一种牛源噬菌体单链抗体库及其构建

本发明属于动物分子生物学领域，涉及一种牛源噬菌体单链抗体库及其构建。

背景技术：

1、研究证明，单链抗体(scfv)是应用前景最广泛的基因工程抗体，将抗体的重链可变区vh基因和轻链可变区vl基因通过一个柔性小肽拼接构建而成，与完整的单链抗体相比，scfv不仅完全保留了与特定抗原的高亲和力，而且其分子量只有完整抗体1/6，分子量小，组织穿透能力强，无fc段，免疫原性产生的副作用小，易于构建。且在疾病的预防、诊断和治疗中均具有重要的应用。

2、利用噬菌体展示技术构建牛源性单链抗体库，为筛选高亲和力的scfv奠定了基础。scfv不仅克服了完整抗体分子不易达到靶细胞、清除慢、易引起超敏反应的弱点，还有利于分子操作，可以与药物和毒素连接，形成免疫药物或者免疫毒素等，利用抗原与抗体特异性结合的特点，定位于靶细胞，对靶细胞进行特异性免疫杀伤，为靶向治疗提供新的途径。

技术实现思路

1、本发明的第一目的是提供一种牛源噬菌体单链抗体库，克服目前尚无利用噬菌体展示技术构建牛源性单链抗体库的问题。

2、本发明的第二目的是提供上述牛源噬菌体单链抗体库的构建方法。

3、本发明通过以下技术方案来实现：

4、一、一种牛源噬菌体单链抗体库，该抗体库是由噬菌体表面展示牛源单链抗体构建而成，所述的单链抗体是由重链可变区vh基因和轻链可变区vl基因通过一个柔性linker拼接构建而成。

5、进一步的，所述的牛源噬菌体单链抗体库的库容量约为2.7×1013pfu/ml。

6、二、一种根据上述的牛源噬菌体单链抗体库的构建方法，该方法包括以下步骤：

7、(1)设计牛源性抗体重链可变区引物和轻链可变区引物，扩增出重链可变区片段和轻链可变区片段；

8、(2)设计带有柔性linker的引物序列，通过扩增将重链可变区片段和轻链可变区片段与linker连接，再通过重叠pcr技术，扩增得到单链抗体scfv；

9、(3)设计带有酶切位点的引物，通过扩增对单链抗体scfv增加酶切位点；

10、(4)将带有酶切位点的scfv片段进行双酶切，连接，转化，酶切鉴定，构建噬菌体单链抗体库。

11、进一步的，步骤(1)中牛源性抗体重链可变区引物序列如下：

12、

13、进一步的，步骤(1)中牛源性抗体轻链可变区引物序列如下：

14、

15、进一步的，步骤(2)中带有柔性linker的引物序列如下：

16、

17、

18、进一步的，步骤(3)中带有酶切位点的引物序列如下：

19、

20、进一步的，所述的引物为简并引物。

21、采用上述技术方案的积极效果：本发明构建的牛源噬菌体单链抗体库解决了牛源性抗体的制备问题，可以根据需要改造抗体的性能，并能通过体外免疫实现在体外制备各种抗体，为筛选特异性抗体研究提供了新的思路。

技术特征：

1.一种牛源噬菌体单链抗体库，其特征在于：该抗体库是由噬菌体表面展示牛源单链抗体构建而成，所述的单链抗体是由重链可变区vh基因和轻链可变区vl基因通过一个柔性linker拼接构建而成。

2.根据权利要求1所述的牛源噬菌体单链抗体库，其特征在于：所述的牛源噬菌体单链抗体库的库容量约为2.7×1013pfu/ml。

3.一种根据权利要求1所述的牛源噬菌体单链抗体库的构建方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：

4.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于：步骤(1)中牛源性抗体重链可变区引物序列如下：

5.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于：步骤(1)中牛源性抗体轻链可变区引物序列如下：

6.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于：步骤(2)中带有柔性linker的引物序列如下：

7.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于：步骤(3)中带有酶切位点的引物序列如下：

8.根据权利要求4-7中任一权利要求所述的构建方法，其特征在于：所述的引物为简并引物。

技术总结
本发明涉及一种牛源噬菌体单链抗体库，该抗体库是由噬菌体表面展示牛源单链抗体构建而成，所述的单链抗体是由重链可变区VH基因和轻链可变区VL基因通过一个柔性Linker拼接构建而成。本发明还涉及了上述牛源噬菌体单链抗体库的构建方法。本发明构建的牛源噬菌体单链抗体库解决了牛源性抗体的制备问题，可以根据需要改造抗体的性能，并能通过体外免疫实现在体外制备各种抗体，为筛选特异性抗体研究提供了新的思路。

技术研发人员：宋博翠,佟春玉,郑小会
受保护的技术使用者：黑龙江八一农垦大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/12