新冠病毒核酸荧光定量检测的第三方质控品主要包括新冠核酸、慢病毒、噬菌体假病毒几大种类。但都存在一定不足,其中,新冠核酸不易制备,不能监控样本采集过程;慢病毒及噬菌体假病毒制备过程复杂,产能有限,且常常存在质粒残留,不能满足标准物质要求。
技术实现思路
1、本发明的目的在于解决现有质控品存在的上述问题,提供一种用于新型冠状病毒核酸检测的标准物质,不存在质粒dna残留,能完整的质控从核酸提取到荧光定量pcr扩增的整个过程。
2、本发明解决其技术问题所采用的技术方案是:
3、一种用于新型冠状病毒核酸检测的标准物质,所述标准物质是以ndv病毒为载体,插入外源新冠病毒基因序列形成ndv重组病毒载体,ndv重组病毒载体经病毒拯救形成重组ndv病毒,随后利用灭活型病毒保存液将重组ndv病毒稀释5倍以上,测定拷贝数后形成标准物质。
4、标准物质为质控品或阳性参考品。
5、所述灭活型病毒保存液为市售产品,可以采用无胍盐灭活病毒保存液或者含胍盐灭活病毒保存液。
6、作为优选,插入的外源新冠病毒基因序列总长度在60bp-15000bp。可以插入不同长度的序列。
7、作为优选,插入的外源新冠病毒核苷酸序列见seq id no.1所示。
8、作为优选,外源新冠病毒基因序列插入在ndv病毒载体的p基因和m基因之间、插入在ndv病毒载体的m基因和f基因之间或插入在ndv病毒载体的hn基因和l基因之间。
9、一种ndv重组病毒载体,以ndv病毒为载体,插入外源新冠病毒基因序列形成。
10、一种重组ndv病毒,是由ndv重组病毒载体经病毒拯救形成。本发明所形成的重组ndv病毒可以在鸡胚稳定连续传代至少5代。
11、重组ndv病毒的应用,将重组ndv病毒灭活后作为rna类病毒核酸检测的标准物质的应用。
12、本发明的有益效果是:
13、(1)一次制备病毒后可连续传代生产,成本低廉;
14、(2)本发明的标准物质原液可以直接传代,在生产过程中无需质粒参与,不存在质粒dna残留;
15、(3)能完整的质控从核酸提取到荧光定量pcr扩增的整个过程。
1.一种用于新型冠状病毒核酸检测的标准物质,其特征在于,所述标准物质是以ndv病毒为载体,插入外源新冠病毒基因序列形成ndv重组病毒载体,ndv重组病毒载体经病毒拯救形成重组ndv病毒,随后利用灭活型病毒保存液将重组ndv病毒稀释5倍以上,测定拷贝数后形成标准物质。
2.根据权利要求1所述的标准物质,其特征在于,插入的外源新冠病毒基因序列总长度在60bp-15000bp。
3.根据权利要求1所述的标准物质,其特征在于,插入的外源新冠病毒基因核苷酸序列见seq id no.1所示。
4.根据权利要求1所述的标准物质,其特征在于,外源新冠病毒基因序列插入在ndv病毒载体的p基因和m基因之间、插入在ndv病毒载体的m基因和f基因之间或插入在ndv病毒载体的hn基因和l基因之间。
5.一种ndv重组病毒载体,其特征在于,以ndv病毒为载体,插入外源新冠病毒基因序列形成。
6.根据权利要求5所述的ndv重组病毒载体,其特征在于,插入的外源新冠病毒基因序列总长度在60bp-15000bp。
7.根据权利要求5所述的ndv重组病毒载体,其特征在于,插入的外源新冠病毒基因核苷酸序列见seq id no.1所示。
8.根据权利要求5所述的ndv重组病毒载体,其特征在于,外源新冠病毒基因序列插入在ndv病毒载体的p基因和m基因之间、插入在ndv病毒载体的m基因和f基因之间或插入在ndv病毒载体的hn基因和l基因之间。
9.一种重组ndv病毒,其特征在于,是由权利要求5所述的ndv重组病毒载体经病毒拯救形成。
10.如权利要求9所述的重组ndv病毒的应用,其特征在于,将拯救到的重组ndv病毒使用病毒保存液稀释后作为新冠病毒核酸检测的标准物质应用。